本发明专利技术提供一种毛囊干细胞(ORSC)制剂及其在神经损伤中的应用，包括一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，该毛囊干细胞(ORSC)制剂包括组分：PBS缓冲液、毛囊干细胞、海藻糖溶液、复合分化诱导剂、生长因子、增殖抑制剂。本发明专利技术涉及一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，该制剂内添加有海藻糖溶液、复合分化诱导剂、生长因子及增殖抑制剂：海藻糖溶液在细胞表面形成保护膜，用于保持毛囊干细胞在生命机体环境内的存活率，注射后不易被生命机体清除；复合分化诱导剂和生长因子相配合用于毛囊干细胞定向分化成神经细胞；增殖抑制剂通过抑制细胞周期的进程起到抑制损伤处普通的细胞增殖，提高毛囊干细胞的分化率。化率。化率。
【技术实现步骤摘要】
一种毛囊干细胞(ORSC)制剂及其在神经损伤中的应用
[0001]本专利技术是一种毛囊干细胞(ORSC)制剂及其在神经损伤中的应用，属于干细胞制剂
技术介绍
[0002]人体覆盖大约有五百万个毛囊，毛囊是由多种细胞组成的一个迷你器官，从内向外依次分为毛干、内根鞘和外根鞘，毛囊下端膨大成毛球部，容纳毛乳头，毛囊呈周期性生长，依次分为生长期、退化期和静止期，新生毛发的生长需要位于毛囊外根鞘即隆突区的细胞进入生长期，并在邻近的间质真皮乳头细胞辅助作用及干细胞微环境共同参与下形成毛芽。
[0003]毛囊干细胞则存在于毛囊隆突区，既可以向上分化成皮脂腺或表皮、或向下迁移维持毛囊的周期性生长，又因其具有完全自我更新能力及多向分化潜能，可诱导分化为脂肪、软骨、骨、血管平滑肌细胞、神经元细胞、神经胶质细胞、黑色素细胞等组织特异性细胞和造血细胞，同时，由于毛囊干细胞具有数量充足、位置固定、容易获取、少并发症等优点，广泛应用于再生医学领域。
[0004]现有技术多采用注射培养的毛囊干细胞来治疗神经性损伤，对神经损伤部位进行给药，但该方法的治疗效果较差：一方面因为经培养后注射入机体的细胞容易被机体清除，另一方面不同患者对毛囊干细胞会有显著性差异，不易达到预期效果。
技术实现思路
[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术目的是提供一种毛囊干细胞(ORSC)制剂及其在神经损伤中的应用，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现，包括：
[0007]一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，包括组分及浓度：PBS缓冲液、毛囊干细胞、海藻糖溶液、复合分化诱导剂、生长因子、增殖抑制剂；
[0008][0009]一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，制备得到所述的毛囊干细胞(ORSC)制
剂，具体包括以下步骤：
[0010]S1.获取毛囊干细胞；
[0011]S2.传代培养步骤S1所得的毛囊干细胞，备用；
[0012]S3.对步骤S2所得的毛囊干细胞进行指标检测，用于筛选出未染菌且具有分化能力的细胞，筛选出的细胞用于后续步骤；
[0013]S4.至少将步骤S3中符合指标检测标准的毛囊干细胞与生长因子混合，制成毛囊干细胞制剂。
[0014]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，所述步骤S1包括：
[0015]S11.将含有毛囊的人体皮肤组织用PBS溶液反复清洗2
‑
3次，用于去除附着在人体皮肤组织上的血污和杂质；
[0016]S12.采用两步酶消化法，将步骤S11中得到的人体皮肤组织依次浸泡在中性蛋白酶溶液和胰蛋白酶溶液中，去除皮下脂肪组织、表皮、毛发以及油脂，使得毛囊细胞被清晰观察到，得到毛囊细胞；
[0017]S13.重悬步骤S12中得到的毛囊细胞，于干细胞培养基中进行培养，得到原代毛囊干细胞，存储备用。
[0018]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，所述步骤S2具体包括：计数步骤S13中得到的原代毛囊干细胞的密度，传代培养3
‑
5代至毛囊干细胞的密度达到3
×
107‑5×
107个/ml，置于冻存盒中备用。
[0019]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，所述步骤S3具体包括：对步骤S2得到的备用毛囊干细胞进行病毒和细菌检测、细胞活率检测、分化功能指标检测，选取病毒和细菌检测呈阴性、细胞活率95％以上且具有分化功能的毛囊干细胞进行存储，备用。
[0020]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，所述步骤S4包括：
[0021]S41.将步骤S3存储的毛囊干细胞活化，重悬于海藻糖溶液内；
[0022]S42.添加复合分化诱导剂和生长因子诱导毛囊干细胞分化；
[0023]S43.添加增殖抑制剂；
[0024]S44.将步骤S43中得到的液体干细胞制剂冻干，保存。
[0025]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，步骤S42中所添加的复合分化诱导剂为悬浮有25％鼠李糖和15％氯化锂的PBS溶液。
[0026]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，步骤S42中所添加的生长因子为神经生长因子和人碱性成纤维细胞生长因子中的一种或两种。
[0027]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，步骤S42中所添加的增殖抑制剂为腺苷溶液。
[0028]优选的，一种毛囊干细胞(ORSC)制剂制得的干细胞制剂在神经损伤中的应用。
[0029]本专利技术的有益效果：
[0030](1)本专利技术涉及一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，该毛囊干细胞(ORSC)制剂相比于单独存储的毛囊干细胞溶液具有更好的治疗神经性损伤疾病的效果，该制剂内添加有海藻糖溶液、复合分化诱导剂、生长因子以及增殖抑制剂：海藻糖溶液在细胞表面形成独特的保护膜，保护生物分子结构不被破坏，有助于保持毛囊干细胞在存储环境以及在生命机体环境内的存活率，注射后不易被生命机体清除；复合分化诱导剂和生长因子相配合使用有助于
毛囊干细胞定向分化成神经细胞；增殖抑制剂起到阻滞普通细胞增殖的过程，通过抑制细胞周期的进程起到抑制损伤处普通的细胞增殖，提高毛囊干细胞的分化率。
[0031](2)本专利技术涉及一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，使用该制备方法可得到稳定的易于存储的毛囊干细胞(ORSC)制剂，提高毛囊干细胞在机体内的存活时间以及分化率，进而提高神经性损伤疾病的治疗效果。
[0032](3)本专利技术涉及一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，该毛囊干细胞(ORSC)制剂应用于治疗。
附图说明
[0033]图1为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中步骤S12得到的毛囊细胞的毛囊细胞示意图；
[0034]图2为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中步骤S2中细胞的流式分析图；
[0035]图3为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中步骤S42中神经细胞的分化染色图；
[0036]图4为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述印记示意图；
[0037]图5为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述SFI功能指数示意图；
[0038]图6为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述CAMP振幅示意图；
[0039]图7为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述CAMP发作潜伏期示意图；
[0040]图8为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述大鼠坐骨神经髓鞘形态组织切片采集图；
[0041]图9为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述脊髓前角神经元的组织形态示意图；
[0042]图10为本专利技术所述毛囊干细胞制剂的制备方法中所述脊髓前角神经元计数示意图。
具体实施方式
[0043]为使本专利技术实现的技术手段、创作特征、达成目的与本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种毛囊干细胞(ORSC)制剂，其特征在于，包括组分及浓度：PBS缓冲液、毛囊干细胞、海藻糖溶液、复合分化诱导剂、生长因子、增殖抑制剂；2.一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，其特征在于，制备得到如权利要求1所述的毛囊干细胞(ORSC)制剂，具体包括以下步骤：S1.获取毛囊干细胞；S2.传代培养步骤S1所得的毛囊干细胞，备用；S3.对步骤S2所得的毛囊干细胞进行指标检测，用于筛选出未染菌且具有分化能力的细胞，筛选出的细胞用于后续步骤；S4.至少将步骤S3中符合指标检测标准的毛囊干细胞与生长因子混合，制成毛囊干细胞制剂。3.根据权利要求2所述的一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括：S11.将含有毛囊的人体皮肤组织用PBS溶液反复清洗2
‑
3次，用于去除附着在人体皮肤组织上的血污和杂质；S12.采用两步酶消化法，将步骤S11中得到的人体皮肤组织依次浸泡在中性蛋白酶溶液和胰蛋白酶溶液中，去除皮下脂肪组织、表皮、毛发以及油脂，使得毛囊细胞被清晰观察到，得到毛囊细胞；S13.重悬步骤S12中得到的毛囊细胞，于干细胞培养基中进行培养，得到原代毛囊干细胞，存储备用。4.根据权利要求3所述的一种毛囊干细胞(ORSC)制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：计数步骤S13中得到的原代毛囊干细胞的密度，传代培养3
‑
5代至毛囊...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈锦阳，
申请(专利权)人：浙江卫未生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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