人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用。本发明专利技术提供了人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白作为标志物在制备检测和/或诊断肿瘤的试剂和/或试剂盒中的应用。本发明专利技术提供的肿瘤标志物人外周血免疫细胞蛋白，是一类单核细胞表面表达的蛋白分子，其在包括头颈鳞癌、肺癌、结直肠癌及乳腺癌等患者的外周血单核细胞中的表达水平比正常人显著增高，肿瘤微环境对单核细胞具有特异性，因此诊断具有较高的灵敏度和特异度和广泛意义。同时各种肿瘤的外周血免疫细胞丰度均较高且易于分离标记，检测BEST1表达只需简单的流式细胞分析即可，可广泛应用于各种肿瘤类型，操作简便，可满足大规模检测。可满足大规模检测。

【技术实现步骤摘要】
人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用


[0001]本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，恶性肿瘤(癌症)已成为世界范围内重大的公共卫生问题和导致死亡的主要病因之一，因此对于癌症的早期筛查和诊断对于病人生存率的提高和生存质量的改善尤为重要。目前应用于临床的癌症免疫学检查与诊断以检测肿瘤相关抗原为主。常用的检测指标有癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、血糖链抗原(CA)系列(CA15
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3、CA19
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9等)及前列腺特异性抗原(PSA)等，被称为肿瘤标志物。
[0003]肿瘤相关抗原是指肿瘤细胞和正常组织细胞均可表达的抗原，其含量在癌变时期显著增高。检测肿瘤相关抗原是目前临床最常用的癌症免疫诊断方法，同时对于癌症患者的免疫功能状态具有评估作用。肿瘤抗原的种类较为繁杂，检测较多的有胚胎抗原类和糖基抗原类等。某些肿瘤抗原在特定类型的肿瘤中高表达，如甲胎蛋白在原发性肝癌、CA19
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9在胰腺癌、CA12
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5在卵巢癌中等。因此，肿瘤抗原含量的测定对于肿瘤诊断有重要意义，被称为肿瘤标志物。应用于癌症诊断的标志物是目前的研究热点，致力于发现更多更有效的肿瘤标志物。
[0004]以癌胚抗原为例的肿瘤标志物可在外周血清中被检测到，常用的检测方法为化学发光免疫分析等。具体方法为抽取受试者静脉血离心分离血清样本，使用吖啶酯等发光物质标记待测肿瘤抗原的抗体，基于抗原<br/>‑
抗体特异性结合形成复合物，标记的化学物质被激发，发光信号强度利用发光信号测量仪器进行检测，信号强度可用来判定待测肿瘤相关抗原的含量。此外还有放射免疫分析、酶联免疫吸附试验等检测方法。
[0005]然而，现有的诊断方法具有一定局限性。其一，肿瘤相关抗原是由肿瘤细胞生成并释放到外周血中，具有一定的组织特异性，某些肿瘤并不能导致其水平发生改变。其二，肿瘤相关抗原在外周血中的丰度较低，检测方法主要是对于血清或血浆免疫分析，实验成本较高。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用。本专利技术提供的肿瘤标志物人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白(BEST1)，是一类表达在免疫细胞膜外的蛋白，各种肿瘤的外周血免疫细胞丰度均较高且易于分离标记，检测BEST1表达只需简单的流式细胞分析即可，可广泛应用于各种肿瘤类型，操作简便，可满足大规模检测。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白作为标志物在制备检测和/或诊断肿瘤的试剂和/或试剂盒中的应用。
[0009]在本专利技术的一些实施方案中，上述应用的人外周血免疫细胞包括：T细胞、B细胞、
自然杀伤细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞中的一种或多种。
[0010]在本专利技术的一些实施方案中，上述应用的肿瘤包括：子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、输卵管癌、原发性腹膜癌、结肠癌、肛门生殖器区域的鳞状细胞癌、黑色素瘤、肾细胞癌、肺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌、肝癌、甲状腺癌、喉癌、唾液腺癌、食道癌、头部和颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、胰腺癌、间皮瘤、肉瘤、血液学癌症中的一种或多种。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述肿瘤的分期包括I期，II期，III期，IV期。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述肿瘤的诊断包括肿瘤发病诊断、分期诊断、治疗效果诊断及预后诊断。
[0013]本专利技术还提供了上述应用的标志物的筛选方法，包括在蛋白和/或mRNA水平检测外周血免疫细胞上BEST1的方法，作为优选，包括单个核细胞分离、流式细胞检测、WesternBlot或qPCR中的一种或多种。
[0014]本专利技术还提供了引物、探针或其组合，以上述应用中的标志物为扩增的目的片段。
[0015]本专利技术还提供了检测产品，包括上述的引物、探针或其组合以及可接受的助剂。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述检测产品包括芯片、试剂盒中的一种或多种。
[0017]本专利技术还提供了检测和/或诊断肿瘤的方法，取待测样本检测上述应用中的上述分子标志物。
[0018]本专利技术提供了人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白作为标志物在制备检测和/或诊断肿瘤的试剂和/或试剂盒中的应用。
[0019]本专利技术提供的肿瘤标志物人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白(BEST1)，是一类单核细胞表面表达的蛋白分子，其在包括头颈鳞癌、肺癌、结直肠癌及乳腺癌等患者的外周血单核细胞中的表达水平比正常人显著增高，肿瘤微环境对于单核细胞的作用具有特异性，因此诊断具有较高的灵敏度和特异度和广泛意义。同时各种肿瘤的外周血免疫细胞丰度均较高且易于分离标记，检测BEST1表达只需简单的流式细胞分析即可，可广泛应用于各种肿瘤类型，操作简便，可满足大规模检测。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0021]图1示头颈鳞癌患者外周血单核细胞中BEST1阳性率；
[0022]其中：A(左)示将患者与健康人外周血单个核细胞(PBMC)经CD14和CD16抗体标记，通过流式细胞术检测，将细胞分群，其中黑色圆圈中显示的是CD14++CD16
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型单核细胞；
[0023]A(右)示流式细胞术检测患者与健康人CD14++CD16
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型单核细胞中BEST1的表达百分率(阳性率)；
[0024]B示患者和健康人CD14++CD16
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型单核细胞中BEST1的表达阳性率的统计分析；
[0025]图2示单核细胞BEST1阳性率可作为头颈鳞癌诊断指标；
[0026]其中：A示期望BEST1作为头颈鳞癌的诊断指标的ROC曲线；
[0027]B示BEST1诊断头颈鳞癌的灵敏度特异度曲线；
[0028]C示患者与健康人单核细胞BEST1阳性率的分布点状图；
[0029]D示患者与健康人单核细胞BEST1阳性率的分布曲线图；
[0030]E a)示BEST1诊断头颈鳞癌模型的性能度量(performance measure)表；
[0031]E b)示BEST1诊断头颈鳞癌的临界点(cut
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off)结果；
[0032]图3示肺癌、结直肠癌、乳腺癌患者和健康人CD14++CD16
‑
型单核细胞中BEST1的表达阳性率的统计分析。
具体实施方式
[0033]本专利技术公开了人外周血免疫细胞蛋白在检测、诊断肿瘤中的应用。
[0034]应该理解，表述
“……
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人外周血免疫细胞Bestrophin1蛋白作为标志物在制备检测和/或诊断肿瘤的试剂和/或试剂盒中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人外周血免疫细胞包括：T细胞、B细胞、自然杀伤细胞、粒细胞、单核细胞、巨噬细胞或树突状细胞中的一种或多种。3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括：子宫内膜癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、输卵管癌、原发性腹膜癌、结肠癌、肛门生殖器区域的鳞状细胞癌、黑色素瘤、肾细胞癌、肺癌、非小细胞肺癌、肺鳞状细胞癌、胃癌、膀胱癌、胆囊癌、肝癌、甲状腺癌、喉癌、唾液腺癌、食道癌、头部和颈部鳞状细胞癌、前列腺癌、胰腺癌、间皮瘤、肉瘤、血液学癌症中的一种或多种。...

【专利技术属性】
技术研发人员：马洁，张璐瑶，
申请(专利权)人：北京医院，
类型：发明
国别省市：