一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法，主要提供了一种溶葡萄球菌酶编码基因Opt

【技术实现步骤摘要】
一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种利用大肠杆菌产溶葡萄球菌酶的方法。

技术介绍

[0002]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的革兰氏阳性菌，广泛存在于空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中。它是一种人兽共患病原菌，可导致人和动物的多种疾病，包括伪膜性肠炎、败血症和脓毒症等，严重威胁人类和动物的生命安全。抗生素最早用来治疗金黄色葡萄球菌引起的感染，但是容易导致耐药性的出现。金黄色葡萄球菌细胞壁中含有大量Gly五肽交联桥，而溶葡萄球菌酶(lysostaphin,Lys)可以专一性地作用于此结构，从而裂解细胞壁，对金黄色葡萄球菌具有很好的溶菌杀菌效果。成熟溶葡萄球菌酶是一种分子质量约为27.0kDa的Zn
2+
依赖蛋白酶。此外，溶葡萄球菌酶的溶菌活性不受金黄色葡萄球菌生长周期的影响，而且不会产生耐药性。所以溶葡萄球菌酶在预防和治疗葡萄球菌感染，特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)与耐多药金黄色葡萄球菌(MDRSA)感染的一种很有前景的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种溶葡萄球菌酶编码基因Opt
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Lys的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示。2.一种重组载体，包含权利要求1所述溶葡萄球菌酶编码基因Opt
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Lys的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示。3.一种重组菌，包含权利要求1所述溶葡萄球菌酶编码基因Opt
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Lys的核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示；优选的，所述重组菌为大肠杆菌重组菌。4.一种大肠杆菌重组菌的构建方法，包括如下步骤：(1)PCR扩增权利要求1所述溶葡萄球菌酶编码基因Opt
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Lys，PCR引物为Opt
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Lys
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F，如SEQ ID NO.2所示与Opt
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Lys
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R，如SEQ ID NO.3所示；扩增产物纯化后，获得包含pET22b载体同源臂以及基因Opt
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Lys的扩增片段；将该片段连接到经NdeI与XhoI双酶切处理后的pET22b(+)载体片段，构建重组质粒，命名为pET22b(+)
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Opt
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Lys；(3)将重组质粒pET22b(+)
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Opt
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Lys转化至大肠杆菌BL21(DE3)，挑选阳性克隆获得大肠杆菌重组菌，命名为BL21(DE3)/pET22b(+)
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Opt
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Lys。5.如权利要求4所述构建方法，其特征在于，步骤(1)中使用同源重组法将扩增片段连接至pET22b(+)载体片段，连接产物转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，涂布至含有氨苄青霉素(Amp)抗性的LB平板，36
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37℃培养12
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16h，挑取转化子于含有氨苄青霉素的LB培养基，于36
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37℃、180
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200rpm培养12
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16h，然后提取质粒，使用引物Opt
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Lys
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F与Opt
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Lys
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R进行质粒PCR验证后，得到重组质粒，命名为pE...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐振上，王婷，夏雪奎，王家朋，赵佩佩，
申请(专利权)人：齐鲁工业大学，
类型：发明
国别省市：