一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法技术

一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，其包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F

【技术实现步骤摘要】
一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法


[0001]本专利技术涉及环二肽类化合物制备，具体为一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法。

技术介绍

[0002]蛋白质可由酸、碱或酶水解，在水解过程中蛋白质逐步降解成为蛋白胨、多肽、三肽和二肽等越来越小的蛋白质碎片，直到最后成为氨基酸混合物。
[0003]在体内二肽通常能被二肽酶所水解而成为两个游离氨基酸。在体内肠黏膜细胞上也存在着吸收二肽或三肽的耗能主动运转体系，故有二肽吸收入细胞先于游离氨基酸之说。
[0004]二肽是一种化合物，是天然氨基酸即阿尔法氨基酸(氨基连在连有羧基的碳上)中的氨基于羧基脱水缩合而成的。其中只含一个肽键即
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CO
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NH
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。可水解。
[0005]环二肽本质
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氨基酸肽键形成的化合物活性肽，与动物营养、荷尔蒙、酵素抑制、调节免疫、抗菌、抗病毒、抗氧化作用直接。
[0006]现在环二肽类化合物类化合物制备不便，产量难以提升，同时制备方法繁琐。

技术实现思路

[0007]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，有效的解决了现在环二肽类化合物类化合物制备不便，产量难以提升，同时制备方法繁琐的问题。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F
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Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r
·
min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；2）将该种子培养液按体积分数7%的接种量接种于含150mL液体培养基的三角瓶中，共接种15L，在28℃180r
·
min－1的条件下摇床培养5d，再对培养液进行萃取，得到菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物；经薄层检查，菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物主要斑点相似，将两部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；3）对氯仿萃取物采用流式细胞术测定化合物的细胞周期抑制活性，得到环二肽类化合物。
[0009]有益效果：通过本专利技术的制备方法，由一株海洋假单胞菌可产出高含量的环二肽类化合物，分别鉴定为环(丙
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亮)［cyclo(Ala
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Leu)，1］、环(丙
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异亮)［cyclo(Ala
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Ile)，2］、环(丙
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缬)［cyclo(Ala
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Val)，3］、环(苯丙
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亮)［cyclo(Phe
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Leu)，4］、环(丙
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脯)［cyclo(Ala
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Pro)，5］和环(苯丙
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缬)［cyclo(Phe
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Val)，通过不同诱导时机目的蛋白的表达实验方法得到：海洋假单胞菌F
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Q127生长5h时加入终浓度0.3mmol/L的诱导剂IPTG诱导4h,为目的蛋白表达的最优条件。
具体实施方式
[0010]下面对本专利技术的具体实施方式做进一步详细说明。
[0011]实施例，本专利技术提供一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F
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Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r
·
min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；2）将该种子培养液按体积分数7%的接种量接种于含150mL液体培养基的三角瓶中，共接种15L，在28℃180r
·
min－1的条件下摇床培养5d，再对培养液进行萃取，得到菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物；经薄层检查，菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物主要斑点相似，将两部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物。
[0012]3）对氯仿萃取物采用流式细胞术测定化合物的细胞周期抑制活性，得到环二肽类化合物，即从氯仿提取物中分离得到6个环二肽类化合物，分别鉴定为环(丙
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亮)［cyclo(Ala
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Leu)，1］、环(丙
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异亮)［cyclo(Ala
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Ile)，2］、环(丙
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缬)［cyclo(Ala
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Val)，3］、环(苯丙
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亮)［cyclo(Phe
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Leu)，4］、环(丙
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脯)［cyclo(Ala
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Pro)，5］和环(苯丙
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缬)［cyclo(Phe
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Val)。
[0013]对一株海洋假单胞菌培养的代谢物进行鉴定：得到化合物1：白色无定型粉末，正离子TOF
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MS在m/z185处给出伪分子离子峰［M+H］+峰，与分子式C9H
16
O2N2相符，红外光谱在3193cm－1(m)和1689cm－1(s)处有吸收峰，示有酰亚胺基团，1H
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NMＲ(600MHz，CD3OD)谱给出δ:3.99(1H，qd，J=6.2、0.8Hz，H
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6)、3.93(1H，ddd，J=8.5、4.8、0.8Hz，H
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3)、1.84(1H，m，H
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8)、1.72(1H，m，H
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7)、1.63(1H，m，H
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7)、1.44(3H，d，J=7.0Hz，H
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11)、0.97(3H，d，J=6.6Hz，H
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9)和0.95(3H，d，J=6.6Hz，H
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10)质子信号，鉴定为环(丙
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亮)化合物；还可采用如下方法制备：取活化的种子菌,以1:100的接种量分别接种于10只5ml含氨苄青霉素LB液体培养基的试管中,37℃、200r/min摇床培养,每隔1h取出一只试管,紫外分光光度计测定OD590值，同时以同样的方法培养E.coliTB1和pMAL
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c2X
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TB1菌株做对照，即可得到环二肽类化合物。
[0014]实验例海洋假单胞菌F
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Q127目的蛋白表达条件的优化生长的实验方法，海洋假单胞菌F
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Q127在不同的培养基中生长速率不同,将鉴定正确的转化菌分别接种于TB、GS选择培养基中(均含有100ug/ml氨苄青霉素,0.2%(w/v)葡萄糖),通过紫外分光光度计测定该菌在相同的时间内,在不同的培养基中的生长情况(以OD表示),绘制生长曲线，不同诱导时机目的蛋白的表达，根据结果,分别取活化的种子菌以1:100的接种量接种于5只5ml含氨苄青霉素LB液体培养基的试管本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株海洋假单胞菌产出高含量环二肽类化合物方法，其特征在于：包括如下步骤，1）将一株海洋假单胞菌即F
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Q127菌种从固体斜面培养基中取适量接种到内装100mL液体培养基的三角瓶中，在28℃、180r
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min－1的条件下摇床培养48h，作为种子培养液；2）将该种子培养液按体积分数7%的接种量接种于含150mL液体培养基的三角瓶中，共接种15L，在28℃180r
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min－1的条件下摇床培养5d，再对培养液进行萃取，得到菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物；经薄层检查，菌种发酵液的氯仿萃取物和菌丝体的氯仿萃取物主要斑点相似，将两部分的氯仿萃取物合并得氯仿萃取物；3）对氯仿萃取物采用流式细胞术测定化合物的细胞周期抑制活性，得到...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜风强，邵海峰，
申请(专利权)人：杜风强，
类型：发明
国别省市：