【技术实现步骤摘要】
本申请涉及高效液相色谱分析，尤其是涉及一种贝美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分含量的检测方法。
技术介绍
1、贝美素噻吗洛尔滴眼液为以贝美前列素与噻吗洛尔为主要成分组成的复方制剂。贝美前列素为一种合成的前列酰胺，是具有降低眼压活性的前列腺素结构类似物。贝美前列素选择性地模拟了前列酰胺的作用，通过增加房水经小粱网及葡萄巩膜两条外流途径而降低眼压(iop)。噻吗洛尔是一种非选择性β-肾上腺能受体阻滞剂，对高眼压患者和正常人均有降低眼压作用。噻吗洛尔的降低眼压确切机理尚不清楚，眼压描记和房水荧光光度研究提示其降眼压作用与减少房水生成有关。噻吗洛尔没有明显的内源性拟交感活性和局麻作用，对心肌无直接抑制作用。
2、通常来说，复方药物双组分含量均需要测定，尤其在药物生产过程中需对中间体药液的双组分含量进行测定。目前，贝美素噻吗洛尔滴眼液质量标准在美国药典、日本药典、国家药品监督管理局进口药品注册标准等均未有收载。有鉴于此，开发一种专属性强、高效且精确的分析方法，对贝美素噻吗洛尔滴眼液中双组分含量同时快速的检测，具有重要意义。
技术实现思路
1、为了解决现有技术的不足，本申请提供一种贝美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分含量的检测方法，该方法可以同时快速测定贝美素噻吗洛尔滴眼液中的噻吗洛尔和贝美前列素的含量，对于实现贝美素噻吗洛尔滴眼液的质量控制具有极其重要的意义。
2、为此，本申请第一方面提供了一种贝美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分含量的检测方法，所述方法采用hplc法进行检测，检测步骤
3、本申请所述检测方法采用贝美素噻吗洛尔滴眼液的稀释液作为供试品溶液，检测前仅需对贝美素噻吗洛尔滴眼液进行简单的水稀释后即可进行进样检测。检测过程中采用特定的流动相对色谱柱中的供试品溶液进行梯度洗脱，使供试品溶液中的噻吗洛尔和贝美前列素有效分离，洗脱后的洗脱液可以直接进入到检测器中进行检测，检测后的色谱图会在噻吗洛尔和贝美前列素所对应的保留时间位置出峰，根据峰面积和构建的标准曲线，通过外标法即可计算出噻吗洛尔和贝美前列素的含量。本申请所述方法能够对贝美素噻吗洛尔滴眼液中的噻吗洛尔和贝美前列素的含量进行同时快速检测，且该方法具有专属性强、高效精确、重复性及耐用性良好，结果稳定可靠等优点，对于实现贝美素噻吗洛尔滴眼液的质量控制具有极其重要的意义。
4、本申请所述方法检测过程中采用的流动相包括特定的流动相a-磷酸二氢钠缓冲液和甲醇以及特定的流动相b-乙腈，采用上述组成的流动相进行梯度洗脱能够对供试品溶液中的噻吗洛尔和贝美前列素进行有效分离，且贝美素噻吗洛尔滴眼液中的辅料对主要成分的检测均无干扰，检测结果的出峰效果好。
5、本申请中，所述美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分为噻吗洛尔和贝美前列素，其结构式分别如下：
6、
7、在一些实施方式中，所述流动相a中磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的体积比为(60～65):(35～40)。
8、在一些优选的实施方式中，所述流动相a中磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的体积比为65:35。
9、本申请中，流动相的组成对被检测组分的有效分离具有重要影响，合适的流动相能使被检测组分出峰效果好，进而能提高检测结果的准确性和稳定性。本申请通过将流动相a中磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的体积比控制在上述范围内，能够对贝美素噻吗洛尔滴眼液中的成分进行有效分离，使噻吗洛尔和贝美前列素出峰的峰形好，检测结果的准确性高。
10、在一些实施方式中，所述磷酸二氢钠缓冲液中磷酸二氢钠的浓度为10～12g/l，ph值为2.6～3.0。
11、在一些优选的实施方式中，所述磷酸二氢钠缓冲液中磷酸二氢钠的浓度为11g/l，ph值为2.8。
12、本申请通过将磷酸二氢钠缓冲液中磷酸二氢钠的浓度和ph值控制在上述范围内，能够进一步提高分离效果。
13、本申请中，磷酸二氢钠缓冲液可以通过向磷酸二氢钠水溶液中加入磷酸调节至所需的ph值后得到。
14、在一些实施方式中，所述流动相进行梯度洗脱的流速为0.9～1.1ml/min；所述梯度洗脱设置如下：
15、0～6min：95～100％a，5～0％b→65～75％a，35～25％b；
16、6～10min：65～75％a，35～25％b→55～65％a，45～35％b；
17、10～16min：55～65％a，45～35％b；
18、16～17min：55～65％a，45～35％b→95～100％a，5～0％b；
19、17～22min：95～100％a，5～0％b。
20、本申请中，梯度洗脱的流动相体积百分比组成具体如表1所示。
21、表1
22、
23、在一些优选的实施方式中，所述流动相进行梯度洗脱的流速为1.0ml/min；所述梯度洗脱设置如下：
24、0～6min：100％a，0％b→70％a，30％b；
25、6～10min：70％a，30％b→60％a，40％b；
26、10～16min：60％a，40％b；
27、16～17min：60％a，40％b→100％a，0％b；
28、17～22min：100％a，0％b。
29、梯度洗脱的原理为采用几种不同极性的溶剂形成流动相，通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子k，并使待测样品中的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。本申请通过采用特定体积比组成的磷酸二氢钠缓冲液和甲醇作为流动相a和采用乙腈作为流动相b，在上述梯度洗脱流速和梯度洗脱程序设置条件下，能够使供试品溶液中噻吗洛尔和贝美前列素的分离效率和分离效果最佳，提升柱效和检测结果的准确性。
30、在一些实施方式中，所述色谱柱中的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶颗粒，所述十八烷基硅烷键合硅胶颗粒的粒径为2～5μm。
31、在一些优选的实施方式中，所述十八烷基硅烷键合硅胶颗粒的粒径为4μm。
32、本申请采用上述粒径范围内的十八烷基硅烷键合硅胶颗粒作为填充剂固定相，利用该固定相配合上述的流动相，在特定的洗脱程序下能够对供试品溶液中所有成分进行有效分离，使噻吗洛尔和贝美前列素出峰效果好。
33、在一些实施方式中，所述色谱柱的柱温为35～45℃，优选为40℃。
34、本申请中，色谱柱的柱温会对分离效果产生影响。本申请通过选用上述柱温能使供试品溶液的分离效果好。
35、在一些实施方式中，所述紫外检测器的检测波长为205～2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种贝美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分含量的检测方法，其特征在于，所述方法采用HPLC法进行检测，检测步骤包括：将贝美素噻吗洛尔滴眼液的稀释液作为供试品溶液进样至色谱柱中，然后采用流动相对所述色谱柱进行梯度洗脱，洗脱液进入紫外检测器中进行检测，获得检测结果；所述流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A由磷酸二氢钠缓冲液和甲醇组成，所述流动相B为乙腈；所述主要成分为噻吗洛尔和贝美前列素。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A中磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的体积比为（60~65）:（35~40）。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠缓冲液中磷酸二氢钠的浓度为10~12g/L，pH值为2.6~3.0。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相进行梯度洗脱的流速为0.9~1.1mL/min；所述梯度洗脱设置如下：
5.根据权利要求4 所述的检测方法，其特征在于，所述流动相进行梯度洗脱的流速为1.0mL/min；所述梯度洗脱设置如下：
6.根据权利要求1或2所述的
7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的柱温为35~45℃；和/或所述紫外检测器的检测波长为205~215nm。
8.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液噻吗咯尔的浓度为0.8~1.2mg/mL，贝美前列素浓度为0.05~0.07mg/mL。
9.根据权利要求1或2所述的的检测方法，其特征在于，所述方法还包括如下步骤：配制含噻吗洛尔和贝美前列素的系统适用性溶液，对所述系统适用性溶液进行进样检测，确定噻吗洛尔和贝美前列素的保留时间；所述系统适用性溶液中噻吗咯尔的浓度为0.8~1.2mg/mL，贝美前列素浓度为0.05~0.07mg/mL。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：配制系列浓度的含噻吗洛尔和贝美前列素的线性对照溶液，对所述线性对照溶液分别进行进样检测；根据所确定的噻吗洛尔和贝美前列素的保留时间，获取所述线性对照溶液中噻吗洛尔和贝美前列素的峰面积，进而分别建立噻吗洛尔浓度与峰面积的标准曲线和贝美前列素浓度与峰面积的标准曲线，以对供试品溶液中噻吗洛尔和贝美前列素进行定量检测。
...【技术特征摘要】
1.一种贝美素噻吗洛尔滴眼液中主要成分含量的检测方法，其特征在于，所述方法采用hplc法进行检测，检测步骤包括：将贝美素噻吗洛尔滴眼液的稀释液作为供试品溶液进样至色谱柱中，然后采用流动相对所述色谱柱进行梯度洗脱，洗脱液进入紫外检测器中进行检测，获得检测结果；所述流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a由磷酸二氢钠缓冲液和甲醇组成，所述流动相b为乙腈；所述主要成分为噻吗洛尔和贝美前列素。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相a中磷酸二氢钠缓冲液和甲醇的体积比为（60~65）:（35~40）。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钠缓冲液中磷酸二氢钠的浓度为10~12g/l，ph值为2.6~3.0。
4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述流动相进行梯度洗脱的流速为0.9~1.1ml/min；所述梯度洗脱设置如下：
5.根据权利要求4 所述的检测方法，其特征在于，所述流动相进行梯度洗脱的流速为1.0ml/min；所述梯度洗脱设置如下：
6.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱中的填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶颗粒，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张爱洁，许冰融，竺昱祺，杨如意，姜滢滢，邵雷鸣，
申请(专利权)人：杭州民生药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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