一种棘白菌素B合成培养基及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种棘白菌素B合成培养基及制备棘白菌素B的应用，所述培养基质量浓度组成为：油酸甲酯20

【技术实现步骤摘要】
0.1
‑
0.2g/L，FeSO4·
7H2O 0.05
‑
0.1g/L，CaCl
2 0.1
‑
0.3g/L，CuSO4·
5H2O 0.5
‑
0.6g/L，溶剂为水，pH6.5
‑
7.0。
[0011]更优选的，所述棘白菌素B合成培养基质量浓度组成为：油酸甲酯70g/L，淀粉15g/L，油酸20g/L，组氨酸10g/L，谷氨酸8g/L，L
‑
苏氨酸3.1g/L，L
‑
鸟氨酸盐酸盐6.1g/L，硝酸钾10g/L，K2HPO4·
3H2O 8g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，MnSO4·
H2O 0.2g/L，FeSO4·
7H2O 0.05g/L，CaCl
2 0.3g/L，CuSO4·
5H2O 0.6g/L，溶剂为水，pH6.5
‑
7.0。
[0012]本专利技术还提供一种所述棘白菌素B合成培养基在合成棘白菌素B中的应用，所述应用为：将构巢曲霉接种至棘白菌素B合成培养基，25
‑
30℃、150
‑
160rpm下发酵240h，获得含棘白菌素B的发酵液，将发酵液分离纯化，获得棘白菌素B。
[0013]所述构巢曲霉为构巢曲霉(Aspergillus nidulans)ZJB20027，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2020495，保藏日期为2020年09月14日，地址：中国，武汉，武汉大学，邮编430072。
[0014]所述构巢曲霉在发酵前，先进行活化和种子扩大培养，再将种子液以体积浓度10％的接种量接种至棘白菌素B合成培养基，具体为：将构巢曲霉接种活化培养基，在25℃下避光培养12
‑
14d，获得活化的构巢曲霉；所述活化培养基终浓度组成：硝酸钾3g/L，K2HPO4·
3H2O 1g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO4·
7H2O 0.01g/L，蔗糖30g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然；将活化的构巢曲霉用无菌接种铲挖取体积约为1cm3菌块接种至装有50mL种子培养基的500mL三角瓶中，于25℃，160rpm摇床避光培养3d，获得种子液；所述种子培养基质量浓度组成为：谷氨酸8g/L，硝酸钾5g/L，葡萄糖10g/L，甘油10g/L，K2HPO4·
3H2O 1g/L，CaCO
3 2g/L，溶剂为水，pH 6.5
‑
7。
[0015]进一步，所述发酵培养在发酵罐中进行，发酵条件为：发酵温度25℃，通风比1:1
‑
1:2，搅拌转速200
‑
600rpm，溶氧维持在25％以上。
[0016]与现有培养基相比，本专利技术有益效果主要体现在：目前棘白菌素B的生产尚未有合成培养基的报道，而本专利技术培养基化学成分明确，可重复性好。同时，均是常见的商业化化学产品，制备简单。使用本培养基棘白菌素B产量达到了2000mg/L，较初始有显著提高。
(四)附图说明
[0017]图1为棘白菌素B标准品HPLC图。
[0018]图2为发酵液棘白菌素B HPLC图。
(五)具体实施方式
[0019]下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：
[0020]为了使本
的人员更好地理解本申请中的技术方案，下面将结合本申请具体实施例，对本申请的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0021]实施例1构巢曲霉(Aspergillus nidulans)CCTCC M 2020495
[0022]构巢曲霉(Aspergillus nidulans)CCTCC M 2020495由以下步骤获得
[0023]对构巢曲霉(Aspergillus nidulans)CCTCC NO:M 2012300(已在专利申请CN2013104776708中公开)进行ARTP诱变处理，涂布至平板，培养12
‑
14d，得诱变处理突变株，具体方法如下：
[0024](1)将构巢曲霉(Aspergillus nidulans)CCTCC M 2012300接种至活化培养基，在25℃下避光培养12
‑
14d，获得活化的构巢曲霉。所述活化培养基终浓度组成：硝酸钾3g/L，K2HPO4·
3H2O 1g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO4·
7H2O 0.01g/L，蔗糖30g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然；将生长12
‑
14d表面有墨绿色孢子的平板用无菌生理盐水洗下后置于无菌三角瓶中充分吹打震荡均匀，使孢子与菌丝打散，用无菌滤纸过滤后，制备成单孢子悬液，通过血球计数板计数，无菌生理盐水稀释单孢子悬液，控制孢子数量在107‑
109/mL。
[0025](2)将常压室温等离子体(ARTP)诱变育种仪(无锡源清天木生物科技有限公司，型号：ARTP
‑
M)操作室用酒精棉擦拭，紫外照射30min灭菌。吸取5μL制备好的孢子悬浮液与5μL的10％(v/v)甘油水溶液在无菌载片中央混合并涂抹均匀。用无菌镊子夹取处理好的载片，放置在ARTP系统操作台的孔位上，对孢子进行ARTP诱变。诱变时间为280s。设置ARTP操作参数为：载气：高纯氦气，流速设定为10L/min；输入RF功率为140W；等离子炬喷嘴与载片之间的距离为4mm；等离子流的温度为25℃。将处理结束后的载片置于盛有990μL无菌生理盐水的2mL EP管中震荡均匀后取100μL涂布在平板培养基上，25℃避光培养12
‑
14d。所述平板培养基终浓度组成：硝酸钾3g/L，K2HPO4·
3H2O 1g/L，MgSO4·
7H2O 0.5g/L，KCl 0.5g/L，FeSO4·
7H2O 0.01g/L，蔗糖30g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH自然；
[0026](3)用无菌接种铲挖取体积约为1cm3形态各异的菌块接种至装有50mL种子培养基的500mL三角瓶中，于25℃，160rpm摇床避光培养3d，获得种子液。所述种子培养基质量浓度组成为(g/L)：谷氨酸8，硝酸钾5，葡萄糖10，甘油10，K2HPO4·
3H2O 1，CaCO
3 2，溶剂为水，pH 6.5
‑
7.0。
[0027](4)将种子液以体积浓度10％的接种量接种至棘白菌素B筛选合成培养基，转速150rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种棘白菌素B合成培养基，其特征在于所述培养基质量浓度组成为：油酸甲酯20
‑
100g/L，淀粉10
‑
60g/L，油酸10
‑
30g/L，组氨酸10
‑
30g/L，谷氨酸5
‑
20g/L，L
‑
苏氨酸2
‑
5g/L，L
‑
鸟氨酸盐酸盐5
‑
8g/L，硝酸钾5
‑
15g/L，K2HPO4·
3H2O 5
‑
20g/L，MgSO4·
7H2O0.1
‑
1g/L，MnSO4·
H2O 0.1
‑
0.5g/L，FeSO4·
7H2O 0.01
‑
0.1g/L，CaCl
2 0.1
‑
0.5g/L，CuSO4·
5H2O 0.5
‑
1g/L，溶剂为水，pH6.5
‑
7.0。2.如权利要求1所述棘白菌素B合成培养基，其特征在于所述棘白菌素B合成培养基质量浓度组成为：油酸甲酯70
‑
90g/L，淀粉15
‑
20g/L，油酸15
‑
20g/L，组氨酸10
‑
20g/L，谷氨酸8
‑
12g/L，L
‑
苏氨酸3
‑
4g/L，L
‑
鸟氨酸盐酸盐6
‑
7g/L，硝酸钾8
‑
12g/L，K2HPO4·
3H2O8
‑
10g/L，MgSO4·
7H2O 0.4
‑
0.6g/L，MnSO4·
H2O 0.1
‑
0.2g/L，FeSO4·
7H2O 0.05
‑
0.1g/L，CaCl
2 0.1
‑
0.3g/L，CuSO4·
5H2O 0.5
‑
0.6g/L，溶剂为水，pH6.5
‑
7.0。3.如权利要求1所述棘白菌素B合...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡忠策，郎克鹏，牛坤，邹树平，柳志强，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：