一种表达CD28激活型抗体的多能干细胞及其衍生物与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种表达CD28激活型抗体的多能干细胞及其衍生物与应用，所述多能干细胞或其衍生物的基因组导入有CD28激活型抗体的表达序列。本发明专利技术表达CD28激活型抗体的多能干细胞或其衍生物，可用于自体细胞诱导iPSCs或分化成MSCs这类低免疫源性细胞进行运用，其可在体内持续表达CD28激活型抗体，抑制CTLA

【技术实现步骤摘要】
一种表达CD28激活型抗体的多能干细胞及其衍生物与应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种表达CD28激活型抗体的多能干细胞及其衍生物与应用。

技术介绍

[0002]CD28是T淋巴细胞表面表达的共刺激分子，对T细胞的活化起到重要作用。它与APC(抗原递呈细胞)上的B7分子结合，介导T细胞的共刺激并促进其存活、增殖以及产生细胞因子。CD28与T细胞表面的协同抑制性分子受体CD152(CTLA-4)高度同源，通过与相同的配体B7家族分子(CD86(B7-2)和CD80(B7-1))竞争性的结合，传导T细胞激活所必需的共刺激信号。现有技术中已知宿主防御病毒感染和抗肿瘤中发挥关键性作用的是活化的T细胞。T细胞活化的双信号观点认为，第一信号来自由T细胞表面的TCR识别的MHC/抗原肽复合物，第二信号来自抗原呈递细胞表面表达的B7家族分子与T细胞表面CD28的结合。第一信号和第二信号同时存在时T细胞克隆活化并增殖，产生免疫效应。因此，CD28/B7信号对于免疫应答的启动具有相当重要的作用。
[0003]另一方面，在细胞治疗领域，同种异体的免疫兼容问题依然是一大难题。近年已有许多报道通过敲除B2M、CIITA等基因，实现HLA-I和HLA-II细胞表面或本身基因的缺失表达，进而使细胞具备免疫耐受或逃逸T/B细胞特异性免疫应答，产生免疫兼容的通用型PSCs，为更广泛的通用型PSCs源细胞、组织、器官应用奠定了重要的基础。也有报道细胞过表达CTLA4-Ig、PD-L1从而抑制同种异的免疫排斥。然而，这些方案要么免疫兼容不彻底，仍有通过其他途径发生同种异体的免疫排斥；要么彻底消除同种异体免疫排斥应答，但使供体源移植物的细胞本身同时丧失了抗原提呈的能力，这给受体带来了极大的致瘤性和病毒感染等疾病的风险。
[0004]为此，也有报道，不直接敲除B2M，而敲除HLA-A、HLA-B或一并敲除CIITA的同时，保留HLA-C，并构建12个覆盖人群超过90％的HLA-C免疫配型抗原，以此达到移植物的细胞仍具备一定程度的抗原提呈功能，并且同时能够通过HLA-C抑制NK细胞的固有免疫应答。但这类细胞，一来，HLA-I类抗原提呈的抗原类型缩小了三分之二以上，能够提呈的抗原完整性极大地不可逆的缩小，对于各种肿瘤、病毒以及其他疾病抗原的提呈具有极大的偏向性，仍然保留了相当程度的致瘤和病毒感染等疾病的风险，在CIITA同时敲除的情况下其致病风险更高；二来，12种高频率免疫配型的HLA-C抗原种族差异很大，通过我们核实计算部分地区仅能占到70％的比例，而中国、印度等人口大国目前尚未有权威的大样本量的HLA数据展示，这样制备出来的通用型PSCs使用仍受到巨大的配型空缺考验；第三，这种方法会经历数次反复的基因编辑工作，按每次基因编辑至少两轮单细胞分离培养计，整个过程至少需要六轮以上的单细胞分离培养，这些流程不可避免且极大概率地因多次基因编辑脱靶或染色质不稳定或因大量单细胞传代增殖造成细胞各种不可预测的突变，进而诱发致癌、代谢疾病等各种问题。由此可见，这类免疫兼容方案亦为“过渡时期”的权宜之计，仍有许多问题没有更好的解决。
[0005]此外，还有人设计通过诱导自杀基因在供体组织、细胞致病后诱导杀死，这样做的后果将产生严重的组织坏死、细胞因子风暴等不可预知的疾病风险问题，并且这类设计的细胞杀死后将不复存在合适的供体细胞、组织和器官又是一大难题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种多能干细胞或其衍生物；
[0007]本专利技术的另一目的在于提供另一种多能干细胞或其衍生物；
[0008]本专利技术的另一目的在于提供上述两种多能干细胞或其衍生物在制备CD28低表达肿瘤治疗药物中的应用；
[0009]本专利技术的另一目的在于提供一种制剂。
[0010]本专利技术所采取的技术方案是：
[0011]本专利技术的第一个方面，提供：
[0012]一种多能干细胞或其衍生物，该多能干细胞或其衍生物的基因组导入有CD28激活型抗体的表达序列。
[0013]专利技术人发现，在多能干细胞或其衍生物中导入CD28激活型抗体的表达序列后，多能干细胞或其衍生物中分泌CD28激活型抗体，这些CD28激活型抗体能有效促进CD28与其配体的结合，从而能够有效清除肿瘤细胞。
[0014]进一步地，上述CD28激活型抗体包括CTLA-4抗体，上述CTLA-4抗体序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]更进一步地，上述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入至少一种免疫兼容分子的表达序列，上述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达。
[0016]更进一步地，上述与免疫应答相关的基因包括：
[0017]主要组织相容性复合体基因，包括：HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRA、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1和HLA-DPB1中的至少一种；
[0018]主要组织相容性复合体相关基因，包括：B2M和CIITA中的至少一种。
[0019]更进一步地，上述免疫兼容分子包括以下的至少一种：
[0020](1)免疫耐受相关基因，包括CD47和HLA-G中的至少一种；
[0021](2)HLA-C类分子，包括人群中比例合计超过90％的HLA-C复等位基因，或者超过90％的HLA-C复等位基因与B2M构成的融合蛋白基因；
[0022](3)靶向主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA-miR，上述主要组织相容性复合体基因包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRA、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1和HLA-DPB1中的至少一种；
[0023](4)靶向主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA-miR，上述主要组织相容性复合体相关基因包括B2M和CIITA中的至少一种。
[0024]更进一步地，上述主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA-miR的靶序列为SEQ ID NO.15～SEQ ID NO.102中的至少一种；主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA-miR的靶序列为SEQ ID NO.2～SEQ ID NO.14中的至少一种。
[0025]更进一步地，上述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入shRNA和/或miRNA加
工复合体相关基因和/或抗干扰素效应分子。
[0026]其中，shRNA和/或miRNA加工复合体相关基因包括Drosha、Ago1、Ago2、Dicer1、Exportin-5、TRBP(TARBP2)、PACT(PRKRA)、DGCR8中的至少一种；上述抗干扰素效应分子为靶向PKR、2-5As、IRF-3或IRF-7的shR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞或其衍生物的基因组导入有CD28激活型抗体的表达序列。2.根据权利要求1所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述CD28激活型抗体包括CTLA-4抗体，所述CTLA-4抗体序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求2所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入至少一种免疫兼容分子的表达序列，所述免疫兼容分子用于调控多能干细胞细胞或其衍生物中与免疫应答相关的基因的表达。4.根据权利要求3所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述与免疫应答相关的基因包括：主要组织相容性复合体基因，包括：HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRA、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1和HLA-DPB1中的至少一种；主要组织相容性复合体相关基因，包括：B2M和CIITA中的至少一种。5.根据权利要求3所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述免疫兼容分子包括以下的至少一种：(1)免疫耐受相关基因，包括CD47和HLA-G中的至少一种；(2)HLA-C类分子，包括人群中比例合计超过90％的HLA-C复等位基因，或者超过90％的HLA-C复等位基因与B2M构成的融合蛋白基因；(3)靶向主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA-miR，所述主要组织相容性复合体基因包括HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRA、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1和HLA-DPB1中的至少一种；(4)靶向主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA-miR，所述主要组织相容性复合体相关基因包括B2M和CIITA中的至少一种。6.根据权利要求5所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述主要组织相容性复合体基因的shRNA和/或shRNA-miR的靶序列为SEQ ID NO.15～SEQ ID NO.102中的至少一种；主要组织相容性复合体相关基因的shRNA和/或shRNA-miR的靶序列为SEQ IDNO.2～SEQ ID NO.14中的至少一种。7.根据权利要求3所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述多能干细胞或其衍生物的基因组中还导入shRNA和/或miRNA加工复合体相关基因和/或抗干扰素效应分子，其中：shRNA和/或miRNA加工复合体相关基因包括Drosha、Ago1、Ago2、Dicer1、Exportin-5、TRBP(TARBP2)、PACT(PRKRA)、DGCR8中的至少一种；所述抗干扰素效应分子为靶向PKR、2-5As、IRF-3或IRF-7的shRNA和/或shRNA-miR中的至少一种。8.根据权利要求7所述的多能干细胞或其衍生物，其特征在于，所述靶向PKR、2-5As、IRF-3或IRF-7的shRNA和/或shRNA-miR的靶序列如SEQ ID NO.103～SEQ ID NO.162所示。9.根据权利要求6或8所述的多能干...

【专利技术属性】
技术研发人员：王淋立，陈月花，杨建国，莫健，
申请(专利权)人：王淋立，
类型：发明
国别省市：