抗PD-L1与OX40双特异性抗体及其用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及抗PD

【技术实现步骤摘要】
或者配体PD
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L1能够增加现有的肿瘤治疗方式，阻断PD
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1/PD
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L1信号通路可使被抑制的T细胞激活，进而攻击癌细胞。目前，已先后在乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌等数十种人类肿瘤组织中检测到PD
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L1蛋白的高表达，且PD
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L1的表达水平与患者的临床及预后紧密相关。
[0007]虽然PD
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L1在多种肿瘤中都有表达，但是却只有不到50％的肿瘤患者对针对PD
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1/PD
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L1的单克隆抗体的治疗有响应，因此瞄准其他免疫检查点，例如OX40，一种能理论上有叫普遍治疗相应的靶点，能够增加并改进单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用。

技术实现思路

[0008]本专利技术的目的在于提供一种可以增强T效应细胞的免疫刺激、促进细胞因子分泌的抗OX40和PD
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L1抗体，所述抗体在小鼠肿瘤模型中表现出了显著的肿瘤抑制效果。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种抗PD
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L1与OX40双特异性抗体，包括具有轻链和重链IgG结构域以及可变区部分，所述可变区部分连接到所述重链的N端或C端并串联一个或者两个纳米抗体的可变区；所述纳米抗体结构域对第一抗原OX40具有结合特异性，IgG结构域对第二抗原PD
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L1具有结合特异性。
[0010]本专利技术通过现有的人源化抗PD
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L1单克隆抗体与全人源抗OX40单克隆抗体并以图1所示的5种结构组成形式组成了多种能够同时特异性结合PD
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L1与OX40两种抗原的双特异性抗体以及OX40纳米抗体的四聚体形式。该双特异性抗体或纳米抗体四聚体(本申请包含5种，具体如下：L52
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D7H232、L52
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2D7H232、L52H232
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D7、L52H232
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2D7和2D7
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Fc)都具有对PD1/PD
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L1或OX40/OX40L的阻断活性。
[0011]本专利技术的双特异性抗体中，可变区(VHH)部分可以连接在抗PD
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L1抗体重链的N端或者C端；还可以串联1个或者多个抗OX40纳米抗体VHH；所述双特异性抗体具有对OX40的第一结合特异性和对PD
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L1的第二结合特异性，或，具有对PD
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L1的第一结合特异性和对OX40的第二结合特异性。所获得双特异性抗体均能在ELISA水平结合人源OX40，且能结合食蟹猴子的OX40，但是不能结合鼠源OX40；能在ELISA水平结合PD
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L1；能结合OX40后能激活下游信号，且具有PD
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L1依赖性。
[0012]所述双特异性抗体选自全人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体的一种或多种。
[0013]所述纳米抗体为全人源抗人OX40单克隆纳米抗体，包括重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中该CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含SEQ ID NO:34、35、36，所示氨基酸序列的任意一种或与其任意一种具有至少80％序列同一性的同源序列。
[0014]所述纳米抗体包括具有SEQ ID No:13、14、15的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:13、14、15至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。
[0015]前述的以图1所示的5种结构组成形式组成了OX40纳米抗体的四聚体形式，所述四聚体纳米抗体融合蛋白，连接在IgG1 Fc的N端，如SEQ ID NO:15所示；也可以是二聚体纳米抗体融合蛋白，连接在IgG1 Fc的N端，如SEQ ID NO:14所示。
[0016]所述重链为PD
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L1抗体的IgG1重链，所述重链包括具有SEQ ID No:10、12、17、20、23、26的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:10、12、17、20、23、26至少90％、95％、96％、
97％、98％相似性的氨基酸序列。
[0017]所述轻链为PD
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L1抗体的κ轻链，所述κ轻链包括具有SEQ ID No:9、11、16、18、19、21、22、24、25、27的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:9、11、16、18、19、21、22、24、25、27至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。
[0018]所述双特异性抗体还包括人IgG1框架区域的CH1、CH2、CH3。
[0019]所述IgG结构域包括IgG1恒定区，所述IgG1恒定区具有SEQ ID No:7的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:7至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。
[0020]连接可变区和重链IgG结构之间的linker部分为一段氨基酸序列，其接头为(GGGGS)n，其中n＝0
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4。
[0021]所述抗体是IgG1形式的抗体或IgG2形式或IgG4形式的抗体或抗原结合片段，其Fc结构域分别IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或相应工程化亚型。
[0022]所述轻链和重链的氨基酸序列分别为：SEQ ID No:9和SEQ ID No:10(L52H232)，或SEQ ID No:16和SEQ ID No:17(L52
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D7H232)，或SEQ ID No:19和SEQ ID No:20(L52
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2D7H232)，或SEQ ID No:22和SEQ ID No:23(L52H232
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D7)，或SEQ ID No:25和SEQ ID No:27(L52H232
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2D7)。
[0023]本专利技术所述双特异性抗体具有较好的加速稳定性，在反复冻融以及40℃保存时能保持较高的稳定性。
[0024]在一些实施方案中，抗OX40抗体的激动剂活性由OX40信号传导(例如检测NFκB下游信号传导)来评估。因此，本专利技术提供了与用IgG1对照抗体相比，提高NFκB介导的转录活性水平的抗OX40抗体或其片段。与相应的对照IgG1相比，本专利技术的抗OX40和PD
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L1双特异性抗体或其片段能够将NFκB介导的转录活性水平提高数倍。
[0025]本专利技术的双特异性抗体在人FcγIIb细胞的存在下，展现了显著的激动活性。
[0026]在一些实施方案中，本专利技术的抗OX40和PD
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L1双特异性抗体相比已知的抗OX40抗体和抗PD
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L1抗体具有更好的抗肿瘤活性，例如相比于已知的抗OX40抗体或PD
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L1抗体，本专利技术的双特异性抗体能够显著降低受试者中的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗PD
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L1与OX40双特异性抗体，其特征在于：所述双特异性抗体包括IgG重链、轻链、连接到重链的C端或N端的纳米抗体部分，所述纳米抗体结构域对第一抗原OX40具有结合特异性，IgG重链结构域对第二抗原PD
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L1具有结合特异性。2.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述双特异性抗体选自全人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体的一种或多种。3.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述纳米抗体为全人源抗人OX40单克隆纳米抗体，包括重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中该CDR1区、CDR2区和CDR3区分别包含SEQ ID NO:34、35、36，所示氨基酸序列的任意一种或与其任意一种具有至少80％序列同一性的同源序列。4.根据权利要求1或3所述的双特异性抗体，其特征在于：所述纳米抗体包括具有SEQ ID No:13、14、15的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:13、14、15至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。5.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述纳米抗体为：四聚体纳米抗体融合蛋白，连接在IgG1 Fc的N端，如SEQ ID NO:15所示；和/或，二聚体纳米抗体融合蛋白，连接在IgG1 Fc的N端，如SEQ ID NO:14所示。6.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述重链为PD
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L1抗体的IgG1重链，所述重链包括具有SEQ ID No:10、12、17、20、23、26的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:10、12、17、20、23、26至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。7.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述轻链为PD
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L1抗体的κ轻链，所述κ轻链包括具有SEQ ID No:9、11、16、18、19、21、22、24、25、27的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:9、11、16、18、19、21、22、24、25、27至少90％、95％、96％、97％、98％相似性的氨基酸序列。8.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述双特异性抗体还包括人IgG1框架区域的CH1、CH2、CH3。9.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于：所述IgG结构域包括IgG1恒定区，所述IgG1恒定区具有SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，许文娟，徐婷，周伟，崔智强，叶洪涛，鲍文英，范清林，宋礼华，
申请(专利权)人：安徽安科生物工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：