热激蛋白HSP90抑制剂-坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了热激蛋白HSP90抑制剂

【技术实现步骤摘要】
热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用


[0001]本专利技术涉及医药用途领域，具体是热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用。

技术介绍

[0002]草鱼一直居于我国水产养殖品种之首，由草鱼呼肠孤病毒(GCRV)引起的草鱼出血病每年都给草鱼养殖业带来巨大的经济损失，该疾病具有严格的温度依赖性，发病周期明显，一般在春秋季节，水温在25℃时发病，目前还没有针对该疾病的药物上市。
[0003]草鱼呼肠孤病毒(GCRV)与正呼肠孤病毒具有相似的形态结构特征，是二十面体的双链RNA病毒，直径约70nm，病毒核心直径约50nm，无囊膜，最外层为7种衣壳蛋白(VP1
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VP7)，负责病毒侵染，其中，构成病毒外衣壳的VP5和VP7蛋白可能与病毒感染宿主通过细胞膜有关。该病毒具有11条基因片段，每条片段均包含一个开放阅读框，S1和M3片段分别编码病毒外衣壳不同的多肽，L1、L2、L3、M4、M5和S10分别编码病毒的核心衣壳。
[0004]因此，亟需一种药物来抑制草鱼呼肠孤病毒，来确保草鱼的养殖产量。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0007]热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，所述热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在抑制草鱼呼肠孤病毒结合到细胞表面及入侵的应用。
[0008]作为本专利技术进一步的方案：热激蛋白HSP90是广泛分布于原核和真核生物中的一类伴侣蛋白，在应激状态下大量合成，应激状态包括温度应激和病毒感染，合成机理为处于HSP90基因启动子上游的热休克因子(HSF)在受到热应激或病毒感染外界环境胁迫时，热休克因子结合单位会形成三聚体，激活热休克因子(HSF)，启动HSP90转录。
[0009]作为本专利技术进一步的方案：真核生物热激蛋白HSP90的C末端都有一个负电荷区域，该区域最末端的四个氨基酸为KDEL，这一区域的电荷分配决定了HSP90与激素受体、癌基因产物之间的调节关系。
[0010]作为本专利技术进一步的方案：热激蛋白HSP90分为HSP90α，HSP90β两类，它们以同源二聚体的形式存在于细胞内，含有三个特殊结构域，HSP90α更易受热应激的诱导，在温度应激条件下，HSP90α上调，使机体做出正确的应答。
[0011]作为本专利技术进一步的方案：热激蛋白HSP90的蛋白表面的两个高极性氨基酸的A、B区，参与蛋白之间的互作，形成α螺旋，构成三个分开的球形结构。
[0012]作为本专利技术再进一步的方案：热激蛋白HSP90的每个亚单位组成三个功能域，一个含有四氯肽重复结合基序的C末端二聚体化域，一个中间域，一个N末端结构域，N端区域有
ATP结合位点，热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素可以锁定ATP的结合区，阻止ATP与热激蛋白HSP90结合，导致热激蛋白HSP90失活。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0014]本专利技术通过体外细胞实验证明热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素(17
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AAG)具有抗GCRV病毒作用；以及其作用方式为通过阻止GCRV病毒外衣壳蛋白与细胞表面受体结合，进而抑制病毒入胞而具有抗病毒功效。并且专利技术首次发现17
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AAG具有抵抗GCRV病毒感染草鱼的功能，为预防或治疗GCRV感染草鱼提供潜在策略。
附图说明
[0015]图1为热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素对呼肠孤病毒感染草鱼性腺细胞系(GCO)及草鱼肾细胞系(CIK)抑制作用图。
[0016]图2为热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素影响病毒外衣壳蛋白VP7与细胞的HSP90互作。
[0017]图3为热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素抑制病毒外衣壳蛋白VP7促进草鱼呼肠孤病毒入胞作用图。
[0018]图4为热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素对草鱼细胞无毒害作用图。
具体实施方式
[0019]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素(17
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AAG)在细胞和分子水平上都能对GCRV感染草鱼细胞系有抑制作用，暗示17
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AAG可以做为潜在的抗草鱼出血病病毒药物而进一步研究开发。首先从正反两方面验证：HSP90转染草鱼性腺细胞和草鱼肾细胞后能促进GCRV感染，用17
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AAG处理草鱼肾细胞后能抑制GCRV感染；其次，17
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AAG能抑制HSP90与病毒外衣壳蛋白VP7互作；再次，17
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AAG能够抵消VP7蛋白促进GCRV感染细胞的作用，从而减少病毒侵入细胞。
[0021]实验一
[0022]热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素(17
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AAG)对GCRV感染草鱼性腺细胞系(GCO)及草鱼肾细胞系(CIK)的抑制作用。
[0023]实验材料
[0024]1、细胞、病毒毒株
[0025]草鱼肾细胞系(CIK)、草鱼性腺细胞系(GCO)由本实验室保存、GCRV毒株由本实验室保存。
[0026]2、试剂及试剂盒
[0027]M199培养基及胎牛血清(Gibco)、Hsp90抗体、17
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AAG、RNA提取、逆转录酶、荧光定量。
[0028]仪器耗材
[0029]细胞培养皿、细胞培养板、细胞培养瓶、离心机、二氧化碳培养箱、细胞操作台、纯水系统、荧光定量PCR系统。
[0030]实验方法
[0031]1、细胞复苏及传代培养
[0032]1)从液氮中取出CIK或GCO细胞，37℃水浴迅速融化；
[0033]2)用75％洒精消毒冻存管，置于消杀过的生物安全柜中；
[0034]3)用移液管吸取5mL含10％血清的M199培养基到T25细胞培养瓶中，再用吸管将融化的细胞液转移至培养瓶，并轻轻吹找一遍，再置于28℃细胞培养箱中，5％二氧化碳，静置培养8小时；
[0035]4)待细胞贴壁后，更换新的培养基，以除去细胞冻存液中的DMS本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，其特征在于，所述热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在抑制草鱼呼肠孤病毒结合到细胞表面及入侵的应用。2.根据权利要求1所述的热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，其特征在于，热激蛋白HSP90是广泛分布于原核和真核生物中的一类伴侣蛋白，在应激状态下大量合成，应激状态包括温度应激和病毒感染，合成机理为处于HSP90基因启动子上游的热休克因子(HSF)在受到热应激或病毒感染外界环境胁迫时，热休克因子结合单位会形成三聚体，激活热休克因子(HSF)，启动HSP90转录。3.根据权利要求1所述的热激蛋白HSP90抑制剂
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坦螺旋霉素在制备抗草鱼呼肠孤病毒药物中的应用，其特征在于，真核生物热激蛋白HSP90的C末端都有一个负电荷区域，该区域最末端的四个氨基酸为KDEL，这一区域的电荷分配决定了HSP90与激素受体、癌基因产物之间的调节关系。4.根据权利要求1所述的热激蛋白HSP...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯国力，李军华，肖调义，张永安，刘晓燕，胡亮，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：