对磷脂酰肌醇聚糖-3（GPC3）具有亲和力的人脂质运载蛋白2的突变蛋白制造技术

本发明专利技术涉及针对磷脂酰肌醇聚糖

【技术实现步骤摘要】
对磷脂酰肌醇聚糖
‑
3(GPC3)具有亲和力的人脂质运载蛋白2的突变蛋白

技术介绍

[0001]磷脂酰肌醇聚糖
‑
3(GPC3)是一种属于糖基
‑
磷脂酰肌醇
‑
锚式硫酸肝素蛋白聚糖的磷脂酰肌醇聚糖家族的癌胚抗原。磷脂酰肌醇聚糖的特征是与称为硫酸肝素糖胺聚糖的复合多糖链共价连接。磷脂酰肌醇聚糖参与在细胞
‑
细胞外基质界面处的细胞信号传导(Sasisekharan等人，Nat.Rev.Cancer 2:521
‑
528(2002))。目前为止，已经识别了人磷脂酰肌醇聚糖家族的六种不同的成员。细胞膜结合的GPC3由通过一个或多个二硫键连接的两个亚基组成。
[0002]GPC3在发育中的胎儿肝脏和胎盘中表达，并在正常成人组织中下调或沉默。GPC3基因中的突变和消耗是人中胎儿生长过度(Simpson
‑
Golabi
‑
Behmel)或辛普森畸形综合征(Simpson dysmorphia syndrome)的原因。GPC3在各种癌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂质运载蛋白突变蛋白，其能够以约1nM或更低的K
D
的亲和力结合磷脂酰肌醇聚糖
‑
3(GPC3)，其中，与成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的线性多肽序列相比，所述突变蛋白在序列位置36、40、41、49、52、65、68、70、72、73、77、79、81、87、96、100、103、105、106、125、127、132、134、136和/或175处包含至少20个突变的氨基酸残基。2.根据权利要求1所述的突变蛋白，其中，与所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的线性多肽序列相比，所述突变蛋白的氨基酸序列包含以下突变的氨基酸残基中的至少一个：Leu 36
→
Val或Arg.；Ala 40
→
Leu、Val或Gly；Ile 41
→
Leu、Arg、Met、Gly或Ala；Gln 49
→
Pro或Leu；Tyr 52
→
Arg或Trp；Asn 65
→
Asp；Ser 68
→
Val、Gly、Asn或Ala；Leu 70
→
Arg、Ser、Ala或Val；Arg 72
→
Asp、Trp、Ala或Gly；Lys 73
→
Gly、Arg、Asn、Glu或Ser；Cys 76
→
Val或Ile；Asp 77
→
His、Met、Val、Leu、Thr或Lys；Trp 79
→
Lys、Ser 或Thr；Arg 81
→
Gly；Cys 87
→
Ser；Asn 96
→
Arg、Asp、Gln或Pro；Tyr 100
→
Gly、Glu、Pro或Gln；Leu 103
→
Glu、Gln、Asn、Gly、Ser或Tyr；Ser 105
→
Ala；Tyr 106
→
Asn、Ser或Thr；Lys 125
→
Glu；Ser 127
→
Arg或Tyr；Tyr 132
→
Trp或Ile；Lys 134
→
Ala或Phe；Thr 136
→
Ile；和Cys 175
→
Ala。3.根据权利要求1或2中任一项所述的突变蛋白，其中，当通过基本上如实施例4所述的表面等离子体共振(SPR)分析测量时，所述突变蛋白以比SEQ ID NO:3的突变蛋白更强的结合亲和力结合GPC3。4.根据权利要求1或2中任一项所述的突变蛋白，其中，当通过基本上如实施例5所述的基于用人、小鼠或猕猴GPC3转染的SK
‑
HEP
‑
1细胞的分析测量时，所述突变蛋白相比于SEQ ID NO:4的突变蛋白显示改善的EC50值。5.根据权利要求1或2中任一项所述的突变蛋白，其中，当通过基本上如实施例6所述的基于荧光的热变性分析测量时，所述突变蛋白比SEQ ID NO:3的突变蛋白更具生物物理稳定性。6.根据权利要求1或2中任一项所述的突变蛋白，其中，所述突变蛋白在对应于所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的线性多肽序列的序列位置28的序列位置处不包含突变。7.根据权利要求1或2中任一项所述的突变蛋白，其中，在所述突变蛋白的相应位置处移除在所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的线性多肽序列的位置65处的天然N
‑
糖基化位点Asn。8.根据权利要求1至7中任一项所述的突变蛋白，其中，与所述成熟hNGAL(SEQ ID NO:1)的线性多肽序列相比，所述突变蛋白的氨基酸序列包含以下氨基酸置换组之一：(a)Leu 36
→
Val；Ile 41
→
Leu；Gln 49
→
Leu；Tyr 52
→
Arg；Asn 65
→
Asp；Ser 68
→
Val；Leu 70
→
Ser；Arg 72
→
Trp；Lys 73
→
Arg；Asp 77
→
His；Trp 79
→
Lys；Arg 81
→
Gly；Cys 87
→
S...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：皮里斯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：