PCAT1的反义寡核苷酸及其在制备抑制前列腺癌核酸药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了PCAT1的反义寡核苷酸及其在制备抑制前列腺癌核酸药物中的应用。本发明专利技术采用生物信息学在线工具分析PCAT1序列信息，筛选长度在20碱基的、能够结合的反义寡核苷酸位点，同时利用分子生物学实验验证，证明反义寡核苷酸能够降低PCAT1在细胞内的水平。本发明专利技术为临床上治疗去势抵抗性前列腺癌，提供了新的手段。手段。手段。

【技术实现步骤摘要】
PCAT1的反义寡核苷酸及其在制备抑制前列腺癌核酸药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及PCAT1的反义寡核苷酸及其在制备抑制前列腺癌核酸药物中的应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌(PCa)是男性泌尿系统中最常见的恶性肿瘤之一(Sung H,Ferlay J,Siegel RL,et al.Global cancer statistics 2020:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in 185countries CA：a cancer journal for clinicians,2021.)。2019年美国新增和死亡病例分别超过17万例和约3万例(Siegel R,Miller K,Jemal A.Cancer statistic,2019[J].CA:a cancer journal for clinicians,2019:69；7
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34.)。我国的前列腺癌发病率也呈逐年上升，前列腺癌的确切病因尚不十分清楚，但临床观察和实验研究表明，激素，遗传和环境因素均起到一定作用(Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA:a cancer journal for clinicians,2016:66；115
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132.)。目前，前列腺癌特异性抗原(PSA)筛查逐渐普及，增加了疾病早期诊断的概率，使得部分早期患者能够及时诊治。前列腺癌的治疗包括手术和内分泌治疗为核心的多种方式。
[0003]雄激素剥夺治疗(Androgen deprivation therapy,ADT)是对这部分患者的最主要治疗方法。尽管在ADT治疗初期前列腺癌被不同程度的控制，但经过大约18个月敏感期后，大部分患者的疾病逐渐且不可逆地进展为去势抵抗性前列腺癌。去势抵抗性前列腺癌(Castration resistant prostate cancer,CRPC)是指患者经过ADT治疗后，血清睾酮水平达到去势水平(<50ng/dl或<1.7nmol/L)，但是疾病依然进展的前列腺癌。疾病进展的临床表现为影像学可见的肿瘤进展和/或前列腺特异性抗原(PSA)水平持续增高。后者应满足以下条件，即在PSA达2ng/mL以上，每间隔一周监测血清PSA水平，连续3次血清PSA升高，且比基础值升高50％以上。然而，由于CRPC发病机制至今不明，因而临床缺乏针对病因的精准治疗，这是当前泌尿外科学研究的难点和热点。
[0004]长链非编码RNA(lncRNA)是长度大于200个核苷酸的不能编码蛋白的RNA，位于细胞核或细胞质内。根据lncRNA在基因组上的位置，可将其分为3类：(1)位于基因间区的lncRNA，又被称为lincRNA(long intergenic RNA)；(2)天然反义链lncRNA；(3)内含子区lncRNA。由于lncRNA缺乏明显的开放阅读框，没有蛋白编码功能，因此，长期以来它被人们认为是没有生物学功能的“暗物质”。随着生物学技术的不断进步，LncRNA的生物学功能也逐渐被揭示出来。研究lncRNA与疾病之间的相关性对于实现疾病的诊断和治疗具有重要的意义。
[0005]反义核酸药物从1978年发现并提出理论，到世纪之交第一种药物上市、推出2代反义技术，再到后来发展遇到低谷，药品退市，人们对其理解与运用的过程经历了一种螺旋式的上升。其研发伊始就承担着攻克普通药物无法治愈的疾病(如肿瘤)的希冀。随着近年来
几种治疗癌症的反义核酸药物获批进入临床试验，此类药物重新回到了生物制药研究的舞台，再次展现了这种药物在基因治疗领域的广阔前景。
[0006]目前，关于PCAT1在前列腺癌中的作用机制尚未有相关研究，关于靶向PCAT1反义核酸的研究还未见报道，且其化学抑制剂的研发尚不充分。

技术实现思路

[0007]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供针对PCAT1的反义寡核苷酸。
[0008]本专利技术的目的之二是提供一种治疗去势抵抗性前列腺癌的手段。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0010]本专利技术第一方面提供了一种诊断去势抵抗性前列腺癌的产品，所述产品包括检测PCAT1的试剂。
[0011]进一步，所述产品包括通过RT
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PCR、实时定量PCR、原位杂交或芯片检测样本中PCAT1表达水平的试剂。
[0012]进一步，所述试剂包括特异性识别PCAT1的探针；或
[0013]特异性扩增PCAT1的引物。
[0014]进一步，特异性扩增PCAT1的引物序列如SEQ ID NO.1
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2所示。
[0015]本专利技术第二方面提供了一种反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸由15
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30个核苷酸组成，所述反义寡核苷酸抑制PCAT1的表达。
[0016]进一步，所述反义寡核苷酸由18
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22个核苷酸组成。
[0017]进一步，所述反义寡核苷酸由20个核苷酸组成。
[0018]进一步，所述反义寡核苷酸选自SEQ ID NO.3
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6任一项所述的序列。
[0019]进一步，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0020]本专利技术第三方面提供了对本专利技术第二方面所述的反义寡核苷酸进行修饰的反义寡核苷酸。
[0021]进一步，所述修饰包括至少1个核苷间键修饰。
[0022]进一步，所述核苷间键修饰是硫代磷酸酯修饰。
[0023]进一步，所述修饰包括全链的核苷间键修饰。
[0024]进一步，所述修饰包括至少1个糖修饰。
[0025]进一步，所述糖修饰为2
′‑
O
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甲氧乙基修饰。
[0026]进一步，所述修饰包括至少6个糖修饰。
[0027]进一步，所述修饰包括10个糖修饰。
[0028]进一步，所述糖修饰位于反义寡核苷酸序列两侧。
[0029]进一步，所述反义寡核苷酸包括至少一个的核苷间键修饰和至少一个的糖修饰。
[0030]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少1个糖修饰。
[0031]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少6个糖修饰。
[0032]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和10个糖修饰。
[0033]进一步，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.13所示。
[0034]本专利技术第四方面提供了一种组合物，所述组合物包括本专利技术第二方面或第三方面所述的反义寡核苷酸或其盐。
[0035]进一步，所述组合物还包括药学上可接受的载体。
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诊断去势抵抗前列腺癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测PCAT1的试剂；优选的，所述产品包括通过RT
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PCR、实时定量PCR、原位杂交或芯片检测样本中PCAT1表达水平的试剂；优选的，所述试剂包括特异性识别PCAT1的探针；或特异性扩增PCAT1的引物；优选的，特异性扩增PCAT1的引物序列如SEQ ID NO.1
‑
2所示。2.一种反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸由15
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30个核苷酸组成，所述反义寡核苷酸抑制PCAT1的表达；优选的，所述反义寡核苷酸由18
‑
22个核苷酸组成；优选的，所述反义寡核苷酸由20个核苷酸组成；优选的，所述反义寡核苷酸选自SEQ ID NO.3
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6任一项所述的序列；优选的，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.3所示。3.对权利要求2所述的反义寡核苷酸进行修饰的反义寡核苷酸；优选的，所述修饰包括至少1个核苷间键修饰；优选的，所述核苷间键修饰是硫代磷酸酯修饰；优选的，所述修饰包括全链的核苷间键修饰；优选的，所述修饰包括至少1个糖修饰；优选的，所述糖修饰为2
′‑
O
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甲氧乙基修饰；优选的，所述修饰包括至少6个糖修饰；优选的，所述修饰包括10个糖修饰；优选的，所述糖修饰位于反义寡核苷酸序列两侧。4.根据权利要求3所述的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸包括至少一个的核苷间键修饰和至少一个的糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少1个糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少6个糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚芝群，牛远杰，于健鹏，李阳，陈昱彤，
申请(专利权)人：天津市泌尿外科研究所，
类型：发明
国别省市：