一种定量分析血浆中氘代脱氢3-苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种定量分析血浆中氘代脱氢3

【技术实现步骤摘要】
一种定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物动力学和血药浓度监测应用领域，具体涉及一种定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法。

技术介绍

[0002]普那布林作为一种新的血管阻断剂，能引发JNK介导的细胞凋亡并抑制多发性骨髓瘤细胞的血管生成(Singh,AV,Bandi,M,Raje,N et al.A novel vascular disrupting agent plinabulin triggers JNK
‑
mediated apoptosis and inhibits angiogenesis in multiple myeloma cells.Blood 2011,117(21),5692
‑
700)。(3Z，6Z)
‑3‑
苯亚甲基
‑6‑
[(5
‑
叔丁基
‑
1H
‑
咪唑
‑4‑
基)氘代亚甲基]哌嗪
‑
2，5
‑
二酮，是一种氘取代的普那布林衍生物，在体外和体内试验中显示出更好的药代动力学特性和抗肿瘤效果，其结构式如下：
[0003][0004]近几年随着液相色谱
‑
串联质谱(LC
‑
MS/MS)方法在生物样品分析中的广泛应用，为了能更加高效的开展氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物在体内的吸收、分布、代谢、排泄等有关特征的动物和人体的药代动力学研究，有必要建立一种能够定量分析且灵敏、高效、前处理简单的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法。所述检测方法预处理简单、血浆用量少、专属性强、准确度高、分析时间短、重现性好、峰形良好。
[0006]为实现上述专利技术的目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]本专利技术提供了一种定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0008](1)血浆样品的采集与处理：采集给予氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物处理后的血液样本，离心获取血浆样品，加入含内标的乙腈溶液沉淀蛋白后，离心取上清液，得到待检测的血浆样品；
[0009](2)采用液质联用系统检测血浆样品：以液相色谱为分离系统，流动相A为含甲酸的水溶液，流动相B为含甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱；以质谱作为检测系统，采用ESI离子源，
多级反应监测MRM模式进行正离子检测，定量分析的离子分别为氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物：m/z 338.1
→
310.2，内标IS：m/z 260.1
→
116.1。
[0010]进一步的，在所述步骤(2)检测时，氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物碰撞能量为22V，内标碰撞能量为15V。
[0011]进一步的，所述内标为浓度为10ng/mL的普萘洛尔。
[0012]进一步的，所述步骤(1)具体为：采集0.25mL氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物处理后的血液样本，经低温高速离心后，取100μL的上清液，为血浆样品；在100μL的血浆样品中加入10μL浓度为60％的乙腈水溶液以及200μL含普萘洛尔的乙腈溶液，涡旋混合均匀后，4℃，14000r/min离心10min，取上清液200μL，得到待检测的血浆样品。
[0013]进一步的，所述步骤(2)中，液质联用系统为液相色谱仪和三重四极杆液质联用仪。
[0014]进一步的，所述步骤(2)中，液相色谱的色谱柱为2.0mm
×
50mm，5μm的Capcell Pak C
18 MGШ，柱温：30℃；流动相流速为400μL/min；进样量：2μL；所述流动相中的甲酸浓度为0.1％。
[0015]进一步的，所述步骤(2)中，流动相配比随时间的变化为：
[0016][0017][0018]进一步的，所述氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物的出峰时间为：1.76min；内标普萘洛尔的出峰时间为：1.58min。
[0019]进一步的，所述步骤(2)中，质谱的条件为干燥气温度：350℃；干燥气流速：11L/min；雾化器压力：30psi；毛细管电压：4000V(+)；检测方式：MRM。
[0020]进一步的，所述检测方法对氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物定量分析的线性范围为2ng/mL
‑
2000ng/mL，最低定量下限为2ng/mL。
[0021]进一步的，所述氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物为(3Z，6Z)
‑3‑
苯亚甲基
‑6‑
[(5
‑
叔丁基
‑
1H
‑
咪唑
‑4‑
基)氘代亚甲基]哌嗪
‑
2，5
‑
二酮。
[0022]综上，本专利技术提供的一种定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，包括以下具体步骤：
[0023](1)采集0.25mL氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物处理后的血液样本，经低温高速离心机离心后，取100μL的上清液，为血浆样品；
[0024]在100μL血浆样品中加入10μL浓度为60％的乙腈水溶液以及200μL含浓度为10ng/mL的普萘洛尔的乙腈溶液，涡旋混合后，4℃，14000r/min离心10min，取上清液2000μL，得到待检测的血浆样品，后续以2μL进样分析；
[0025](2)以液相色谱作为分离系统对所述待检测的血浆样品进行分离，色谱柱采用2.0mm
×
50mm，5μm的Capcell Pak C
18 MGШ，柱温：30℃；流动相A为含0.1％甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱，流动相配比随时间的变化如下：
[0026][0027]其中流动相流速：400μL
·
min
‑1；进样量：2μL；
[0028]氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物的出峰时间为：1.76min；内标普萘洛尔的出峰时间为：1.58min；
[0029](3)以质谱作为检测系统，采用的离子源为ESI离子源，多级反应监测MRM模式进行正离子检测，定量分析的离子分别为氘代脱氢3<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种定量分析血浆中氘代脱氢3
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苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)血浆样品的采集与处理：采集给予氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物处理后的血液样本，离心获取血浆样品，加入含内标的乙腈溶液沉淀蛋白后，离心取上清液，得到待检测的血浆样品；(2)采用液质联用系统检测血浆样品：以液相色谱为分离系统，流动相A为含甲酸的水溶液，流动相B为含甲酸的乙腈溶液，梯度洗脱；以质谱作为检测系统，采用ESI离子源，多级反应监测MRM模式进行正离子检测，定量分析的离子分别为氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物：m/z 338.1
→
310.2，内标IS：m/z 260.1
→
116.1。2.根据权利要求1所述的定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，其特征在于，在所述步骤(2)检测时，氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物碰撞能量为22V，内标碰撞能量为15V。3.根据权利要求1所述的定量分析血浆中氘代脱氢3
‑
苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，其特征在于，所述内标为浓度为10ng/mL的普萘洛尔。4.根据权利要求3所述的定量分析血浆中氘代脱氢3
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苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物血药浓度的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)具体为：采集0.25mL氘代脱氢3
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苯甲酰苯基阿夕斯丁类化合物处理后的血液样本，经低温高速离心后，取100μL的上清液，为血浆样品；在100μL的血浆样品中加入10μL浓度为60％的乙腈水溶液以及200μL含普萘洛尔的乙腈溶液，涡旋混合均匀后，4℃，14000r/min离心10min，取上清液200μL，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵建春，陈丹，管禄诗，
申请(专利权)人：青岛海洋生物医药研究院股份有限公司，
类型：发明
国别省市：