一株副球菌GN-9及其用途制造技术

本发明专利技术属于微生物资源开发利用领域。本发明专利技术公开了一株副球菌(Paracoccus sp.)GN

【技术实现步骤摘要】
一株副球菌GN
‑
9及其用途


[0001]本专利技术属于生物工程


技术介绍

[0002]氮素是植物生长过程中最关键的营养元素，是氨基酸、蛋白质的重要组成成分。土壤中可利用的氮素十分有限，不能最大限度满足作物的高产需求。人为施用氮肥是实现作物高产最重要措施之一，但氮肥过量会改变土壤氮循环，使微生物生物量氮显著减少，导致盐碱化加剧。盐离子过度富集和高pH值除引发渗透胁迫、植物细胞水分损失和中毒外，还影响微生物的活动，制约氮素及其他养分的转化和供应，致使土壤中可利用的营养元素更为缺乏。
[0003]在农业生态系统中，作物生物量中约24％的氮素来自非共生N2O固定。固氮菌能将空气中的氮转化为植物可利用的铵盐，为植物生长发育提供必需的养分。施用固氮菌能减轻高盐胁迫对植物造成的危害，促进植物生长，显著提高土壤的供氮能力，降低土壤pH与电导率，进而使植物根系微生态环境得到改善。为此，需要充分挖掘可耐受极端环境的固氮微生物资源，将空气中的氮素转化为植物所需要的养分，实现化肥用量的有效减少。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提供一株具有耐盐碱效果的副球菌GN
‑
9，其保藏编号为CGMCC NO.23114。
[0005]本专利技术所提供的副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9，已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC NO.23114，保藏日期为：2021年8月5日，保藏单位简称为CGMCC，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0006]本专利技术的第二目的是提供增产促生的菌株在菌剂、菌肥中应用。
[0007]本专利技术提供的副球菌GN
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9，生长周期短、无生态毒性、可利用的碳源种类丰富，能够固定空气中的氮气，有效分解土壤中的难溶性磷、钾等大量元素，同时能够有效促进植株生长，有利于农业的无公害生产和农业可持续发展。
附图说明：
[0008]图1是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9菌株固氮筛选结果图。
[0009]图2是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9解磷结果图。
[0010]图3是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9解钾结果图。
[0011]图4是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9产生长素、铁载体效果图。
[0012]图5是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9pH敏感性测定结果图。
[0013]图6是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9耐盐结果图。
[0014]图7是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9对玉米促生效果盆栽结果图。
[0015]图8是副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9对水稻促生效果盆栽结果图。
具体实施方式：
[0016]如无特殊说明，下列实施例中待测菌株均指副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9。
[0017]如无特殊说明，下列实施例中的活化均指副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9，固氮固体培养基上扩大培养三次。
[0018]实施例1
[0019]菌种的分离与鉴定
[0020]1.培养基：
[0021]阿须贝固氮菌培养基(Ashby 1L)：磷酸二氢钾0.2g，硫酸镁0.2g，氯化钠0.2g，碳酸钙5.0g，甘露醇10g，硫酸钙0.1g，用ddH2O定容，调pH至7.0
‑
7.5。
[0022]固氮培养基(1L)：甘露醇20g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钾0.8g，硫酸镁0.2g，硫酸钙0.1g，酵母膏0.5g，氯化铁微量，钼酸钠微量，用ddH2O定容，调pH至7.2。
[0023]2.菌株来源：
[0024]固氮菌分离自珊瑚砂。取5g样品放入100ml离心管中，加入50ml无菌水震荡均匀，置于室温，静置至澄清。在超净工作台中将制备好的土壤悬浮液进行梯度稀释，分别取100μL悬浮液进行10
‑3、10
‑4、10
‑5倍稀释液在固氮培养基上进行涂布，重复3次，28℃培养24h，具有固氮作用的菌株可溶解阿须贝固氮菌培养基中的碳酸钙，形成透明圈，24h后挑取形成透明圈的菌落分别划线纯化，重复纯化3次。将得到的纯的单菌落转移到试管斜面培养基中，放入4℃冰箱保存备用。
[0025]3.筛选结果：
[0026]分离得到如图1所示，菌株分类特性：菌落呈圆形，白色半透明，粘稠状；革兰氏染色为阴性，不运动，好氧，可将硝酸盐、亚硝酸盐或氧化氮还原为N2。将该菌株命名为菌株GN
‑
9。
[0027]4.细菌菌株鉴定方法：
[0028]采用TIANGEN细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。以待测菌株基因组DNA为模板，利用细菌16S rRNA基因通用引物27F/1492R扩增目的片段，将PCR原液送博迈德生物工程股份有限公司测序。16S rRNA基因序列分析，在NCBI上经过序列对比鉴定，菌株GN
‑
9是以MW177952为标准菌株的副球菌(Paracoccus sp.)，测序结果如SEQ ID NO.1所示序列。
[0029]菌株GN
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9已于2021年8月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为CGMCC No.23114，分类命名为副球菌(Paracoccus sp.),该中心地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，该中心简称为CGMCC。
[0030]实施例2
[0031]菌株生理生化分析
[0032]采用梅里埃API 20NE非发酵G
‑
杆菌鉴定试剂盒试验菌株GN
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9生理生化指标。
[0033]GN
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9能利用葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖和甘露糖作为唯一碳源，不能利用半乳糖。
[0034]硝酸钾还原试验为阳性，表明GN
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9可还原硝酸盐。
[0035]氧化酶、脲素试验均呈阳性，表明该菌可以分解过氧化氢和尿素。
[0036]详细结果如下表：
[0037]表1生理生化性质分析
[0038]Table 1 Analysis of Physiological and Biochemical Properties
[0039][0040]注：+：阳性反应；
‑
：阴性反应
[0041]实施例3
[0042]菌株解磷能力试验结果
[0043]解磷培养基(1L)：葡萄糖10g，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株副球菌(Paracoccus sp.)GN
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9，其保藏编号为CGMCC NO.23114。2.副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9在制备固氮菌剂中的应用。3.副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9在制备解磷菌剂中的应用；所述解磷是将植物无法吸收的无效磷转化成植物可以吸收的有效磷。4.副球菌(Paracoccus sp.)GN
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9在制备解钾菌剂中的应用；所述解钾是将钾长石的硅铝酸盐的无机矿物转化成植物可以吸收的可溶钾。5.副球菌(Paracoccus sp.)GN
‑
9在产生长素中的应用。6.副球菌(Paracoccus sp.)...

【专利技术属性】
技术研发人员：仲乃琴，曹晶晶，赵盼，汪志琴，赵永龙，刘璐，王秀，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：