基于OMP基因的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌亚洲种的区分方法技术

本发明专利技术公开了一种柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌亚洲种病菌分子分型方法，该方法采用首次公开的病菌OMP基因组上的18个变异位点，并结合DNA琼脂糖凝胶电泳方法，对国内外柑橘黄龙病菌进行分子分型。将该病原菌的OMP基因片段连接到KPN I和BAM HI的T载体上，转入大肠杆菌培养后挑取单克隆菌落经琼脂糖凝胶电泳，获得阳性克隆子，测序进行聚类分析，可将国内外的柑橘黄龙菌亚洲种有效区分开来。本发明专利技术方法所发现的18个位点为首次发现，可以用于柑橘黄龙病菌病菌分类鉴定和遗传多样性研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌亚洲种的区分方法，具体地涉及一种基于omp基因的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌亚洲种的区分方法。

技术介绍

1、柑橘黄龙病是世界柑橘生产上的毁灭性病害，是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起，能够侵染包括柑橘属、枳属、金柑属和九里香等多种芸香科植物。柑橘黄龙病全年都能发生，春、夏、秋梢均可出现症状。新梢叶片有三种类型的黄化。即均匀黄化、斑驳黄化和缺素状黄化。幼年树和初期结果树春梢发病，新梢叶片转绿后开始褪绿，使全株新叶均匀黄化，夏、秋梢发病则是新梢叶片在转绿过程出现淡黄无光泽，逐渐均匀黄化。投产的成年树，常在整片柑园中，出现个别或部分植株树冠上少数枝条的新梢叶片黄化，农民称“鸡头黄”或“插金花”。次年黄化枝扩大至全株，使树体衰退。在病株中有的新叶从叶片基部、叶脉附近或边缘开始褪绿黄化，并逐渐扩大成黄绿相间的斑驳状黄化。与均匀黄化可同时出现。斑驳黄化也可转变为均匀黄化。这些黄化枝上再发的新梢，或剪截了黄化枝后抽出的新梢，枝短、叶小变硬，表现缺锌、缺锰状的花叶。果实小或畸形，着色不匀，橘类常表现“红肩”果，橙类表现果皮青绿本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌病菌分子分型方法，其特征在于：通过对来自柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌的OMP基因序列采用邻接法进行进行聚类分析，获得其分子分型而对不同来源的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌分成不同亚群，以区分不同源来的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：对于所述OMP基因序列的获得的方法如下：选用两种限制性内切酶BamHI和KpnI对来自柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌的OMP基因进行双酶切，并对PMD19-T载体进行双酶切，两者进行混合进行Infusion 无缝连接得到重组质粒，导入大肠杆菌进行扩繁，再提取纯化所述重组质粒，扩增其中的OMP基因，再进行测序...

【技术特征摘要】

1.一种柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌病菌分子分型方法，其特征在于：通过对来自柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌的omp基因序列采用邻接法进行进行聚类分析，获得其分子分型而对不同来源的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌分成不同亚群，以区分不同源来的柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：对于所述omp基因序列的获得的方法如下：选用两种限制性内切酶bamhi和kpni对来自柑橘黄龙病菌韧皮部杆菌的omp基因进行双酶切，并对pmd19-t载体进行双酶切，两者进行混合进行infusion 无缝连接得到重组质粒，导入大肠杆菌进行扩繁，再提取纯化所述重组质粒，扩增其中的omp基因，再进行测序得到omp基...

【专利技术属性】
技术研发人员：易图永，钱磊，邓杰夫，周泽华，宋娜，戴良英，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：