一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，所述的应用是在制备调控癌细胞增殖和/或生长的产品中的应用。本发明专利技术发现的一种四次跨膜蛋白TSPAN8的Ser129磷酸化位点促进了肿瘤的发生、发展和转移：由于EGF/EGFR信号通路的活化伴随着一系列蛋白激酶激活，通过对TSPAN8的Co

【技术实现步骤摘要】
一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌是导致女性死亡的主要恶性肿瘤之一。中国每年新诊断乳腺癌病例占全球的12.2％，并且死亡病例占全球的9.6％。侵袭转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因，而在乳腺癌发生发展过程中，跨膜蛋白(Membrane Proteins,MPs)发挥重要作用。TSPAN8是一类四次跨膜蛋白，广泛表达于真核细胞胞膜上，具有4个高度疏水跨膜结构域，蛋白两侧的N
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末端和C
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末端均位于细胞质内，并通过与伴侣蛋白组成TEMs在肿瘤转移和血管生成过程中具有重要作用。临床上，TSPAN8在乳腺癌、食管癌、胃癌、结直肠癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤等多种肿瘤组织中高表达，并且与肿瘤的侵袭转移密切相关。TSPAN8还通过参与细胞信号的传导或拮抗E
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cadherin与P120
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catenin相互作用，引起细胞间黏附作用减弱，促进细胞的侵袭转移。另外，TSPAN8还通过维持Hedgehog通路的持续激活，参与乳腺癌干细胞的干性维持和耐药反应，使患者的治疗反应更差。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是在于克服现有技术的缺点和不足，针对TSPAN8蛋白的Ser129(S129)位点的磷酸化开发治疗乳腺癌的药物。
[0004]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，所述的应用是在制备调控癌细胞增殖和/或生长的产品中的应用。
[0005]较佳地，所述的调控是指抑制TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化，进而抑制癌细胞的增殖和/或生长。
[0006]较佳地，所述的癌细胞为乳腺癌细胞、胃癌细胞、结直肠癌细胞、胰腺导管癌细胞中的任意一种。
[0007]较佳地，所述的TSPAN8蛋白是通过与胞浆蛋白14
‑3‑
3θ和importinβ1结合进入细胞核。
[0008]较佳地，所述的Ser129位点磷酸化，是TSPAN8蛋白在EGF
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EGFR信号通路中和AKT激酶相互作用后，使得TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化，从而促进癌细胞的发生、发展和转移。
[0009]较佳地，所述的产品包含针对TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化制备的单克隆抗体、多克隆抗体中的任意一种。
[0010]本专利技术还提供了一种根据上述任意一项所述的TSPAN8蛋白的Ser129位点作为靶点在筛选、开发和/或设计预防和/或治疗肿瘤产品中的应用。
[0011]较佳地，所述的肿瘤包含乳腺癌、胃癌、结直肠癌、胰腺导管癌中的任意一种。
[0012]本专利技术的有益效果：
[0013]本专利技术发现一种四次跨膜蛋白TSPAN8的Ser129磷酸化位点：由于EGF/EGFR信号通路的活化伴随着一系列蛋白激酶激活，通过对TSPAN8的Co
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IP产物进行质谱检测，发现AKT激酶能够与TSPAN8相互作用，质谱分析表明，TSPAN8可能发生的磷酸化位点包括S129、T131、T196，最终明确是TSPAN8蛋白的S129位点磷酸化；可针对该位点开发治疗乳腺癌的抗肿瘤药物。
附图说明
[0014]图1：乳腺癌中TSPAN8的核转位与乳腺癌的进展显著相关。
[0015]其中，a.95例乳腺癌TSPAN8染色的代表性免疫组化图；
[0016]b.在乳腺癌中TSPAN8的核定位显著增加；
[0017]c.单因素方差分析和t检验结果显示乳腺癌患者核TSPAN8水平与TNM分期呈正相关；
[0018]d.单因素方差分析和t检验结果显示，在不同分子亚型(LuminalA/B、Her2+、TNBC)乳腺癌患者中，TNBC患者中核TSPAN8水平特异性升高。
[0019]e
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g.TSPAN8核转位与肿瘤进展呈正相关。非配对t检验分析结果显示，核TSPAN8与肿瘤大小、淋巴结转移或远处转移相关；
[0020]h.非配对t检验分析结果显示，核TSPAN8与间充质表型呈正相关；
[0021]i.配对t检验分析核TSPAN8细胞与胞浆TSPAN8细胞的比值；
[0022]j.核TSPAN8的高表达与BrCa不良预后显著相关。
[0023]图2：EGF
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EGFR信号通路触发TSPAN8核转位。
[0024]其中，a
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b.EGF刺激促进TSPAN8核易位。用EGF刺激MCF
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7(a)或MDA
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MB
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231(b)处理60分钟，通过免疫荧光检测TSPAN8亚细胞定位。比例尺＝10μm；
[0025]c.EGF以剂量依赖的方式促进TSPAN8核易位。用指定剂量的EGF处理MCF
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7细胞，并进行免疫荧光分析；
[0026]d.免疫印迹分析EGF刺激后核TSPAN8的时间依赖性；
[0027]e.EGF促使TSPAN8的胞核转位；
[0028]f.免疫荧光分析显示Mem
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TruboID在MDA
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MB
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231中的定位；
[0029]g.在MDA
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MB
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231细胞中，使用Mem
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TurboID标记和跟踪膜性TSPAN8在EGF作用下向核转位的示意图；
[0030]h.EGF刺激下，核TSPAN8来源于质膜。免疫印迹分析100ng/ml EGF处理后不同时间点膜和核中生物素化TSPAN8的相对丰度。
[0031]图3：EGF刺激下，AKT激酶直接磷酸化TSPAN8的Ser129位点。
[0032]其中，a.酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)抑制EGF诱导的TSPAN8核转位；
[0033]b.通过BioID鉴定AKT为潜在的TSPAN8相互作用蛋白；
[0034]c.EGF处理促进TSPAN8
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AKT相互作用；
[0035]d.AKT在细胞质与TSPAN8相互作用；
[0036]e.AKT在体外磷酸化TSPAN8；
[0037]f.磷酸化蛋白质质谱分析，揭示AKT磷酸化TSPAN8的关键残基；
[0038]g.AKT在体外磷酸化TSPAN8的Ser129位点；
[0039]h.不同种属的TSPAN8 Ser129序列比对；
[0040]i.AKT抑制剂可减弱EGF刺激的TSPAN8 Ser129位点的磷酸化。
[0041]图4：S129位点磷酸化增强TSPAN8的核转位并与乳腺癌进展相关；
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，其特征在于，所述的应用是在制备调控癌细胞增殖和/或生长的产品中的应用。2.如权利要求1所述的TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，其特征在于，所述的调控是指抑制TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化，进而抑制癌细胞的增殖和/或生长。3.如权利要求1所述的TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，其特征在于，所述的癌细胞为乳腺癌细胞、胃癌细胞、结直肠癌细胞、胰腺导管癌细胞中的任意一种。4.如权利要求1所述的TSPAN8蛋白的Ser129位点的磷酸化在癌细胞增殖调控中的应用，其特征在于，所述的TSPAN8蛋白是通过与胞浆蛋白14
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3θ和importinβ1结合进入细胞核。5.如权利要求1所述的TSPAN8蛋白的Ser129位点磷酸化在癌细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红霞，李军建，
申请(专利权)人：上海市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：