一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术的一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物，包括PLA2G2D基因。本发明专利技术通过检测精浆中的PLA2G2D预测男性生殖功能衰退，精浆相对于其他组织较易获取，与睾丸活检和穿刺相比，属于无创性检查，减轻了受测者的痛苦；精浆中的PLA2G2D在生殖功能衰老早期表达升高并及时预警，可及早防治生殖功能下降，避免了睾丸精子发生与附睾精子成熟的滞后性。发生与附睾精子成熟的滞后性。发生与附睾精子成熟的滞后性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用。

技术介绍

[0002]随着我国男性生育年龄逐渐推迟，，大龄男性生育力下降问题亟需高度重视。增龄、疾病等因素导致的生殖腺体(睾丸、附睾等)衰老是大龄男性生育力下降的核心发病机制，早期识别生殖腺体衰老并防止其生精功能退行性变，对于防治大龄男性生育力下降至关重要。然而，目前缺乏可靠的大龄男性生育力下降早期预警评价指标，即预测男性生殖功能衰退的方法。目前，临床上用于评估男性生精功能的标志物主要来源于血液与精液，包括精液常规、精子顶体酶、精子DNA 碎片率、血清激素等。
[0003]血清激素类指标包括卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮以及抑制素B等。这些指标在临床实际运用中，特别在早期预测男性生殖功能衰退效果较为有限。究其原因，主要由于血液中激素检测只能间接反映睾丸功能，且无法反映附睾功能；睾丸精子发生与附睾精子成熟具有滞后性，精液常规等系列检查结果仅能反映过去某一生精周期生精质量的好坏，无法实现早期预警；睾丸和附睾组织样本可通过穿刺活检术获取，但其作为一种有创的检查手段，难以实现广泛的临床应用。因此，研究一种预测男性生殖功能衰退的新方法是目前亟需解决的临床问题，也是防治大龄男性生育力下降亟需解决的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用。多项研究表明，随着男性年龄的增长，其生殖功能也逐渐衰退，特别是40岁以后精子浓度开始出现缓慢下降和55岁后出现急剧下降。大龄男性生殖功能衰退早期，其精液常规检查等各项临床指标往往处在正常范围。早期识别男性生殖腺体衰退并防止其生精功能退行性变，对于防治大龄男性生育力下降至关重要。本专利技术通过大量的实验发现，精浆PLA2G2D可在男性生殖功能衰老早期表达升高并及时预警，具有充分的科学性和实用性，能够填补目前缺乏可靠的大龄男性生育力下降早期预警评价指标这一空白。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物，包括PLA2G2D基因。研究表明，PLA2G2D编码磷脂酶A2家族的分泌成员，磷脂酶A2家族成员水解甘油磷脂的sn
‑
2脂肪酸酯键，产生溶血磷脂和游离脂肪酸。该基因可能参与炎症和免疫反应，以及与慢性阻塞性肺疾病相关的体重减轻。本申请专利技术人经过大量的研究发现，精浆PLA2G2D随男性年龄的增长及生殖功能的减退而逐渐表达升高，PLA2G2D可作为用于预测男性生殖功能衰退的标志物。
[0006]本专利技术还提供PLA2G2D在制备用于预测男性生殖功能衰退的检测试剂中的应用。
[0007]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述试剂包括检测体液中PLA2G2D 的mRNA表达情况的试剂。
[0008]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述试剂包括检测体液中PLA2G2D 蛋白的表达情况的试剂。
[0009]作为本专利技术所述应用的优选实施方式，所述体液为精浆。研究表明，睾丸精子发生与附睾精子成熟具有滞后性，精液常规等系列检查结果仅能反映过去某一生精周期生精质量的好坏，无法实现早期预警。本专利技术检测精浆中 PLA2G2D的表达情况，其检测结果更加准确。
[0010]本专利技术还提供ELISA法检测精浆PLA2G2D蛋白的试剂在制备用于预测男性生殖功能衰退的产品中的应用。
[0011]本专利技术还提供一种用于预测男性生殖功能衰退的试剂盒，包括ELISA法检测精浆PLA2G2D蛋白的试剂。
[0012]本专利技术还提供qRT
‑
PCR法检测PLA2G2D的引物的试剂在制备用于预测男性生殖功能衰退的产品中的应用。
[0013]本专利技术还提供一种用于预测男性生殖功能衰退的试剂盒，包括采用 qRT
‑
PCR法检测PLA2G2D的引物和检测β
‑
Actin的引物。
[0014]作为本专利技术所述试剂盒的优选实施方式，所述检测PLA2G2D的引物的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述检测β
‑
Actin的引物的序列如 SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
[0015]本专利技术的有益效果：本专利技术提供的一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物及其应用，本专利技术通过检测精浆中的PLA2G2D预测男性生殖功能衰退，精浆相对于其他组织较易获取，与睾丸活检和穿刺相比，属于无创性检查，减轻了受测者的痛苦；精浆中的PLA2G2D在生殖功能衰老早期表达升高并及时预警，可及早防治生殖功能下降，避免了睾丸精子发生与附睾精子成熟的滞后性。
附图说明
[0016]图1为3月龄与21月龄雄性小鼠睾丸(Te)附睾起始部(Is)、附睾头(Ca)、附睾体(Co)、附睾尾(Cd)普通转录组学测序差异性mRNA热图。
[0017]图2为3月龄与21月龄雄性小鼠睾丸(Te)附睾起始部(Is)、附睾头(Ca)、附睾体(Co)、附睾尾(Cd)普通转录组学测序差异性mRNA整体功能分析图。
[0018]图3为PLA2G2D在不同年龄段健康男性精浆游离mRNA中的表达情况图。
[0019]图4为PLA2G2D蛋白水平在不同年龄段健康男性精浆中的表达情况图。
具体实施方式
[0020]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
[0021]实施例1
[0022]本实施例采用普通转录组学测序和PCR法对3月龄和21月龄雄性小鼠生殖腺体，包括睾丸(Te)及附睾4个部位，即起始部(Is)、附睾头(Ca)、附睾体(Co)、附睾尾(Cd)的差异性mRNA进行整体功能分析。
[0023](1)实验方法：a.普通转录组学测序方法：分别取3月龄和21月龄雄性小鼠的睾丸及附睾各部位组织，加入RNA裂解液，以酚氯仿提取法提取组织总 RNA并构建mRNA测序文库，文库构建步骤包括mRNA富集和碎片化、mRNA 反转录、接头添加和PCR富集等过程。经测序仪检测后获得原始数据，经过样品质控与过滤后进行基因组比对，计算每个样品基因表达量并进行注释，获得差异表达基因数据。b.PCR法：分别取3月龄和21月龄雄性小鼠取睾丸及附睾各部位组织，加入RNA裂解液，以酚氯仿提取法提取组织总RNA，使用 Nanodrop2000检测RNA浓度及纯度。以500ng RNA/10μL体系进行逆转录反应，得到cDNA溶液并检测其浓度。调整cDNA溶液浓度至2.5ng/μL用于qRT
‑
PCR 检测。以β
‑
Actin作为内参基因，每个基因检测3个副孔，并设定以下反应程序：经95℃预变性30s后，建立50个循环的模板扩增步骤，95本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于预测男性生殖功能衰退的标志物，其特征在于，包括PLA2G2D基因。2.PLA2G2D在制备用于预测男性生殖功能衰退的检测试剂中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测体液中PLA2G2D的mRNA表达情况的试剂。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测体液中PLA2G2D蛋白的表达情况的试剂。5.根据权利要求3～4任一项所述的应用，其特征在于，所述体液为精浆。6.ELISA法检测精浆PLA2G2D蛋白的试剂在制备用于预测男性生殖功能衰退的产品中的应用。7.一种用于预测男性生殖功能衰退的试剂盒，其特征在于，包括ELISA法检测精浆PL...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢云，邓春华，杨其运，姚嘉慧，孙祥宙，王竹，涂响安，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：