用于治疗剂投予的组成物及方法技术

本文提供用于投予包含细胞类型选择性调控组件的载体的方法。此类投予的方法包含使用诸如脑室内投予、鞘内投予或静脉内投予的方法向中枢神经系统投予一或多种核酸分子。向中枢神经系统投予一或多种核酸分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗剂投予的组成物及方法

技术介绍

[0001]基因疗法及反义寡核苷酸疗法作为用于神经疾病或病症的治疗的巨大潜力早已被注意到。与仅依靠治疗神经疾病或障碍的症状的手术或药物不同，患者可通过直接靶向潜在疾病/病症病因被治疗，尤其是具有潜在遗传因素的患者。此外，通过靶向神经疾病或病症的潜在遗传病因，基因疗法及基于反义寡核苷酸的治疗方法可提供比标准药物疗法更长时段的持续治疗且具有有效治愈患者的潜力。然而，尽管如此，神经病症的基因疗法及基于反义寡核苷酸的治疗方法的临床应用仍需要在若干方面中进行改良。这些疗法关注的一个领域为向中枢神经系统有效递送治疗剂。诸如AAV9的载体在小鼠静脉内投予时可以穿过血脑屏障，但在较大动物的静脉内递送此类载体是困难的，因为需要极高载体剂量来保证有效且周边器官中的高转导可能与毒性有关。另一投予途径(实质内(intraparenchymal)注射)需要较低剂量的载体且可有效转导至中枢神经系统(central nervous system；CNS)的靶向区域。然而，实质内注射可能不适用于治疗需要在整个CNS中递送载体的病症。
[0002]因此，需要鉴别用于将基因疗法或基因表现靶向CNS中的所关注组织或细胞类型的组件及其使用方法，其可减少脱靶效应、增加目标组织及/或细胞类型中的治疗功效及/或通过降低实现功效所需的有效剂量来增加患者安全性及耐受性。

技术实现思路

[0003]本文提供在一些具体实施例中可用于治疗诸如Dravet综合征(Dravet syndrome)的神经元疾病的组成物及方法。
[0004]在一些具体实施例中，本专利技术提供一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向灵长类动物脑室内(intracerebroventricular；ICV)投予载体，其中载体包含细胞类型选择性调控组件。在一些具体实施例中，本专利技术提供一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中载体包含调控组件，其中与可操作地连接至CMV启动子时的转基因表现相比，调控组件使得转基因表现增加至少2倍。在一些具体实施例中，本专利技术提供一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中载体为单侧投予。在一些具体实施例中，本专利技术提供一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中载体不为自身互补型AAV。在某些具体实施例中，灵长类动物为人类。在某些具体实施例中，灵长类动物为非人类灵长类动物。在某些具体实施例中，非人类灵长类动物为旧大陆猴、红毛猩猩、大猩猩、黑猩猩、食蟹猕猴、恒河猕猴或豚尾猕猴。在某些具体实施例中，载体包含可操作地连接至调控组件的核苷酸序列。在某些具体实施例中，调控组件在神经元细胞中选择性地表现。在某些具体实施例中，神经元细胞选自以下种类及其组合：单极、双极、多极或伪单极神经元。在某些具体实施例中，神经元细胞为GABA性(GABAergic)神经元。在某些具体实施例中，调控组件在胶细胞中选择性地表现。在某些具体实施例中，胶细胞选自以下种类及其组合：星状细胞、寡树突神经胶质细胞、室管膜细胞、许旺细胞及卫星细胞。在某些具体实施例中，调控组件在非神经元细胞中选择性地表现。在某些具体实施例中，载体被投予至超过一个脑室。在某些具
体实施例中，载体为两侧投予。在某些具体实施例中，载体为同时投予。在某些具体实施例中，载体为相继投予。在某些具体实施例中，载体的各剂为相隔至少24小时投予。在某些具体实施例中，载体被投予至一个脑室。在某些具体实施例中，灵长类动物进一步接受载体的静脉内投予。在某些具体实施例中，灵长类动物进一步接受载体的鞘内投予。在某些具体实施例中，鞘内投予包含鞘内脑池投予或鞘内腰椎投予。在某些具体实施例中，载体包含编码多肽的核苷酸序列。在某些具体实施例中，多肽为DNA结合蛋白。在某些具体实施例中，DNA结合蛋白选自以下种类及其组合：锌指蛋白(zinc finger protein；ZFP)、锌指核酸酶(zinc finger nuclease；ZFN)或转录活化因子样效应物核酸酶(transcription activator
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like effector nuclease；TALEN)。在某些具体实施例中，核苷酸序列为密码子优化变体及/或其片段。在某些具体实施例中，载体包含编码引导RNA(gRNA)的核苷酸序列。在某些具体实施例中，载体包含编码减少目标基因的表现的干扰RNA(RNAi)的核苷酸序列。在某些具体实施例中，RNAi减少选自以下种类及其组合的目标基因的表现：SOD1、HTT、τ或α
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突触核蛋白。在某些具体实施例中，载体包含编码减少目标基因的表现的反义寡核苷酸的核苷酸序列。在某些具体实施例中，载体选自以下种类及其组合：慢病毒、逆转录病毒、质体或单纯疱疹病毒(herpes simplex virus；HSV)。在某些具体实施例中，载体为腺相关病毒(adeno
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associated virus；AAV)载体。在某些具体实施例中，AAV为单股AAV。在某些具体实施例中，AAV为自身互补型AAV。在某些具体实施例中，腺相关病毒载体为以下者中的任一者：AAV1、scAAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、scAAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、scAAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10、禽类AAV、牛类AAV、犬类AAV、马类AAV、灵长类AAV、非灵长类AAV及绵羊类AAV，或其任何杂合体。在某些具体实施例中，AAV载体为AAV5。在某些具体实施例中，AAV载体为AAV9。在某些具体实施例中，载体包含5'AAV反向末端重复(inverted terminal repeat；ITR)序列及3'AAV ITR序列。在某些具体实施例中，载体在药学上可接受的载剂中投予。在某些具体实施例中，载体为与造影剂组合投予。在某些具体实施例中，载体不与造影剂组合投予。在某些具体实施例中，投予为通过注射途径进行。在某些具体实施例中，投予为通过输注途径进行。
[0005]在一些具体实施例中，本专利技术提供一种用于表现目的基因或其生物活性变体及/或片段的方法，其包含向灵长类动物投予治疗有效量的编码目的基因的腺相关病毒1(AAV1)载体或腺相关病毒5(AAV5)载体，其中投予途径选自以下种类及其组合：静脉内投予、鞘内投予、脑室内投予、实质内投予或其组合。在某些具体实施例中，灵长类动物为人类。在某些具体实施例中，灵长类动物为非人类灵长类动物。在某些具体实施例中，非人类灵长类动物为旧大陆猴、红毛猩猩、大猩猩、黑猩猩、食蟹猕猴、恒河猕猴或豚尾猕猴。在某些具体实施例中，AAV1载体或AAV5载体包含可操作地连接至调控组件的核苷酸序列。在某些具体实施例中，调控组件具有细胞类型选择性。在某些具体实施例中，调控组件在神经元细胞中选择性地表现。在某些具体实施例中，神经元细胞选自以下种类及其组合：单极、双极、多极或伪单极神经元。在某些具体实施例中，神经元细胞为GABA性神经元。在某些具体实施例中，调本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向该灵长类动物脑室内(intracerebroventricular；ICV)投予载体，其中该载体包含细胞类型选择性调控组件。2.一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向该灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中该载体包含调控组件，其中与可操作地连接至CMV启动子时的转基因表现相比，该调控组件使得转基因表现增加至少2倍。3.一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向该灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中该载体为单侧投予。4.一种向灵长类动物投予载体的方法，其包含向该灵长类动物脑室内(ICV)投予载体，其中该载体不是自身互补型AAV。5.如权利要求1的方法，其中该灵长类动物为人类。6.如权利要求1的方法，其中该灵长类动物为非人类灵长类动物。7.如权利要求6的方法，其中该非人类灵长类动物为旧大陆猴、红毛猩猩、大猩猩、黑猩猩、食蟹猕猴、恒河猕猴或豚尾猕猴。8.如权利要求3至7中任一项的方法，其中该载体包含可操作地连接至调控组件的核苷酸序列。9.如权利要求1、2或8的方法，其中该调控组件在神经元细胞中选择性地表现。10.如权利要求9的方法，其中该等神经元细胞选自以下种类及其组合：单极、双极、多极或伪单极神经元。11.如权利要求9的方法，其中该等神经元细胞为GABA性(GABAergic)神经元。12.如权利要求2或8的方法，其中该调控组件在胶细胞中选择性地表现。13.如权利要求12的方法，其中该等胶细胞选自以下种类及其组合：星状细胞、寡树突神经胶质细胞、室管膜细胞、许旺细胞及卫星细胞。14.如权利要求2或8的方法，其中该调控组件在非神经元细胞中选择性地表现。15.如权利要求1至14中任一项的方法，其中该载体为投予至超过一个脑室。16.如权利要求1至2或4至15中任一项的方法，其中该载体为两侧投予。17.如权利要求15或16的方法，其中该载体为同时投予。18.如权利要求15或16的方法，其中该载体为相继投予。19.如权利要求18的方法，其中该载体的各剂为相隔至少24小时投予。20.如权利要求1至14中任一项的方法，其中该载体为投予至一个脑室。21.如权利要求1至20中任一项的方法，其中该灵长类动物进一步接受该载体的静脉内投予。22.如权利要求1至21中任一项的方法，其中该灵长类动物进一步接受该载体的鞘内投予。23.如权利要求22的方法，其中该鞘内投予包含鞘内脑池给药或鞘内腰椎给药。24.如权利要求1至23中任一项的方法，其中该载体包含编码多肽的核苷酸序列。25.如权利要求24的方法，其中该多肽为DNA结合蛋白。26.如权利要求25的方法，其中该DNA结合蛋白选自以下种类及其组合：锌指蛋白(zinc finger protein；ZFP)、锌指核酸酶(zinc finger nuclease；ZFN)或转录活化因子样效应物核酸酶(transcription activator
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like effector nuclease；TALEN)。
27.如权利要求24至26中任一项的方法，其中该核苷酸序列为密码子优化变体及/或其片段。28.如权利要求1至23中任一项的方法，其中该载体包含编码引导RNA(gRNA)的核苷酸序列。29.如权利要求1至28中任一项的方法，其中该载体包含编码减少目标基因的表现的干扰RNA(RNAi)的核苷酸序列。30.如权利要求29的方法，其中该RNAi减少选自以下种类及其组合的目标基因的表现：SOD1、HTT、τ或α
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突触核蛋白(synuclein)。31.如权利要求1至30中任一项的方法，其中该载体包含编码减少目标基因的表现的反义寡核苷酸的核苷酸序列。32.如权利要求31中任一项的方法，其中该载体选自以下种类及其组合：慢病毒、逆转录病毒、质体或单纯疱疹病毒(herpes simplex virus；HSV)。33.如权利要求1至3或5至31中任一项的方法，其中该载体为腺相关病毒(adeno
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associated viral；AAV)载体。34.如权利要求33的方法，其中该AAV为单股AAV。35.如权利要求33的方法，其中该AAV为自身互补型AAV。36.如权利要求33至35中任一项的方法，其中该腺相关病毒载体为以下者中的任一者：AAV1、scAAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、scAAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、scAAV9、AAV10、AAV11、AAV12、rh10、禽类AAV、牛类AAV、犬类AAV、马类AAV、灵长类AAV、非灵长类AAV及绵羊类AAV，或其任何杂合体。37.如权利要求33至36中任一项的方法，其中该AAV载体为AAV5。38.如权利要求33至36中任一项的方法，其中该AAV载体为AAV9。39.如权利要求33至38中任一项的方法，其中该载体包含5'AAV反向末端重复(inverted terminal repeat；ITR)序列及3'AAV ITR序列。40.如权利要求1至39中任一项的方法，其中该载体为于药学上可接受的载剂中投予。41.如权利要求1至40中任一项的方法，其中该载体为与造影剂组合投予。42.如权利要求1至40中任一项的方法，其中该载体不与造影剂组合投予。43.如权利要求1至42中任一项的方法，其中该投予为通过注射途径进行。44.如权利要求1至43中任一项的方法，其中该投予为通过输注途径进行。45.一种用于表达目的基因或其生物活性变体及/或片段的方法，其包含向灵长类动物投予治疗有效量的编码该目的基因的腺相关病毒1(AAV1)载体或腺相关病毒5(AAV5)载体，其中投予途径选自以下种类及其组合：静脉内投予、鞘内投予、脑室内投予、实质内(intraparenchymal)投予。46.如权利要求45的方法，其中该灵长类动物为人类。47.如权利要求45的方法，其中该灵长类动物为非人类灵长类动物。48.如权利要求47的方法，其中该非人类灵长类动物为旧大陆猴、红毛猩猩、大猩猩、黑猩猩、食蟹猕猴、恒河猕猴或豚尾猕猴。49.如权利要求45至48中任一项的方法，其中该AAV1载体或AAV5载体包含可操作地连接至调控组件的核苷酸序列。
50.如权利要求49的方法，其中该调控组件具有细胞类型选择性。51.如权利要求50的方法，其中该调控组件在神经元细胞中选择性地表现。52.如权利要求51的方法，其中该等神经元细胞选自以下种类及其组合：单极、双极、多极或伪单极神经元。53.如权利要求51的方法，其中该等神经元细胞为GABA性神经元。54.如权利要求50的方法，其中该调控组件在胶细胞中选择性地表现。55.如权利要求54的方法，其中该等胶细胞选自以下种类及其组合：星状细胞、寡树突神经胶质细胞、室管膜细胞、许旺细胞及卫星细胞。56.如权利要求49的方法，其中该调控组件在非神经元细胞中选择性地表现。57.如权利要求45至56中任一项的方法，其中该AAV1或AAV5...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：编码治疗公司，
类型：发明
国别省市：