深海链霉菌基因工程突变株生产怡莱霉素E的高产培养基及其规模化发酵工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种利用深海链霉菌SCSIO ZH16生产怡莱霉素E的高产培养基，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉96g

【技术实现步骤摘要】
深海链霉菌基因工程突变株生产怡莱霉素E的高产培养基及其规模化发酵工艺


[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，是关于一种深海链霉菌基因工程突变株生产怡莱霉素E的高产培养基及其规模化发酵工艺。

技术介绍

[0002]深海具有复杂而独特的环境，与浅海相比，在光照，氧气浓度，压力，可用养分，盐度和温度方面变化极大，是挖掘海洋稀有放线菌资源和结构复杂多样的次生代谢产物的重要源泉。深海独特的环境促使深海生物形成了独特的生理代谢能力，这不仅保证了它们的生存，而且为其产生新颖的代谢产物提供了潜力。如今，基于其强效的抗菌、抗肿瘤、抗氧化等特性，海洋生物活性化合物在功能性食品和药物的开发中发挥着越来越重要的作用。
[0003]深海链霉菌S.atratus SCSIO ZH16(GenBank登录号为KT9708)可以生产一类含有三种非蛋白质氨基酸(N
‑
取代色氨酸、2
‑
氨基
‑4‑
己烯酸、和3
‑
硝基酪氨酸)分环七肽家族化合物
‑‑
怡莱霉素。该菌株能够主本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用深海链霉菌SCSIO ZH16生产怡莱霉素E的高产培养基，其特征在于，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉96g
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144g、黄豆粉16
‑
24g、玉米浆1.92
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2.88g、氯化钠4.8
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7.2g、硝酸钠7.68
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11.52g、硫酸铵5.12
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7.68g、磷酸二氢钾0.192
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0.288g、以去离子水溶解，并定容至1000mL，用3M氢氧化钠溶液调节pH至7.2
‑
7.4后，加入1.53
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17.67g碳酸钙。2.如权利要求1所述的高产培养基，其特征在于，包括如下重量份的组分：可溶性淀粉120g、黄豆粉23.488g、玉米浆2.4g、氯化钠6g、硝酸钠9.6g、硫酸铵4.677g、磷酸二氢钾0.24g、以去离子水溶解，并定容至1000mL，用3M氢氧化钠溶液调节pH至7.2
‑
7.4后，加入17.670g碳酸钙。3.一种高效生产怡莱霉素E的基因工程菌株S.atratus SCSIO ZH16ΔilaR，其特征在于，其是基于CRISPR
‑
Cas9基因编辑技术，运用基因敲除质粒敲除S.atratus SCSIO ZH16中ilaR基因后获得。4.如权利要求3所述的基因工程菌株S.atratus SCSIO ZH16ΔilaR，其特征在于，所述敲除质粒为PKCCas9dilaR，其是通过酶切连接的方法，将用限制性内切酶SpeI及HindIII切割后的PKCCas9dO质粒和ilaR基因第190位碱基区域组装有向导RNA的上游片段及下游片段连接，然后转化至E.coil DH5α中获得，其中，装有向导RNA的上游片段是以链霉菌S.atratus SCSIO ZH16基因组DNA为模板通过如SEQ ID NO.2所示的引物UR
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F和如SEQ ID NO.3所示的引物UR
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R进行PCR扩增获得长度为1114bp的片段1后，再以片段1为模板通过如SEQ ID NO.4所示的引物SGR和如SEQ ID NO.3所示的引物UR
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R进行PCR扩增后获得的；下游片段是以链霉菌S.atratus SCSIO ZH16基因组DNA为模板通过如SEQ ID NO.5所示的引物DR
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F与如SEQ ID NO.6所示的引物DR
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R进行PCR扩增后获得的。5.一种高效生产怡莱霉素E的基因工...

【专利技术属性】
技术研发人员：安法梁，郑高帆，朱云飞，鞠建华，马俊英，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：