【技术实现步骤摘要】
一种具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选、制备及应用
[0001]本专利技术涉及一种具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选、制备及应用。
技术介绍
[0002]大麦是我国主要的种植作物之一，其主要用于啤酒酿造及用作牲畜铺草或粗饲料。研究发现，大麦中含有丰富的功能性蛋白质和多肽，涵盖了人类对氨基酸的大部分需求，是开发健康谷物食品的宝贵资源。
[0003]然而，大麦蛋白的溶解性较差，难以被人体吸收及利用。已有研究发现，通过乳酸菌发酵，大麦的水溶性蛋白的含量增加，且发酵后的大麦蛋白的营养功能得到改善。经研究发现，发酵后的大麦蛋白能够抑制脂肪细胞内脂滴的合成，降低脂肪细胞的分化率，由此可见，大麦经过生物发酵，产生了具有降脂生物活性功能的蛋白。然而，如何筛选及鉴定该具有降脂生物活性功能的物质为何种蛋白，对于大麦新功能的开发及利用具有重要的意义。且由于这种具有降脂生物活性功能的蛋白是大麦发酵后的产物，而影响发酵生产的因素又是多方面的，如何确定这些因素及如何更好地分离大麦发酵产物中的降脂蛋白，以达到更好地制备具有降脂活性的发酵大麦蛋白，也是...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：S1：制备发酵大麦提取物：将大麦籽粒粉碎脱脂后进行多级液态发酵，发酵完成后的发酵液分别离心，取上清液冻干，获得发酵大麦总提取物，以备降脂蛋白蛋白筛选；S2：降脂蛋白筛选：将制备的发酵大麦总提取物，依次进行硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析筛选，并结合油酸诱导的HepG2细胞高脂模型进行降脂活性检测，获得具备最佳降脂能力的发酵大麦蛋白；S3：降脂蛋白鉴定：将筛选的降脂蛋白进行鉴定分析，确定筛选的具备最佳降脂能力的发酵大麦蛋白的具体氨基酸序列及相关的生物学信息。2.根据权利要求1所述的具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：步骤S1中所述的多级液态发酵为：选取不同的发酵菌种，分别设置不同水平的料液比、发酵菌种添加量、发酵温度及发酵pH，分别发酵0h、4h、8h、12h、16h、20h、24h、28h、32h、48h，用于制备发酵大麦总提取物，以备降脂蛋白蛋白筛选。3.根据权利要求1所述的具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：步骤S2中所述的降脂蛋白筛选的具体操作为：S2
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1：将发酵大麦总提取物进行蛋白含量测定及SDS
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PAGE电泳，选择蛋白含量发生显著变化且蛋白分子量分布明显不同的具备代表性的大麦提取物，采用油酸诱导的HepG2细胞高脂模型进行降脂活性检测，获得具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅰ；S2
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2：将获得的具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅰ进行硫酸铵分级沉淀，获得不同硫酸铵饱和度的粗蛋白，再次对其进行SDS
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PAGE电泳，选择分子量分布明显不同的具备代表性的粗蛋白，采用油酸诱导的HepG2细胞高脂模型进行降脂活性检测，获得具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅱ；S2
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3：将获得的具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅱ进行阴离子交换层析，获得各层析组分，再次采用油酸诱导的HepG2细胞高脂模型进行降脂活性检测，获得具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅲ；S2
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4：将获得的具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅲ进行凝胶过滤层析，分离纯化，制得发酵大麦凝胶过滤层析组分，最后再次采用油酸诱导的HepG2细胞高脂模型进行降脂活性检测，获得具备最佳降脂能力的大麦提取物Ⅳ，该大麦提取物Ⅳ即为具备最佳降脂能力的发酵大麦蛋白。4.根据权利要求3所述的具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：步骤S2
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1中所述选择蛋白含量发生显著变化且蛋白分子量分布明显不同的具备代表性的大麦提取物，为选择0h、4h、8h、16h、24h、48h六个时间段的发酵大麦提取物。5.根据权利要求3所述的具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：步骤S2
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2中所述的硫酸铵分级沉淀，将大麦提取物Ⅰ复溶，进行硫酸铵分级沉淀透析脱盐后，获得不同饱和度硫酸铵沉淀析出蛋白组分，选择分子量分布不同的硫酸铵沉淀析出组分对其进行降脂活性检测。6.根据权利要求3所述的具有降脂活性的发酵大麦蛋白的筛选方法，其特征在于：步骤S2
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3中所述的阴离子交换层析，将大麦提取物Ⅱ溶解于20mM、pH 8.0Tris
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HCl缓冲液中，上样于Q...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖香，张家艳，赵延胜，祝莹，白娟，邓欢，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：
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