一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法，涉及药物分析技术领域。有关物质包括乙酰半胱氨酸生产和储存过程中引入的杂质和/或降解产物。该检测方法通过高效液相色谱将乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离和检测，其中，高效液相色谱采用以阴阳离子嵌入修饰烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，并采用磷酸水溶液为流动相A和磷酸乙腈溶液为流动相B进行梯度洗脱，以将乙酰半胱氨酸及其有关物质完全分离。本发明专利技术的检测方法可将乙酰半胱氨酸及其有关物质完全分离，从而提高检测的灵敏度和准确度。度和准确度。度和准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析
，特别是一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]乙酰半胱氨酸为合成谷胱甘肽的必需氨基酸，是一种含有巯基的抗氧化剂，具有抗氧化、抗炎、保护肝脏、肺、心脏和神经细胞等作用，用于治疗急性、慢性支气管炎以及其他原因引起的粘痰合并发生的肺部疾病。乙酰半胱氨酸还可用于HIV病毒感染者的治疗，改善由于病毒引起的半胱氨酸缺乏患者的生理和免疫功能。
[0003]目前各国药典对乙酰半胱氨酸的杂质和含量均有严格的规定，其中《中国药典》采用碘量法对乙酰半胱氨酸进行含量测定，但未对有关物质进行规定；《美国药典》使用HPLC(High Performance Liquid Chromatography，高效液相色谱)及ODS(Octadecylsilyl
‑
Silica Gel，十八烷基硅烷键合硅胶)柱，以苯丙氨酸为内标物对乙酰半胱氨酸的含量进行测定，也未对有关物质进行规定；《英国药典》和《欧洲药典》使用HPLC及ODS柱对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分析，该方法所用流动相体系较为简单，但该分析方法流动相中有机相比例偏低(仅为3％)，低于普通ODS柱的承受下限(最低有机相比例为5％)，并且流动相pH较低，长期使用对色谱柱的寿命有影响。
[0004]乙酰半胱氨酸原料药在生产过程和储存过程中容易引入L
‑
胱氨酸、L
‑
半胱氨酸、N,N
′‑
二乙酰胱氨酸等多种有关物质，且乙酰半胱氨酸在一定因素下还可能发生降解，产生降解杂质。目前现有的分析方法不能将乙酰半胱氨酸原料药的有关物质以及降解杂质分离开，导致检测不准确。因此，亟需开发一种更为适宜的乙酰半胱氨酸及其相关物质的检测方法。

技术实现思路

[0005]鉴于上述问题，提出了本专利技术以便提供一种克服上述问题或者至少部分地解决上述问题的乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法。
[0006]本专利技术的一个目的在于提供一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法，可将乙酰半胱氨酸及其有关物质完全分离，从而提高检测的灵敏度和准确度。
[0007]本专利技术的一个进一步的目的在于延长色谱柱的使用寿命。
[0008]根据本专利技术实施例的一方面，提供了一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法，所述有关物质包括乙酰半胱氨酸生产和储存过程中引入的杂质和/或降解产物，所述检测方法通过高效液相色谱将乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离和检测，其中，高效液相色谱采用以阴阳离子嵌入修饰烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，并采用磷酸水溶液为流动相A和磷酸乙腈溶液为流动相B进行梯度洗脱，以将乙酰半胱氨酸及其有关物质完全分离。
[0009]可选地，所述有关物质包括下列至少之一：
[0010]L
‑
胱氨酸、L
‑
半胱氨酸、N,N
‑
二乙酰
‑
L
‑
胱氨酸、N,S
‑
二乙酰
‑
L
‑
半胱氨酸、(2R)
‑2‑
氨基
‑3‑
亚磺基丙酸一水合物、(R)
‑2‑
乙酰氨基
‑3‑
(((R)
‑2‑
氨基
‑2‑
羧乙基)二硫烷基)丙酸、N
‑
(2
‑
巯基乙基)乙酰胺。
[0011]可选地，所述色谱柱为ACE Comixsil ACRP色谱柱。
[0012]可选地，所述梯度洗脱的条件为：
[0013]从0分钟到20分钟流动相A的体积占比从95
‑
100％逐渐变化为15
‑
25％，流动相B的体积占比从0
‑
5％逐渐变化为75
‑
85％；
[0014]从20分钟到22分钟流动相A的体积占比从15
‑
25％逐渐变化为95
‑
100％，流动相B的体积占比从75
‑
85％逐渐变化为0
‑
5％；
[0015]自22分钟始保持流动相A的体积占比为95
‑
100％，流动相B的体积占比为0
‑
5％；
[0016]自32分钟始保持流动相A的体积占比为95
‑
100％，流动相B的体积占比为0
‑
5％直至检测结束。
[0017]可选地，所述梯度洗脱的条件为：
[0018]从0分钟到20分钟流动相A的体积占比从100％逐渐变化为20％，流动相B的体积占比从0％逐渐变化为80％；
[0019]从20分钟到22分钟流动相A的体积占比从20％逐渐变化为100％，流动相B的体积占比从80％逐渐变化为0％；
[0020]自22分钟始保持流动相A的体积占比为100％；
[0021]自32分钟始保持流动相A的体积占比为100％直至检测结束。
[0022]可选地，所述流动相A中水与磷酸的体积比为100:0.03，所述流动相B中乙腈与磷酸的体积比为100:0.03。
[0023]可选地，所述高效液相色谱的流速为0.8
‑
1.2ml/min，柱温为25
‑
35℃，检测波长为220nm，进样温度为5℃。
[0024]可选地，所述高效液相色谱的柱温为30℃。
[0025]可选地，所述检测方法具体包括以下步骤：
[0026]将待检测的乙酰半胱氨酸样品溶解于盐酸中并以稀释剂稀释制成第一浓度的供试品溶液；
[0027]将乙酰半胱氨酸对照品溶解于所述稀释剂中制成第二浓度的对照品溶液；
[0028]精密称量乙酰胺胱氨酸和各有关物质适量，并共同溶解于所述稀释剂中制成含第三浓度的乙酰半胱氨酸和第四浓度的各有关物质的系统适用性溶液；
[0029]取所述系统适用性溶液进样进行高效液相色谱分析，以确定乙酰半胱氨酸和各所述有关物质的保留时间；
[0030]分别取所述供试品溶液和所述对照品溶液进样进行高效液相色谱分析，通过加校正因子的主成分外标法计算所述供试品溶液中乙酰半胱氨酸和各有关物质的含量。
[0031]可选地，所述第三浓度与所述第四浓度的比例在150:1至250:1范围内；
[0032]所述第一浓度在所述第三浓度的
±
10％范围内；
[0033]所述第二浓度在所述第四浓度的
±
10％范围内。
[0034]本专利技术提供的乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法中，有关物质包括乙酰半胱氨酸生产和储存过程中引入的杂质和/或降解产物，通过高效液相色谱将乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离和检测，其中高效液相色谱采用以阴阳离子嵌入修饰烷基键合硅胶为
固定相的色谱柱，且采用梯度洗脱方式，可实现乙酰半胱氨酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乙酰半胱氨酸及其有关物质的检测方法，所述有关物质包括乙酰半胱氨酸生产和储存过程中引入的杂质和/或降解产物，其特征在于，通过高效液相色谱将乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离和检测，其中，高效液相色谱采用以阴阳离子嵌入修饰烷基键合硅胶为固定相的色谱柱，并采用磷酸水溶液为流动相A和磷酸乙腈溶液为流动相B进行梯度洗脱，以将乙酰半胱氨酸及其有关物质完全分离。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述有关物质包括下列至少之一：L
‑
胱氨酸、L
‑
半胱氨酸、N,N
‑
二乙酰
‑
L
‑
胱氨酸、N,S
‑
二乙酰
‑
L
‑
半胱氨酸、(2R)
‑2‑
氨基
‑3‑
亚磺基丙酸一水合物、(R)
‑2‑
乙酰氨基
‑3‑
(((R)
‑2‑
氨基
‑2‑
羧乙基)二硫烷基)丙酸、N
‑
(2
‑
巯基乙基)乙酰胺。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为ACE Comixsil ACRP色谱柱。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的条件为：从0分钟到20分钟流动相A的体积占比从95
‑
100％逐渐变化为15
‑
25％，流动相B的体积占比从0
‑
5％逐渐变化为75
‑
85％；从20分钟到22分钟流动相A的体积占比从15
‑
25％逐渐变化为95
‑
100％，流动相B的体积占比从75
‑
85％逐渐变化为0
‑
5％；自22分钟始保持流动相A的体积占比为95
‑
100％，流动相B的体积占比为0
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：竺福江，李健，
申请(专利权)人：杭州民生药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：