尖叶假龙胆来源的Gen-miR-5在制备防治心肌肥大的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了尖叶假龙胆来源的Gen

【技术实现步骤摘要】
尖叶假龙胆来源的Gen
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miR
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5在制备防治心肌肥大的药物中的应用


[0001]本专利技术属于中药生物
，涉及尖叶假龙胆来源的Gen
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miR
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5在制备防治心肌肥大的药物中的应用。

技术介绍

[0002]尖叶假龙胆(Gentianellaacuta，G.acuta)又名“阿古特
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其其格”，归属“地格达”类蒙药，具有清热解毒的功效，也是目前作为假龙胆属唯一一种具有心脏保护作用的药用植物。蒙古族和鄂温克族猎民长期用G.acuta泡水代茶饮治疗心绞痛等疾病，疗效极为显著。
[0003]近年研究表明，中药来源小RNA可以通过脂质汤剂体和本草体的形式实现稳定递送，并依赖SDIT1蛋白介导胃部吸收，进入哺乳动物体内发挥靶向调控作用
[10]，不仅可以调节人体脂肪代谢，防治肿瘤的发生，甚至能够抑制甲型流感病毒的复制和COVID
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19的发生发展。自此开启了中药来源miRNAs跨物种调节治疗疾病的热点研究。在前期研究中，我们发现了丹参中特异性存在的Sal
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miR
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1和Sal
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miR
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3可以跨物种调控OTUD7B/KLF4/NMHCⅡA通路影响血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换，从而抑制细胞的迁移和粘附，有效改善了血管内膜增生(ZL 201910501245.5)；此外，丹参来源Sal
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miR
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58可以通过调控KLF3/NEDD4L/PFKP轴诱导自噬并减轻VSMC炎症反应(ZL 201910500914.7)。以上结果提示，中药来源miRNAs也与已知的有效成分一样具有治疗疾病的作用，且作用效果显著。
[0004]申请人前期实验已证实，G.acuta来源Gen
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1通过靶向HAX1/HMG20A/Smads轴，减轻心脏成纤维细胞的炎症反应，抑制心肌纤维化的发生(CN202210634779.7)。而G.acuta来源Gen
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5对心肌肥大的药物作用目前尚无报道。
[0005]心脏作为一个高耗能的复杂器官，心肌细胞严重依赖线粒体氧化代谢作为其能量和营养供应的来源，在心肌肥大导致心力衰竭的患者中，常伴有心肌细胞线粒体嵴断裂，线粒体膜电位发生改变，线粒体分裂增加，导致细胞呼吸下降，ATP合成减少。提示心肌细胞线粒体结构损伤和心肌肥大密切相关。因此，维持胞内线粒体结构完整性对心肌细胞的正常运行是至关重要的，线粒体过度分裂是心肌肥大的核心事件。然而，线粒体动力学(线粒体融合/分裂)失衡诱发的心肌肥大中的模式和作用机制仍不清楚。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供尖叶假龙胆来源的Gen
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miR
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5在制备防治心肌肥大的药物中的应用。
[0007]本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：
[0008]SEQ ID NO.1所示的Gen
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miR
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5在制备治疗心肌肥大的药物中的应用。
[0009]作为本专利技术的一种优选，所述的Gen
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miR
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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O
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methylated结构的修饰。
[0010]作为本专利技术的一种优选，所述的Gen
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miR
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5来源于尖叶假龙胆(Gentianella acuta)或直接化学合成。
[0011]作为本专利技术的一种优选，所述Gen
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miR
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5在用于制备治疗心肌肥大导致心力衰竭的药物中的用途。
[0012]含有SEQ ID NO.1所示的Gen
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miR
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5的组合物，所述的Gen
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miR
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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O
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methylated结构的修饰。
[0013]作为本专利技术的一种优选，所述的组合物还含有药用辅料。
[0014]作为本专利技术的一种优选，所述的组合物被制备成脂质体、纳米粒、片剂、胶囊剂或注射剂。
[0015]有益效果：
[0016]本专利技术经对尖叶假龙胆进行二代高通量测序，筛选并鉴定了特异性存在于尖叶假龙胆中的miRNA，将尖叶假龙胆的有效成分单一化并合成、动物模型和体外实验研究抗心肌细胞线粒体分裂的作用机制的研究，发现尖叶假龙胆来源的Gen
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miR
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5在抑制线粒体分裂过程中发挥抗心肌肥大的作用。本专利技术采用了生物化学、分子生物学、组织病理学等方法，研制出具有维持线粒体稳态作用的Gen
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miR
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5，为临床治疗心血管重塑提供一种高效、低毒的新型药物奠定基础，为研发中药治疗心血管重塑提供体内药效学及作用机制及理论实验依据，为科技成果转化创造条件。
附图说明
[0017]图1尖叶假龙胆RNA建库测序流程
[0018]图2尖叶假龙胆来源Gen
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miR
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5二级结构
[0019]图3尖叶假龙胆来源miRNAs分类
[0020]图4尖叶假龙胆特有的miRNAs表达丰度
[0021]图5 qPCR检测H9c2心肌细胞和尖叶假龙胆中miRNAs的表达水平
[0022]图6尖叶假龙胆miRNA生物信息分析流程
[0023]图7尖叶假龙胆miRNA KEGG pathway富集分析
[0024]图8尖叶假龙胆miRNA GO富集分析
[0025]图9 Gen
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miR
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5在组织中的表达水平
[0026]图10.Gen
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miR
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5转染心肌细胞，经高碘酸钠处理，qPCR检测Gen
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miR
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5在细胞中的表达水平
[0027]图11整体心脏组织形态观察
[0028]图12 H&E、Masson、WGA染色观察心脏组织形态
[0029]图13超声心动图测量心功能相关参数
[0030]图14 Western Blot检测心肌肥大相关分子β
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MHC、ANP、BNP表达水平
[0031]图15鬼笔环肽染色观察心肌细胞表面积变化
[0032]图16 Western Blot检测H9c2细胞中线粒体动力学相关分子MFN1、MFN2、DRP1表达水平
[0033]图17 MitoTracker染色观察线粒体形态学变化
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SEQ ID NO.1所示的Gen
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miR
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5在制备治疗心肌肥大的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的Gen
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miR
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5在其3'末端核苷酸上存在2
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O
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methylated结构的修饰。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述的Gen
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miR
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5来源于尖叶假龙胆(Gentianellaacuta)或直接化学合成。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于所述Ge...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨高山，李爱英，宋秋航，刘卫哲，葛鸿瑶，
申请(专利权)人：河北中医学院，
类型：发明
国别省市：