一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立技术

本发明专利技术公开了一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，所述检测方法为通过制备菌群失调性腹泻大鼠模型，使用葛根芩连汤治疗后，通过HE染色和RT

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立


[0001]本专利技术涉及一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，特别是HE染色和RT
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PAR检测葛根芩连汤对菌群失调性腹泻大鼠模型结肠组织PINK1/Parkin表达的影响。

技术介绍

[0002]抗生素相关性菌群失调(Dysbacteriosis)是指使用抗生素后发生的肠道菌群紊乱。其主要临床表现为腹泻，还可伴有腹胀、腹痛、发热、恶心、呕吐等，如不及时治疗，可引起水电解质酸碱失衡及二重感染等，甚至导致全身炎症反应综合征、多器官功能衰竭等。西医采用抗生素纠正原发病的同时，主要方式为微生态调节制剂(如益生菌、益生元、合生元等)和粪菌移植，但单一应用临床疗效欠佳。抗生素的应用是20世纪医药领域最伟大的成就之一，其应用对控制细菌感染与细菌性传染病及降低病死率起着不可低估的作用。但肠道菌群失调是抗生素引起腹泻的主要机制，可通过分泌肠毒素改变肠上皮通透性，分泌免疫抑制蛋白使黏膜免疫失调，或直接作用肠上皮细胞破坏黏膜屏障除此之外，抗生素的使用会使一些益生菌减少，破坏微生态代谢系统，影响肠道上皮细胞的能量来源，影响对碳水化合物的吸收，从而导致渗透性腹泻的发生。抗生素也能引起肠道黏膜的变态反应或具有毒性作用，使肠粘膜损害，肠上皮纤毛萎缩，细胞内酶活性降低，从而发生吸收障碍性腹泻；有的抗生素(如大环内酯类)能够刺激胃肠道收缩，刺激肠蠕动，导致腹泻的发生。
[0003]中医学运用整体观念和辨证思维，随证加减，突出个体化治疗的优势。葛根芩连汤(Gegenqinlian Decoction，GQT)属中医经典古方之一，源于《伤寒论
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辨太阳病脉证并治中第六》，其组成为：葛根半斤，甘草(炙)二两，黄芩三两，黄连三两。本方以清热坚阴止利为主，兼以透表，具解表清里之功，为表里双解之剂，用于治疗太阳表邪内陷所致协热下利之证。
[0004]现代医学证实葛根芩连汤能够改善菌群失调腹泻，究其机制尚未清楚。PINK1/Parkin通路在很多疾病中的生物学保护作用已被广泛证实，但是在调节菌群失调性腹泻方面的报道尚少，故本申请根据中药通过PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在溃疡性结肠炎发病中的作用，观察葛根芩连汤(GQT)对菌群失调性腹泻大鼠模型动物结肠组织PINK1/Parkin表达水平的影响，探讨GQT治疗腹泻的作用机制。从本次实验结果得出抗生素可以促进菌群失调性腹泻大鼠结肠组织中PINK1和Parkin mRNA表达；而葛根芩连汤能降低菌群失调性腹泻大鼠结肠组织中线粒体自噬PINK1/Parkin表达水平，提示葛根芩连汤能通过影响PINK1和Parkin的表达，激活线粒体自噬，清除组织内受损的线粒体，从而达到治疗菌群失调性腹泻的效果。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法
建立。本专利技术对葛根芩连汤(GQT)对菌群失调性腹泻大鼠模型动物结肠组织PINK1/Parkin表达水平的影响进行了研究，通过HE染色观察大鼠结肠组织病理学改变，RT
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PCR检测葛根芩连汤对大鼠结肠中PINK1、Parkin mRNA表达的影响，观察葛根芩连汤(GQT)对菌群失调性腹泻大鼠模型动物结肠组织PINK1/Parkin表达水平的影响，确定葛根芩连汤(GQT)治疗腹泻的作用机制。通过HE染色和RT
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PAR检测，确定葛根芩连汤能降低菌群失调性腹泻大鼠结肠组织中线粒体自噬PINK1/Parkin表达水平，葛根芩连汤能通过影响PINK1和Parkin的表达，激活线粒体自噬，清除组织内受损的线粒体，从而达到治疗菌群失调性腹泻的效果。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案实现：一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立。
[0007]检测方法为通过制备菌群失调性腹泻大鼠模型，使用葛根芩连汤治疗后，使用HE染色和RT
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PAR检测大鼠结肠PINK1/Parkin受葛根芩连汤表达的影响。
[0008]前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，葛根芩连汤的制备：组方由葛根5份，黄芩3份，黄连3份，炙甘草2份组成，按照组方比例称取各药材，加适量水煎煮，过滤药液使用旋转蒸发器将药液浓缩，浓度为1g/mL，装入灭菌烧杯，放入冰箱保存备用。
[0009]前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，大鼠模型的制备按照以下步骤进行：
[0010](1)取SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定和硫酸庆大霉素混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃；
[0011](2)大鼠给药治疗结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品；
[0012]前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg
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1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg
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1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃，按生药量计算为7.02～1.755g
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kg
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[0013]更具体的说，前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg
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1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg
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1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃，按生药量计算为3.51g
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kg
‑1。
[0014]前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，步骤(2)中大鼠给药治疗7
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21d结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品。
[0015]更具体的说，前述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，步骤(2)中大鼠给药治疗14d结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：所述检测方法为通过制备菌群失调性腹泻大鼠模型，使用葛根芩连汤治疗后，使用HE染色和RT
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PAR检测大鼠结肠PINK1/Parkin受葛根芩连汤表达的影响。2.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：葛根芩连汤的制备：按重量比例称取葛根5份，黄芩3份，黄连3份，炙甘草2份，加适量水煎煮，过滤药液使用旋转蒸发器将药液浓缩，浓度为1g/mL，装入灭菌烧杯，放入冰箱保存备用。3.如权利要求1所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：大鼠模型的制备按照以下步骤进行：(1)取SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定和硫酸庆大霉素混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃；(2)大鼠给药治疗结束后，大鼠禁食不禁水6h，注射麻醉，用组织剪随机剪下大鼠结肠组织，去除组织周边多余脂肪，用预冷过的生理盐水反复冲洗干净，放滤纸上吸干液体，将一部分结肠组织固定在4％多聚甲醛溶液中，得A品；另一部分装入干燥的无菌离心管中，得B品。4.如权利要求3所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg
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1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg
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1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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10:00点完成造模，连续造模7d后进行评估，模型成功后给予葛根芩连汤煎剂灌胃，按生药量计算为7.02～1.755g
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‑1。5.如权利要求4所述大鼠菌群失调性腹泻结肠组织PINK1/Parkin的检测方法建立，其特征在于：步骤(1)中SD大鼠每日按剂量进行灌胃头孢拉定178.6mg.kg
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1和硫酸庆大霉素31.25mg.kg
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1混合抗生素进行造模，1次/日，连续7d，每日上午9:00
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【专利技术属性】
技术研发人员：何光志，张庚鑫，杨光勇，杜海洋，苏钢，田维毅，王文佳，涂小华，聂捡，刘丹，陈墨，陈未来，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：