一种具有跨种裂解能力的弧菌噬菌体PC-Liy1、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种具有跨种裂解能力的弧菌噬菌体PC

【技术实现步骤摘要】
一种具有跨种裂解能力的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1、制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种弧菌噬菌体PC
‑
Liy1、弧菌噬菌体 PC
‑
Liy1所制备的生物抗菌剂及其应用。

技术介绍

[0002]弧菌是一种需氧兼性厌氧的革兰氏阴性菌，在海洋环境中最常见的细菌类群 之一，广泛存在于近岸海域的海水和海洋生物体中。近年来，随着人类对海产品 需求量和消费量的不断增加，我国水产养殖业蓬勃发展，集约化水产养殖程度越 来越高，养殖密度的扩大使养殖动物的发病率不断升高。海水养殖动物常见的且 危害性最大的细菌性疾病主要是因弧菌引起的弧菌病。弧菌病可导致虾、鱼类、 贝类及甲壳类的大量死亡。霍乱弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌和哈维氏弧菌等 都是常见的条件致病菌。霍乱弧菌所引起的霍乱烈性肠道传染病具有发病急、传 播速度快、传染范围广等特点，一旦感染，给水产养殖业带来巨大经济损失。霍 乱弧菌也是人类食用海鲜产品而食物中毒的主要元凶，严重影响许多国家的健康 和安全。溶藻弧菌是一种食源性致病菌，可危害鱼类、虾类等多种水生动物，对 人也有致病性。副溶血性弧菌是一种嗜盐菌，通常存在于水产品中，进食含有该 菌的食物可致食物中毒。
[0003]当前对于海水养殖环境中弧菌的控制，及由弧菌引起的水产养殖动物疾病的 防治主要以抗生素和消毒剂为主，抗生素的不合理使用导致细菌出现耐药性，这 些耐药菌株的产生对人类健康形成潜在危险，此外，抗生素在环境中残留也会破 坏生态环境。抗生素和消毒剂能够抑制或杀死有益微生物，破坏水生动物体内外 微生态平衡，降低自身免疫力。因此，寻求一套有效的抑制致病性弧菌的方法迫 在眉睫。
[0004]弧菌噬菌体广泛存在于海水中，是天然的生物抑菌剂，具有研发周期短、研 发成本低、增殖能力强等优势。近年来，噬菌体疗法已在医学、制药、水产养殖、 食品加工等领域被广泛关注。在水产养殖上，弧菌噬菌体对控制弧菌的研究取得 一定进展。因为噬菌体的高度专一性，大多数只能感染一种宿主菌，而实际养殖 环境中弧菌种类多种多样，目前高专一性的噬菌体无法养殖环境多样性和复杂性 的需求，文献中也未见有高效裂解多种致病弧菌噬菌体的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供了一种可以高效裂解多种弧菌的噬菌体PC
‑
Liy1，及其在水产养 殖环境中抑制弧菌的应用。
[0006]本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术提供了一种具有高效跨种裂解能力的弧 菌噬菌体PC
‑
Liy1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保 藏编号为CGMCC No.23369，保藏时间为2021年12月13日。
[0007]进一步的，所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1在2216E平板上形态为圆形透亮直径约 1～
2mm的噬菌斑。透射电镜显示弧菌噬菌体PC
‑
Liy1头部呈长二十面体，头部 长度为100～110nm，宽度为75～85nm，尾部长度为95～100nm，在2216E平板上 形态为圆形透亮直径为1～2mm的噬菌斑，可观察到收缩性尾鞘，尾部末端可见 尾丝，属于肌尾噬菌体科(Myoviridae)。
[0008]所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1的潜伏期约为30min，裂解期在30～100min，裂解 量为70PFU/CFU。
[0009]进一步的，所述弧菌噬菌体耐受45～70℃温度。
[0010]进一步的，所述弧菌噬菌体适宜生存的pH值为4～10。
[0011]进一步的，所述弧菌噬菌体对氯仿不敏感。
[0012]进一步的，所述弧菌噬菌体能够裂解多种致病性弧菌。
[0013]进一步的，所述弧菌噬菌体PC1
‑
Liy1为线性双链DNA，基因组大小为 246,348bp，GC％含量为42.6％。
[0014]本专利技术提供了一种弧菌噬菌体PC
‑
Liy1在制备抑制生物抗菌剂中的用途。
[0015]进一步的，所述的生物抗菌剂可以同时抑制多种致病性弧菌。
[0016]进一步的，所述的致病性弧菌为霍乱弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌、拟态 弧菌、新喀里多尼亚弧菌、希瓦氏弧菌。
[0017]进一步的，所述的弧菌噬菌体对酵母菌、芽孢菌、乳杆菌及肠杆菌都不敏感。
[0018]本专利技术提供了一种生物抗菌剂的制备方法，其特征在于，所述的弧菌噬菌体 PC
‑
Liy1生产生物抗菌剂的步骤如下：
[0019]1)将宿主菌溶藻弧菌VA5接种到种子培养基中，然后将溶藻弧菌VA5与 所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1混合接种到种子培养基中，37℃摇床振荡培养，制备宿 主菌溶藻弧菌VA5和所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1的种子液；
[0020]2)在发酵罐中加入所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1的发酵培养基并灭菌，将接种 宿主菌接种弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，进行发酵得到发酵混合液；
[0021]3)将所述的发酵混合液经离心膜过滤去除宿主菌VA5，得到弧菌噬菌体 PC
‑
Liy1液体制剂。
[0022]进一步的，所述步骤(2)中温度设定为35～40℃，通气条件下发酵时间为 10～12h。
[0023]进一步的，所述制备方法步骤(2)中噬菌体的感染复数为0.1，搅拌桨转速 为40～80r/min，所述弧菌噬菌体PC
‑
Liy1的最佳感染复数为0.1，搅拌桨转速为 40～80r/min。
[0024]进一步的，所述制备方法中的发酵培养基为每升海水中含5.0～10.0g蛋白胨 和1.0～4.0g酵母浸粉。
[0025]本专利技术提供了一种噬菌体PC
‑
Liy1及其生物抑菌剂能够有效控制水体、养殖 环境、其他环境的弧菌的用途。
[0026]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
[0027]1)本专利技术分离得到一株新的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，该噬菌体可以高效裂解致病 性弧菌，且具有高效的跨种裂解能力，除可以裂解实验室分离到的3株霍乱弧菌 外还可以裂解溶藻弧菌、副溶血弧菌和拟态弧菌，对部分希瓦氏弧菌和新喀里多 尼亚弧菌也有裂解能力。对溶藻弧菌和副溶血弧菌的裂解率分别为82％和71％， 而对大肠杆菌、酵母菌、乳杆菌
及芽孢杆菌不敏感。
[0028]2)该噬菌体可耐受45
‑
70℃，pH值在4～10范围内可以保持109PFU/mL的高裂 解活性。
[0029]3)该噬菌体是天然的生物净化因子分离于自然环境中，在对虾水产养殖过程可 以有效控制弧菌生长，可应用于水产养殖弧菌病害的防控。将噬菌体制成生物抗 菌剂后，泼洒在水产养殖虾池中，可以在至少24h内稳定控制弧菌增长。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有高效跨种裂解能力的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，已保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23369，保藏时间为2021年12月13日。2.根据权利要求1所述的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，其特征在于，所述噬菌体头部呈长二十面体，头部长度为100~110nm，宽度为75~85nm，尾部长度为95~100nm，在2216E固体培养基上形态为圆形透亮直径为1~2mm的噬菌斑。3.根据权利要求1所述的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，其特征在于，所述弧菌噬菌体耐受45~70℃，适宜生存的pH值为4~10，对氯仿不敏感。4.根据权利要求1所述的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，其特征在于，所述弧菌噬菌体能够裂解多种致病性弧菌。5.根据权利要求1所述的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1，其特征在于，所述弧菌噬菌体PC1
‑
Liy1为线性双链DNA，基因组大小为246,348bp。6.权利要求1所述的弧菌噬菌体PC
‑
Liy1在制备生物抗菌剂中的用途。7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的生物抗菌剂可以同时抑制多种致病性弧菌。8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述的致病性弧菌为霍乱弧菌、溶藻弧菌、副溶血性弧菌、拟态弧菌、新喀里多尼亚弧菌、希瓦氏弧菌。9.一种弧菌噬菌体PC

【专利技术属性】
技术研发人员：何增国，李映，汤伟，吴春光，付静芸，张军，孙晓雯，唐涛，
申请(专利权)人：青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：