一种普鲁士兰纳米液滴及其制备方法和抗血栓应用技术

本发明专利技术涉及纳米药物技术领域，具体涉及一种普鲁士兰纳米液滴及其制备方法和抗血栓应用。一种普鲁士兰纳米液滴，包括连接有CREKA的聚乳酸

【技术实现步骤摘要】
一种普鲁士兰纳米液滴及其制备方法和抗血栓应用


[0001]本专利技术涉及纳米药物
，具体涉及一种普鲁士兰纳米液滴及其制备方法和抗血栓应用。

技术介绍

[0002]由血栓形成和血栓栓塞引起的血栓性疾病是世界范围内致死和致残的主要原因之一。目前，临床上使用重组组织型纤溶酶原激活剂(rt
‑
PA)等溶栓药物是治疗血栓相关疾病的主要手段。这些蛋白酶可以催化纤溶酶原转化为纤溶酶，然后溶解血栓中的纤维蛋白网络。不幸的是，这些溶栓药物具有循环寿命短、靶向性不强和引发严重出血并发症的缺点，这些缺点均为危及患者生命的临床缺陷。对于血栓性疾病的治疗，除了解决药物本身的局限性外，改善血栓形成或血管内皮损伤的微环境也是治疗的难点之一。正常血小板含有基本水平的细胞内活性氧(ROS)，在氧化应激的信号转导中起着不可替代的作用，过氧化氢(H2O2)相对于其他ROS更加稳定，被认为是主要的ROS。血栓和药物诱导的血管内皮损伤激活血小板，产生过量的ROS，提高氧化应激。过多的ROS反过来促进血小板活化，刺激额外的血小板补充，进一步恶化血管状况，增加血栓并发症的风险。因此，除解决药物的副作用外，改善血栓形成后的血管和组织微环境是当务之急。亟需研发一种既能够克服现有的溶栓药物的缺陷又能够改善血栓微环境的用于治疗血栓性疾病的药物。

技术实现思路

[0003]本专利技术意在提供一种普鲁士兰纳米液滴，以实现溶栓治疗及解决现有的溶栓药物对血栓微环境的改善作用不佳的技术问题。
[0004]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种普鲁士兰纳米液滴，包括连接有CREKA的聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物形成的外壳以及普鲁士蓝纳米粒子和全氟戊烷性成的核心。
[0006]本技术方案还提供了一种普鲁士兰纳米液滴的制备方法，包括以下依次进行的步骤：
[0007]S1：将连接有CREKA的聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物、含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液和聚乙烯醇溶液溶解于二氯甲烷中，获得混合液；
[0008]S2：然后在所述混合液中加入全氟戊烷，对含有全氟戊烷的混合液进行第一次超声乳化，获得第一次超声乳化液；
[0009]S3：将第一次超声乳化液滴加入聚乙烯醇溶液，对含有聚乙烯醇的第一次超声乳化液进行第二次超声乳化，获得第二次超声乳化液；
[0010]S4：在第二次超声乳化液中加入异丙醇溶液，搅拌使二氯甲烷挥发；然后经离心处理获得沉淀。
[0011]本方案的原理及优点是：
[0012]本方案的纳米液滴PB
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PFP@PLGA
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CREKA(PB
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PFP@PC)以普鲁士蓝(PB)和全氟戊烷
(PFP)为核心，以连接有CREKA的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物(PLGA
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CREKA)为载体。PB
‑
PFP@PC纳米液滴由于普鲁士蓝纳米粒具备类似过氧化物酶、过氧化氢酶及超氧化物歧化酶活性，因此可以通过抗氧化反应调节血管微环境，持续清除
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O2‑
、
·
OH、H2O2等ROS的生成。同时，在近红外辐照下，由于纳米液滴中的普鲁士蓝的光热特性，引发全氟戊烷发生相变，从而实现特异位点溶栓。这种基于抗氧化反应的纳米液滴调节了血管微环境中异常升高的ROS，极大地改善了抗血栓治疗。特别是在CREKA靶点积累增加的情况下，抗血栓治疗效果得到进一步增强。本方案的纳米液滴在患处可形成级联反应，以实现高效的血栓治疗以及血管微环境调节。
[0013]本技术方案采用CREKA靶向纤维蛋白，纤维蛋白是高度不溶的蛋白质多聚体，本技术方案的纳米液滴先毁损质地较韧的组织(即纤维蛋白)，剩下的血栓中的质地疏松的部分则可以迎刃而解。并且本技术方案采用CREKA多肽靶向纤维蛋白的同时使用液态氟碳的相变来进行机械溶栓，两种因素结合，获得了协同增效的效果。药物溶栓治疗的瓶颈在于溶栓时间窗，即使通过动脉直接给药也只能对形成时间较短的血栓有效。而本方案采用的机械溶栓方式却不受到上述限制，CREKA多肽的纤维蛋白靶向能力和PFH的相变溶栓相结合，可以克服溶栓时间窗的缺陷，对于早期、中期和晚期形成的血栓均有疗效。
[0014]进一步，一种普鲁士兰纳米液滴，其粒径为287.58
±
6.60nm，多分散系数为0.083
±
0.026，表面电位为1.00
±
1.35mV。本技术方案的纳米粒粒径适中，分散性好，在给药过程中不会聚集成团，可通过增强渗透滞留效应进入血栓部位，发挥治疗作用。
[0015]进一步，在S1中，含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液中溶质的浓度为20mg/mL，聚乙烯醇溶液的溶质的质量百分浓度为4％；连接有CREKA的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物、含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液和聚乙烯醇溶液的用量比为25mg：400μL；100μL。采用上述的用量比，可以成功实现普鲁士纳米粒子的有效包封。其中，聚乙烯醇溶液的加入对实现普鲁士纳米粒子的包封成球非常关键，如果不加入这种成分，本制备工艺难以提升普鲁士蓝的包封效果，甚至不能获得球状的纳米液滴。
[0016]进一步，在S2中，全氟戊烷和连接有CREKA的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物的用量比为100μL：25mg。采用上述用量比，可以保证纳米液滴中包裹有足够量的全氟戊烷，在普鲁士蓝的光热转化作用下，全氟戊烷发生相变，通过爆破作用实现溶栓功能。
[0017]进一步，在S2中，第一次超声乳化在冰浴条件下进行，且以开5s和关5s交替进行的方式持续3min；超声功率为78W。在超声乳化的过程中保持冰浴条件，可以有效防止全氟戊烷发生相变。
[0018]进一步，在S3中，聚乙烯醇溶液的溶质的质量百分浓度为4％；聚乙烯醇溶液和连接有CREKA的聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物的用量比为5mL：25mg；第二次超声乳化在冰浴条件下进行，且以开5s和关5s交替进行的方式持续3min；超声功率为65W。两次超声乳化分别采用78W和65W的功率，可保证获得球状的纳米液滴，而采用其他的超声条件，难以实现普鲁士蓝纳米粒子的成功包封。
[0019]进一步，在S4中，异丙醇溶液的溶质的质量百分数为2％，异丙醇溶液和连接有CREKA的聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物的用量比为5mL：25mg；所述搅拌在冰浴条件下进行，且持续3h；所述离心处理的转速为10000rpm，时长为8min。上述搅拌过程保证有机溶剂CH2Cl2充分挥发，避免有机溶剂对纳米液滴的治疗效果产生负面影响。
NPs的透射电镜图像参见图3。
[0035]PB
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PFP@PC合成工艺的选择对是否能够成功获得纳米液滴有非常显著的影响。专利技术人经过了大量的实验研究才获得了上述的能够获得理想性能的PB
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PF本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种普鲁士兰纳米液滴，其特征在于：包括连接有CREKA的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物形成的外壳以及普鲁士蓝纳米粒子和全氟戊烷形成的核心。2.根据权利要求1所述的一种普鲁士兰纳米液滴，其特征在于：其粒径为287.58
±
6.60nm，多分散系数为0.083
±
0.026，表面电位为1.00
±
1.35mV。3.一种普鲁士兰纳米液滴的制备方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：S1：将连接有CREKA的聚乳酸
‑
羟基乙酸共聚物、含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液和聚乙烯醇溶液溶解于二氯甲烷中，获得混合液；S2：然后在所述混合液中加入全氟戊烷，对含有全氟戊烷的混合液进行第一次超声乳化，获得第一次超声乳化液；S3：将第一次超声乳化液滴加入聚乙烯醇溶液，对含有聚乙烯醇的第一次超声乳化液进行第二次超声乳化，获得第二次超声乳化液；S4：在第二次超声乳化液中加入异丙醇溶液，搅拌使二氯甲烷挥发；然后经离心处理获得沉淀。4.根据权利要求3所述的一种普鲁士兰纳米液滴的制备方法，其特征在于：在S1中，含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液中溶质的浓度为20mg/mL，聚乙烯醇溶液的溶质的质量百分浓度为4％；连接有CREKA的聚乳酸
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羟基乙酸共聚物、含有普鲁士蓝纳米粒子的溶液和聚乙烯醇溶液的用量比为25mg；4...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭大静，张文丽，王俊锐，张瑜，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：