【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，具体涉及一种靶向清除瘤内菌群的peg化抗生素纳米制剂及其制备方法。
技术介绍
1、近年来，随着高通量测序和宏基因组学等研究技术的不断开发和应用，人们也发现微生物菌群和肿瘤发生之间存在着复杂的关系。恶性肿瘤组织是一种复杂的生态系统，除了肿瘤细胞、免疫细胞、基质细胞等成分外，存在于肿瘤细胞之中独特的微生物群也是肿瘤微环境的一个重要组成部分。作为肿瘤微环境中调节肿瘤进展和影响预后的关键参与者，微生物群越来越受到关注，不同身体部位的微生物群落在各种肿瘤的发生和进展中发挥不同作用。目前，已有11种微生物被国际癌症登记处确认为“致癌微生物”。研究发现微生物与～15％的人类恶性肿瘤密切相关，共生细菌可以直接影响肿瘤的发生、进展及对治疗的反应。bullman等人用甲硝唑(mti)治疗具核梭杆菌富集的患者源性异种移植模型时，明显减少了肿瘤中细菌的浸润程度，导致肿瘤细胞增殖受到抑制，肿瘤生长缓慢。fu等人尝试将不同类型的抗生素和注射方法结合起来，最终实现了靶向清除瘤内细菌的目的，显著抑制了乳腺癌肺转移。虽然抗生素的使用可以在一定程度上抑制瘤内细菌的生长，但使用大剂量的抗生素来针对瘤内微生物可能会诱发严重的不良反应，如造成体内其他菌群失衡，停药后菌群丰度和多样性很难恢复，进而引发功能性胃肠病、炎症反应等其他疾病。目前，临床上无特异针对清除瘤内菌群而不因治疗影响体内其他菌群的药物，研究清除瘤内菌群的技术及方法，对控制肿瘤的发生发展具有重要意义和应用前景。
2、随着纳米医学的发展，将纳米材料应用于肿瘤药物靶向递送有望改善治
技术实现思路
1、本专利技术一个目的在于提供一种含羟基的疏水性抗生素与含羧基的亲水性聚乙二醇衍生物脱水缩合而成的两亲性缀合物及其纳米制剂(统称为peg化抗生素纳米制剂)，以解决抗生素无法彻底清除瘤内菌群并且会引起肠道菌群紊乱的弊端。
2、本专利技术所提供的peg化抗生素纳米制剂，其结构式如式i所示：
3、
4、式i中，所述a表示聚乙二醇的端基修饰，
5、b表示含羟基的疏水性抗生素去掉一个羟基后余下的基团。
6、所述peg化抗生素纳米制剂为：由所述含羟基的疏水性抗生素与含羧基的亲水性聚乙二醇衍生物(一端为羧基另一端为a基团)脱水缩合反应得到的peg-抗生素两亲性缀合物自组装形成的纳米颗粒；
7、其中，所述含羟基的疏水性抗生素选自：甲硝唑、奥硝唑、塞克硝唑、克林霉素、林可霉素、亚胺培南、美罗培南、氯霉素、甲砜霉素中至少一种，具体可为甲硝唑；
8、
9、所述含羧基的亲水性聚乙二醇衍生物选自(c1-c6)烷氧基聚乙二醇羧基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺聚乙二醇羧基中至少一种，
10、所述含羧基的亲水性聚乙二醇衍生物的分子量介于500-50000g/mol之间，具体可为甲氧基聚乙二醇羧基(ch3o-peg-cooh，mw：1000d)。
11、本专利技术的另一目的在于提供上述peg化抗生素纳米制剂的制备方法。
12、本专利技术所提供的peg化抗生素纳米制剂的制备方法，包括以下步骤：
13、1)在n,n’-二环己基碳二亚胺(dcc)、4-二甲氨基吡啶(dmap)的催化下，使含羟基的疏水性抗生素与含羧基的亲水性peg衍生物在溶剂a中进行酯化反应，得到peg-抗生素两亲性缀合物；
14、2)将所得peg-抗生素两亲性缀合物用溶剂c溶解后超声，自组装形成纳米粒子，即peg化抗生素纳米制剂。
15、上述方法步骤1)还包括下述步骤：反应结束后，经布氏漏斗过滤除去未完全溶解的抗生素，利用透析袋(分子量：500-1000d)透析3-5天去除杂质，透析在溶剂b中进行，直至透析袋中无晶体析出，将剩余液体转移至圆底烧瓶中，旋转蒸发除去溶剂；溶剂b溶解圆底烧瓶中纯化后的peg-抗生素，-80℃冷冻后利用冷冻干燥仪使水分子升华，得到干粉状peg-抗生素两亲性缀合物。
16、上述方法中，溶剂a为二氯甲烷(dcm)，溶剂b为超纯水，溶剂c为超纯水或pbs；
17、所述酯化反应的反应条件为：室温下反应18-24h；
18、所述超声条件可为80w 15min。
19、当上述含羟基的疏水性抗生素为甲硝唑，含羧基的peg化衍生物为ch3o-peg-cooh(mw：1000d)时，上述方法步骤1)的具体过程为：称取ch3o-peg-cooh(500mg,0.5mmol)置于250ml圆底烧瓶，加入80ml无水二氯甲烷，磁力搅拌下使其溶解，在0℃冰浴条件下分别称取二环己基碳二亚胺(dcc,103mg,0.5mmol)、4-二甲氨基吡啶(dmap,12.2mg,0.1mmol)、甲硝唑(mti,427.5mg,2.5mmol)加入到二氯甲烷中，30min后撤去冰浴，室温下反应24h，得到mti-peg缀合物，其结构式如下式ii所示：
20、
21、本专利技术的又一目的在于提供上述peg化抗生素纳米制剂的医药用途，通过将peg化抗生素纳米制剂与传统肿瘤化疗、靶向治疗、免疫治疗联合应用，来治疗有细菌浸润的实体肿瘤，通过靶向消除瘤内菌群来提升现有肿瘤治疗疗效，具有良好的临床应用前景。
22、本专利技术所提供的peg化抗生素纳米制剂的医药用途，为peg化抗生素纳米制剂在制备如下任意一种产品中的应用：
23、1)靶向清除瘤内菌群的药物；
24、2)现有抗肿瘤疗法的增效剂；
25、3)治疗肿瘤的药物。
26、所述应用中，peg化抗生素纳米制剂与现有抗肿瘤疗法联合应用，
27、所述肿瘤为有细菌浸润的实体肿瘤，包含结直肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、宫颈癌；
28、所述现有抗肿瘤疗法包括化疗、靶向治疗、免疫治疗、放疗。
29、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
30、1)本专利技术提供的peg化抗生素纳米制剂能够精确靶向肿瘤部位，彻底清除肿瘤组织内的细菌，而且抗生素在纳米化之后由于良好的靶向性其对肠道菌群的影响大大降低；
31、2)本专利技术首次提出利用纳米化抗生素靶向清除瘤内菌群，以此来消除细菌对肿瘤治疗的不利影响，将纳米化抗生素与传统肿瘤化疗(如奥沙利铂)、靶向治疗(如赫赛汀)、免疫治疗(如nk细胞)联合应用，用来治疗有细菌浸润的实体肿瘤，通过靶向消除瘤内菌群来提升现有肿瘤本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.PEG化抗生素纳米制剂，其结构式如式I所示：
2.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于，所述含羟基的疏水性抗生素选自：甲硝唑、奥硝唑、塞克硝唑、克林霉素、林可霉素、亚胺培南、美罗培南、氯霉素、甲砜霉素中至少一种；
3.制备权利要求1或2所述的PEG化抗生素纳米制剂的方法，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)还包括下述步骤：反应结束后，经布氏漏斗过滤除去未完全溶解的抗生素，利用透析袋透析3-5天去除杂质，透析在溶剂B中进行，直至透析袋中无晶体析出，将剩余液体转移至烧瓶中，旋转蒸发除去溶剂；溶剂B溶解烧瓶中纯化后的PEG-抗生素，冷冻后利用冷冻干燥仪使水分子升华，得到干粉状PEG-抗生素两亲性缀合物，其中，溶剂B为超纯水。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于，溶剂A为二氯甲烷，溶剂C为超纯水或PBS；
6.权利要求1或2所述的PEG化抗生素纳米制剂在制备如下任意一种产品中的应用：
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用中，所述肿瘤患者同时接受抗肿瘤疗法的
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为有细菌浸润的实体肿瘤，所述实体肿瘤选自结直肠癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤、宫颈癌。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤疗法包括化疗、靶向治疗、免疫治疗、放疗。
10.一种消除肿瘤内浸润细菌的方法，包括，将抗生素纳米化形成抗生素纳米颗粒，将治疗有效量的所述抗生素纳米颗粒施用于肿瘤患者，以消除所述肿瘤患者的肿瘤内的浸润细菌，优选地，所述肿瘤患者同时接受抗肿瘤疗法的治疗。
...【技术特征摘要】
1.peg化抗生素纳米制剂，其结构式如式i所示：
2.根据权利要求1所述的纳米制剂，其特征在于，所述含羟基的疏水性抗生素选自：甲硝唑、奥硝唑、塞克硝唑、克林霉素、林可霉素、亚胺培南、美罗培南、氯霉素、甲砜霉素中至少一种；
3.制备权利要求1或2所述的peg化抗生素纳米制剂的方法，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤1)还包括下述步骤：反应结束后，经布氏漏斗过滤除去未完全溶解的抗生素，利用透析袋透析3-5天去除杂质，透析在溶剂b中进行，直至透析袋中无晶体析出，将剩余液体转移至烧瓶中，旋转蒸发除去溶剂；溶剂b溶解烧瓶中纯化后的peg-抗生素，冷冻后利用冷冻干燥仪使水分子升华，得到干粉状peg-抗生素两亲性缀合物，其中，溶剂b为超纯水。
5.根据权利要求3或4所述的方法，其特...
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