抗PD-L1与TIGIT双特异性抗体及其制备与应用制造技术

本发明专利技术公开提供了对人PD

【技术实现步骤摘要】
抗PD
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L1与TIGIT双特异性抗体及其制备与应用


[0001]本专利技术涉及基因工程产品，属于生物医药工程
，具体涉及一种PD
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L1与TIGIT双特异性抗体及其制备与应用。

技术介绍

[0002]PD
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1/PD
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L1信号通路在调节免疫耐受、微生物感染及肿瘤免疫逃逸中发挥着重要作用。PD
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1(programmed cell death 1，程序性细胞死亡因子1)主要表达在T细胞等免疫细胞，而PD
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1的配体PD
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L1主要在许多人类肿瘤组织呈高表达。靶向免疫检查点分子例如PD
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1或者配体PD
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L1能够增加现有的肿瘤治疗方式，阻断PD
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1/PD
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L1信号通路可使被抑制的T细胞激活，进而攻击癌细胞。目前，已先后在乳腺癌、肺癌、胃癌、肠癌、食管癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、膀胱癌、胰腺癌、神经胶质瘤、黑素瘤等多种人类肿瘤组织中检测到PD
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L1蛋白的表达，且PD
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L1的表达水平与患者的临床及预后紧密相关。
[0003]虽然PD
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L1在多种肿瘤中都有表达，但是却只有不到50％的肿瘤患者对针对PD
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1/PD
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L1的单克隆抗体的治疗有响应，因此瞄准其他免疫检查点，例如TIGIT，一种可能与PD
‑/>1/PD
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L1有协同作用的免疫检查点，能够增加并改进单克隆抗体在肿瘤治疗中的应用。
[0004]TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)是一种新型表达的免疫球蛋白超家族成员，主要表达在调节性T细胞(Treg)、消耗性CD8+T细胞、记忆性T细胞以及自然杀伤细胞(NK)表面(Stengel KF,et a1.(2012)Proc Natl Acad Sci USA.109)。TIGIT由免疫球蛋白可变区(IgV)、跨膜区和受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine
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based inhibitor motif，ITIM)组成，是一种共抑制性受体蛋白，其和共刺激分子CD226与共同的配体PVR/CD155结合。TIGIT通过与配体CD155或CD122结合产生免疫抑制信号，抑制T细胞反应及NK细胞杀伤作用。正常情况下，高亲和力的TIGIT/PVR相互作用产生的抑制信号，可阻止对正常表达PVR的(自身)细胞的杀伤。但是，这种情况也在表达PVR的肿瘤细胞中发生，肿瘤细胞也可通过抑制NK细胞的抗肿瘤反应，保护自身免于免疫细胞介导的杀伤作用(Stanietsky et al.(2009)Proc.Nat'l Acad.Sei.(USA)106:17858；Lozano eta1.(2012),J.I mmunol.188:3869)。有研究发现，TIGIT在肿瘤浸润性Treg细胞上高度富集。肿瘤组织中的TIGIT+Treg细胞表现出高度活性和抑制性的Treg细胞表型。实验表明，CD155在黑色素瘤细胞上(Inozume et al.(2014)J.Invest,Derma to1.134:S121
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Abstract693)和在各种其它肿瘤上过表达。
[0005]考虑到肿瘤通过PD
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1/PD
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L1信号通路耗竭CD8+T细胞，从而增强免疫逃逸的能力。也可通过TIGIT/CD155信号通路达到部分抑制NK细胞杀伤，因此协同阻断PD
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1/PD
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L1和TIGIT/CD155理论上具有协同抗肿瘤作用的效果。已经有临床数据表明，TIGIT阻断抗体Tiragolumab联合anti
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PD
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L1单克隆抗体Atezolizumab在二期临床(NCT03563716)上表现的肿瘤抑制效果要明显优于单药Atezolizumab的作用效果。
[0006]本专利技术的双特异性抗体由兔人源化抗体与全人源抗体组成，能够同时特异性靶向PD
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L1及TIGIT 2种靶点，在体内体外实验中，都验证了其高效的抗肿瘤生物学活性，相比于
联合用药，双特异性抗体在疗效及成本上都具有很大的优势。

技术实现思路

[0007]本专利技术通过现有的人源化抗PD
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L1单克隆抗体与全人源抗TIGIT单克隆抗体并以图1所示的2种结构组成形式组成了多种能够同时特异性结合PD
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L1与TIGIT 2种抗原的双特异性抗体。该双特异性抗体(本申请包含11种，具体如下：TPAmutC1，TPAmutC2，TPAmutC3，TPAmutC4，TPA5mutC1，TPA5mutC2，TPA5mutC3，TPA5mutC4，TPC1，TPCmutC2，TPCmutC3)都具有对PD1/PD
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L1、TIGIT/CD155的阻断活性。
[0008]本专利技术公开了双特异性抗体的氨基酸序列，包括IgG重链、轻链、连接到重链的C端或N端的两个scFv部分，已经scFv与IgG之间相连接的Linker。
[0009]本专利技术公开了双特异性抗体scFv内的2个突变点，VH44与VL100。在单链抗体的VH和VL之间引入了半胱氨酸，使得VH和VL之间形成二硫键。这个方法是本领域熟知的，例如可参见美国专利申请US5,747,654；Rajagopal等人，Prot.Engin.10(1997)1453
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1459；Reiter等人，Nature Biotechnology 14(1996)1239
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1245；Reiter等人，Protein Engineering 8(1995)1323
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1331；Webber等人；其通过引用并入本文。
[0010]一种双特异性抗体，所述双特异性抗体包括具有重链和轻链IgG结构域，连接到所述重链的N端或C端的两个单链抗体scFv部分，以及连接scFv与IgG结构域之间的linker部分；所述scFv结构域对第一抗原具有结合特异性，IgG结构域对第二抗原具有结合特异性；所述第一抗原和所述第二抗原不同，分别独立地选自PD
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L1或TIGIT；所述双特异性抗体能特异性的阻断抗原PD
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L1与PD
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1的结合，所述双特异性抗体能同时特异性的阻断抗原TIGIT与CD155的结合。
[0011]进一步的，所述两个单链抗体scFv部分连接到所述重链的所述C端。
[0012]进一步的，所述第一抗原为TIGIT或PD
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L1，所述第二抗原为PD
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L1或TIGIT。
[0013本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体包括具有轻链和重链IgG结构域，连接到所述重链的N端或C端的两个单链抗体scFv部分，以及连接scFv与IgG结构域之间的linker部分；所述scFv结构域对第一抗原具有结合特异性，IgG结构域对第二抗原具有结合特异性；所述第一抗原和所述第二抗原不同，分别独立地选自PD
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L1或TIGIT；所述双特异性抗体能特异性的阻断抗原PD
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L1与PD
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1的结合，所述双特异性抗体能同时特异性的阻断抗原TIGIT与CD155的结合。2.根据权利要求1所属的双特异性抗体，其特征在于，所述两个单链抗体scFv部分连接到所述重链的所述C端。3.根据权利要求2所属的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗原为TIGIT或PD
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L1，所述第二抗原为PD
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L1或TIGIT。4.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述两个单链抗体scFv部分连接到所属重链的所述N端。5.根据权利要求5所属的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗原为TIGIT或PD
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L1，所述第二抗原包括PD
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L1或TIGIT。6.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述的双特异性抗体是分离的单克隆抗体。7.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述连接scFv与IgG结构域之间的linker部分为氨基酸序列，包括但不仅限于具有SEQ ID No:32—SEQ ID No:38的氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:32—SEQ ID No:38至少98％相似序列的linker片段。8.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述连接scFv与IgG结构域之间的linker部分为氨基酸序列，包括具有SEQ ID No:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24氨基酸序列或者具有与SEQ ID No:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24至少98％相似序列的氨基酸序列。9.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体具有对TIGIT的第一结合特异性和对PD
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L1的第二结合特异性。10.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体具有对PD
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L1的第一结合特异性和对TIGIT的第二结合特异性。11.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体还包括人IgG1框架区域，具体包括了IgG1框架区域的CH1、CH2、CH3。12.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述双特异性抗体选自全人源抗体、人源化抗体、嵌合抗体或重组抗体的一种或多种。13.根据权利要求1所述的双特异性抗体，其特征在于，所述IgG结构域包括IgG1恒定区，所述IgG1恒定区具有SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：周伟，徐婷，叶洪涛，杨文静，许文娟，崔智强，范清林，宋礼华，
申请(专利权)人：安徽安科生物工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：