一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用，所述转录因子为C/EBPα，用于促进禽类卵巢卵泡OVR基因表达。本发明专利技术以卵泡膜表面卵黄前体物受体(OVR)基因启动子区转录因子结合位点为研究对象，通过预测启动子区转录因子结合位点、过表达和敲低以及脂质转运验证启动子区转录因子，最后筛选出调控OVR表达的转录因子，并能促进OVR基因表达。本发明专利技术通过探究OVR表达调控的转录因子，以及转录因子应用于OVR高效表达，促进卵泡快速发育，对研究OVR基因启动子区转录调控因子参与卵泡发育促进产蛋等的分子机制具有很好的应用价值。应用价值。应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用


[0001]本专利技术涉及属于细胞工程和基因工程
，具体涉及一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用。

技术介绍

[0002]产蛋量作为繁殖性状之一受卵泡发育成熟和排卵影响。卵泡发育成熟卵黄前体物合成与转运调节至关重要。卵黄前体物主要包括极低密度脂蛋白(VLDLy)和卵黄生成素(VTG)。卵黄前体物可通过母禽分泌雌激素刺激肝脏合成释放进入血液循环，转运至卵泡。卵泡快速发育阶段，VLDLy和VTG等营养物质通过卵泡膜表面血管进入卵泡膜颗粒细胞层，与颗粒细胞表面卵黄生成受体(Oocyte vitellogenesis receptor,OVR)结合后，细胞膜内陷封闭形成有被小泡，将其运输到生长中的卵母细胞。随后配体
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受体复合物分离，受体重新回到卵母细胞表面继续下一轮转运。分离后的VLDLy在溶菌酶的作用下降解，供卵母细胞吸收形成卵黄内物质。可见，卵黄发育主要取决于VLDLy进入卵母细胞的数量，即颗粒细胞层表面受体OVR/VLDLR表达量决定了卵黄内物质含量和卵泡发育速度。
[0003]产蛋初期受激素水平影响，母禽卵巢胆固醇和脂质合成相关基因CETP、SREBP和Apo
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VLDL2等表达产生变化，但卵泡膜颗粒细胞表面卵黄受体OVR基因表达不受激素调控。卵母细胞卵黄生成受体(OVR/VLDLR)是卵黄前体物进入卵母细胞的特异性受体，是蛋禽繁殖活动中调节卵母细胞正常发育的关键基因，可特异性转运卵黄等主要脂类物质和非脂类蛋白物质等，其基因多态可能影响卵黄内物质含量。利用OVR/VLDLR基因点突变培育了来航鸡限制性产蛋品系，并证实OVR/VLDLR基因突变导致受体与VLDLy及VTG结合效率下降，卵黄发育受阻。
[0004]产蛋量作为重要的经济性状，在我国地方品种禽类表现的差异较大，同一品种内不同个体间产蛋整齐性差，严重影响了地方品种家禽的产业化发展。如何有效调控地方品种家禽的产蛋量成为当前的研究热点。从以上分析可以看出，OVR在卵泡膜中的表达量影响到卵泡发育速度。因此，可通过调控OVR表达量的方法促进卵泡发育和产蛋。
[0005]基于上述内容，提出一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的提供了一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子及其应用，解决
技术介绍
中出现的问题。
[0007]本专利技术通过以下技术方案来实现上述目的：
[0008]本专利技术提供了一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子，所述转录因子为C/EBPα，用于促进禽类卵巢卵泡OVR基因表达。
[0009]本专利技术还提供了一种上述转录因子在研究OVR基因启动子区转录调控因子参与卵泡发育促进产蛋的分子机制中的应用。
[0010]本专利技术还提供了一种上述转录因子在协同OVR基因转运脂质进入细胞中的应用。
[0011]本专利技术还提供了一种调控卵泡膜表面OVR基因表达活性的方法，构建C/EBPα过表达或敲低载体，导入禽类卵泡膜颗粒细胞中，用以促进或降低禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性。
[0012]进一步改进在于，所述禽类卵泡膜颗粒细胞为野生型鹅卵泡膜颗粒细胞或导入有OVR表达载体的鹅卵泡膜颗粒细胞。
[0013]进一步改进在于，所述鹅卵泡膜颗粒细胞为鹅小黄卵泡细胞。
[0014]本专利技术还提供了一种脂质转运系统，所述系统为包含上述转录因子的过表达载体和OVR基因的禽类卵泡膜颗粒细胞。
[0015]本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过探究OVR表达调控的转录因子，以及转录因子应用于OVR高效表达，促进卵泡快速发育，对研究OVR基因启动子区转录调控因子参与卵泡发育促进产蛋等的分子机制具有很好的应用价值。
附图说明
[0016]图1为免疫组化分析OVR在鹅各级卵泡中的表达定位；1：卵巢组织HE染色；2：卵巢组织OVR抗体标记；3：小白卵泡OVR抗体标记；4：大白卵泡OVR抗体标记；5：小黄卵泡OVR抗体标记；6：F5卵泡OVR抗体标记；7：F4卵泡OVR抗体标记；8：F3卵泡OVR抗体标记；9：F2卵泡OVR抗体标记；10：F1卵泡OVR抗体标记；黑色箭头为标记的OVR，白色箭头为OVR胞吞卵黄物质；B为OVR在各级卵泡中的表达量。
[0017]图2为OVR表达调控区转录因子预测示意图；
[0018]图3为OVR及预测转录因子在鹅各级卵泡中的表达量分析示意图；
[0019]图4为过表达载体转染效果及对OVR表达量的影响示意图；
[0020]图5为C/EBPα、MF3和OVR在DF
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1细胞过表达对血清脂质转运的影响，A为空白对照；B为转染空质粒的阴性对照；C为转染过表达OE
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MF3质粒；D为转染过表达C/EBPα质粒；E为转染过表达OE
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OVR质粒；F为共转染OE
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MF3和OE
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OVR质粒；G为共转染过表达C/EBPα和OE
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OVR质粒；H为共转染OE
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MF3和sh
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3质粒；I为共转染OE
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C/EBPα和sh
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3质粒；J为各转染组DF
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1细胞脂质转运比较。
具体实施方式
[0021]下面结合附图对本申请作进一步详细描述，有必要在此指出的是，以下具体实施方式只用于对本申请进行进一步的说明，不能理解为对本申请保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述申请内容对本申请作出一些非本质的改进和调整。
[0022]1、材料
[0023]本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。
[0024]2、方法
[0025]2.1种鹅产蛋前后卵泡发育情况
[0026]选择产蛋前(163d)、产蛋早期(210d)、产蛋高峰期(291d)和产蛋末期(334d)的皖西白鹅母鹅(每个时间点6只鹅)，禁食12小时后，于上午10点从翅静脉采集非抗凝和抗凝血样。非抗凝血用于血清分离激素测定和血脂分离，抗凝血用于总DNA提取和OVR基因调控区
序列扩增。
[0027]取12只产蛋高峰期种鹅，麻醉后屠宰用于组织取样，取出整个卵巢，并根据其直径将卵泡分为三级：初级卵泡(小于4mm)、发育中卵泡(5
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30mm)和成熟卵泡(大于35mm)，其中6只鹅用于卵泡膜(仅包含卵泡膜和颗粒层)采集。收集的卵泡膜在液氮中快速冷冻后储存于
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80℃用于RNA提取(每等级6个样品)。将卵巢和各等级卵泡置于4％多聚甲醛固定液固定后用于免疫组化分析。另6只鹅用于各等级卵泡颗粒层分离。分离出的卵泡层储存
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80℃用于RNA提取。从小黄卵泡(SYF)中提本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性的转录因子，其特征在于，所述转录因子为C/EBPα，所述C/EBPα通过与0VR基因启动子区转录因子结合位点结合，用于促进禽类卵巢卵泡OVR基因表达。2.一种如权利要求1所述转录因子在调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性中的应用。3.一种如权利要求1所述转录因子在协同OVR基因转运脂质进入细胞中的应用。4.一种调控禽类卵泡膜表面OVR基因表达活性的方法，其特征在于，构建C/EBPα过表达或敲低载体，导入禽类卵泡膜颗粒细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈兴勇，杜叶叶，刘政权，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：