一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用技术

本发明专利技术涉及一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用。所述重组人源胶原蛋白的制备方法包括培养菌体、诱导表达重组人源胶原蛋白、离心收集菌体、破碎菌体、离心收集上清液、过镍琼脂糖凝胶柱层析、过葡聚糖凝胶柱层析、洗脱等步骤，工艺简单，制备得到的重组人源胶原蛋白纯度高、稳定性好，活性保持时间长，能够显著地促进细胞增殖及迁移，在护肤类产品领域具有重要的应用价值。域具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用


[0001]本专利技术属于蛋白提取
，涉及一种重组人源胶原蛋白的制备方法及其产品与应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％
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30％，某些生物体甚至高达80％以上。胶原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性，因此在食品、医药、组织工程、化妆品等领域获得广泛的应用。但是胶原蛋白在临床应用中还存在许多问题，主要障碍是所用胶原的来源，来源于动物或者人体的胶原蛋白主要缺点是可能会传播疾病，过敏反应，病原体污染等。因此，制备一种能等效且安全替代胶原蛋白的重组人源胶原蛋白是目前亟待完成的任务。
[0003]重组人源胶原蛋白结构跟人体来源的胶原蛋白一模一样，同时在此基础上进行优化，提高胶原蛋白的亲水性以及活性。并且其含有丰富的亲水基团，具有良好的成膜性，保持皮肤角质层水分。另一方面可以增加成纤维细胞的粘附和增殖，补充伤口创面的胶原蛋白并促进其沉积，降低瘢痕的发生几本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，所述重组人源胶原蛋白的制备方法包括如下步骤：(1)培养菌体，诱导表达重组人源胶原蛋白，得发酵液；(2)离心收集菌体、破碎菌体、离心收集上清液；(3)步骤(2)所得上清液过镍琼脂糖凝胶柱层析、洗脱，得洗脱液；(4)步骤(3)所得洗脱液过葡聚糖凝胶柱层析、洗脱，得所述重组人源胶原蛋白。2.如权利要求1所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述菌体为大肠杆菌工程菌；优选地，所述培养菌体中使用的培养基包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、消泡剂和无机盐；优选地，所述蛋白胨包括胰蛋白胨和/或酪蛋白胨；优选地，所述酵母提取物包括酵母粉、酵母浸出物、酵母裂解物或酵母裂解提取物中的任意一种；优选地，所述消泡剂包括椰油和/或柠檬酸；优选地，所述无机盐包括氯化钠、硫酸镁、硫酸铵、氯化钙或磷酸盐中的任意一种或至少两种的组合；优选地，所述磷酸盐包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾或磷酸二氢钾中的任意一种或至少两种的组合。3.如权利要求1或2所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述培养菌体中使用的培养基包括浓度为20
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30g/L的蛋白胨、浓度为20
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30g/L的酵母提取物、浓度为1
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3g/L的葡萄糖、浓度为0.8
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1.2g/L的消泡剂、浓度为4
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6g/L的氯化钠、浓度为0.8
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1.2g/L的硫酸镁、浓度为0.4
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0.6g/L的硫酸铵、浓度为0.015
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0.025g/L的氯化钙、浓度为8
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12mmol/L的磷酸盐和水；优选地，步骤(1)所述培养的温度为36
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38℃；优选地，步骤(1)所述诱导是指当菌体长至对数生长中期时进行，使用的诱导剂包括IPTG，IPTG在培养基中的终浓度为0.3
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0.5mmol/L；优选地，所述诱导的温度为33
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35℃，所述诱导的时间为3
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5h。4.如权利要求1
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3中任一项所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述离心收集菌体的速度为20
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50L/h，转速为12000
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18000rpm；优选地，步骤(2)所述破碎菌体采用高压破碎，压力为800
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1200bar；优选地，步骤(2)所述离心收集上清液中离心的转速为12000
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16000rpm，离心的时间为30
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50min；优选地，步骤(2)所述离心收集上清液后还包括过膜；优选地，所述膜的尺寸为0.45μm。5.如权利要求1
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4中任一项所述的重组人源胶原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述过镍琼脂糖凝胶柱层析前还包括用A液平衡镍琼脂糖凝胶柱，所述A液包括磷酸缓冲液、氯化钠和吐温80；优选地，所述A液包括浓度为15
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25mM的磷酸缓冲液、浓度为0.15
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0.25M的氯化钠和质量浓度为0.03
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0.07％的吐温80，所述A液的p...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛永永，雷登凤，高合意，曾飒，蔡晓红，
申请(专利权)人：广州栋方生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：