吡咯赖氨酰-tRNA合成酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了吡咯赖氨酰

【技术实现步骤摘要】
吡咯赖氨酰
‑
tRNA合成酶突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及酶工程
，尤其涉及吡咯赖氨酰
‑
tRNA合成酶突变体及其应用。

技术介绍

[0002]酶作为一种具有特异性的高效生物催化剂，已被广泛地应用于医药、分析检测、工农业生产等领域。通过定点突变和定向进化，可以实现对酶的改造，以适应生产生活的需求。然而，遗传密码编码的天然氨基酸仅有20种，限制了酶的结构和功能的拓展。吡咯赖氨酰
‑
tRNA合成酶(PylRS)与它的同源tRNA
Pyl
是一种理想的遗传密码扩展工具，这种酶的不同突变体能够将超过100种非天然氨基酸(UAAs)整合入蛋白质中，使非天然氨基酸用于酶分子的改造成为可能。
[0003]酶工程的目标之一是提高其催化活性。有大量的研究发现，酶活性位点附近的氨基酸突变可以增加活性。从理性设计到定向进化，再到最近发展的计算机蛋白质设计，都可用来实现这一目标。然而，这些方法常常受到典型氨基酸固有反应活性的限制，无法大幅度改善酶活性或引入新的酶功能。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.吡咯赖氨酰
‑
tRNA合成酶突变体，其特征在于，由SEQ ID NO.3所示氨基酸序列突变所得，具体突变为以下任意一种：(1)311位的天冬酰胺突变为丙氨酸，313位的半胱氨酸突变为丙氨酸，且31位的缬氨酸突变为异亮氨酸；(2)311位的天冬酰胺突变为丙氨酸，313位的半胱氨酸突变为丙氨酸，且56位的苏氨酸突变为脯氨酸；(3)311位的天冬酰胺突变为丙氨酸，313位的半胱氨酸突变为丙氨酸，且100位的丙氨酸突变为谷氨酸；(4)311位的天冬酰胺突变为丙氨酸，313位的半胱氨酸突变为丙氨酸，其余突变位点由以下突变位点中的两个组合所得：31位的缬氨酸突变为异亮氨酸、56位的苏氨酸突变为脯氨酸、100位的丙氨酸突变为谷氨酸；(5)311位的天冬酰胺突变为丙氨酸，313位的半胱氨酸突变为丙氨酸，31位的缬氨酸突变为异亮氨酸，56位的苏氨酸突变为脯氨酸，且100位的丙氨酸突变为谷氨酸。2.一种如权利要求1所述的吡咯赖氨酰
‑
tRNA合成酶突变体的编码基因。3.一种包含权利要求2所述编码基因的重组载体。4.一种包含权利要求2所述编码基因的基因工程菌。5.如权利要求1所述的吡咯赖氨酰
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tRNA合成酶突变体在引入非天然氨基酸中的应用。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，包括：将包含权利要求2所述编码基因的重组载体与目标蛋白质粒共转化至感受态细胞中进行诱导培养，得到含非天然氨基酸的目标蛋白。7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述目标蛋白为GFP蛋白，所述目标蛋白质粒为pGFP2TAG，所述感受态细胞为大肠杆菌DH10B。8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述非天然氨基酸包括：3

【专利技术属性】
技术研发人员：于浩然，马爽，
申请(专利权)人：浙江大学杭州国际科创中心，
类型：发明
国别省市：