一种Jo-1抗原生物素化的方法及抗Jo-1抗体检测试剂盒技术

本发明专利技术提供一种Jo

【技术实现步骤摘要】
抗原，然后将所述的处理后的Jo
‑
1抗原与生物素偶联得到生物素标记的Jo
‑
1抗原。
[0009]专利技术人首次在Jo
‑
1抗原生物素化方法中增加Jo
‑
1抗原处理步骤，将Jo
‑
1抗原的巯基转化成氨基，以此增加氨基的数量，提高Jo
‑
1抗原与生物素接触反应的概率，从而提高Jo
‑
1抗原生物素化效率。
[0010]本专利技术中，4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐简称磺基SMCC；4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯简称SMCC。
[0011]优选地，Jo
‑
1抗原与磺基SMCC和赖氨酸反应得到所述的处理后的Jo
‑
1抗原。
[0012]进一步优选地，所述的磺基SMCC和所述的赖氨酸反应得到氨基标记的SMCC，然后所述的氨基标记的SMCC与Jo
‑
1抗原反应得到所述的处理后的Jo
‑
1抗原。
[0013]该Jo
‑
1抗原处理方法所需原料易得，处理方法简单，条件温和。
[0014]再进一步优选地，所述的磺基SMCC以浓度为0.5～2mol/L的磺基SMCC溶液的形式投料，所述的磺基SMCC溶液的溶剂为二甲基亚砜、N，N
‑/>二甲基甲酰胺(DMF)、或pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液(PBS缓冲液)中的一种或多种。
[0015]更进一步优选地，所述的磺基SMCC溶液的浓度为0.8～1.5mol/L。
[0016]再进一步优选地，所述的赖氨酸以浓度为0.5～2mol/L的赖氨酸溶液的形式进行投料，所述的赖氨酸溶液的溶剂为pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液。
[0017]更进一步优选地，所述的赖氨酸溶液的浓度为0.8～1.5mol/L。
[0018]再进一步优选地，所述的磺基SMCC和赖氨酸的投料摩尔比为1:5～15。
[0019]更进一步优选地，所述的磺基SMCC和赖氨酸的投料摩尔比为1:8～12。
[0020]再进一步优选地，所述的Jo
‑
1抗原以Jo
‑
1抗原溶液的形式进行投料，所述的Jo
‑
1抗原溶液的溶剂为pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液。
[0021]再进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原的投料比为1/(30～80)mol/g。
[0022]更进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原的投料比为1/(40～70)mol/g。
[0023]再进一步优选地，所述的磺基SMCC和所述的赖氨酸反应的反应温度为20～30℃。
[0024]所述的磺基SMCC和所述的赖氨酸反应在室温下进行即可。
[0025]再进一步优选地，所述的磺基SMCC和所述的赖氨酸反应的反应时间为1～5h。
[0026]更进一步优选地，所述的磺基SMCC和所述的赖氨酸反应的反应时间为1～3h。
[0027]再进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原反应的反应温度为于0～10℃。
[0028]更进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原反应的反应温度为于2～8℃。
[0029]再进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原反应的反应时间为20～30h。
[0030]更进一步优选地，所述的氨基标记的SMCC和所述的Jo
‑
1抗原反应的反应时间为20～24h。
[0031]进一步优选地，所述的处理后的Jo
‑
1抗原的制备方法包括以下具体步骤：
[0032]步骤1：将浓度为0.5～2mol/L磺基SMCC溶液和浓度为0.5～2mol/L赖氨酸溶液混
合，于20～30℃下反应1～5h；
[0033]步骤2：加入质量浓度为0.15～0.5mg/mL的Jo
‑
1抗原溶液，于0～10℃下反应20～30h；
[0034]步骤3：将反应后的反应液透析，去除未反应的磺基SMCC和未反应的氨基标记的SMCC，得到处理后的Jo
‑
1抗原；
[0035]其中，所述的磺基SMCC溶液的溶剂为二甲基亚砜；所述的赖氨酸溶液和所述的Jo
‑
1抗原溶液的溶剂均为pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液；所述的磺基SMCC溶液、所述的赖氨酸溶液和所述的Jo
‑
1抗原溶液的体积比为1:5～15:60～120。
[0036]更进一步优选地，所述的磺基SMCC溶液、所述的赖氨酸溶液和所述的Jo
‑
1抗原溶液的体积比为1:8～12:80～110。
[0037]更进一步优选地，本专利技术中的所述的磷酸盐缓冲液包括0.08～0.2M的磷酸钠和0.01～0.2M的NaCl。
[0038]优选地，所述的生物素为经N
‑
羟基琥珀酸亚胺活化的生物素。
[0039]一种抗Jo
‑
1抗体检测试剂盒，所述的抗Jo
‑
1抗体检测试剂盒包括第一试剂，所述的第一试剂为由所述的Jo
‑
1抗原生物素化的方法制备的生物素标记的Jo
‑
1抗原。
[0040]优选地，所述的试剂盒还包括第二试剂、磁微粒试剂、化学发光底物、校准品、质控品和清洗液，其中，所述的第二试剂包括碱性磷酸酶标记的抗人IgG抗体。
[0041]进一步优选地，所述的磁微粒的粒径为0.1～0.5μm，所述的磁微粒的表面含有链霉亲和素基团，所述的化学发光底物为金刚烷。
[0042]本专利技术中，第二试剂、校准品和质控品的制备方法以及试剂盒的检测方法参考专利CN109085343A。
[0043]本专利技术与现有技术相比具有如下优势：
[0044]本专利技术首次提出将Jo
‑
1抗原的巯基转化成氨基的工艺，以此增加Jo
‑
1抗原表面氨基的数量，在Jo
‑
1抗原生物素化时，提高Jo
‑
1抗原与生物素反应的概率，增加生物素化效率，此方法原料易得，方法简单，成本低。
附图说明
[0045]附图1为化学发光检测原理。
[0046]附图2为实施例1的试剂盒的线性回归曲线。
[0047]附图3为实施例1的试剂盒的稳定性结果示意图。
具体实施方式
[0048]下面结合实施例对本专利技术作进一步描述。但本专利技术并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种Jo
‑
1抗原生物素化的方法，其特征在于，将Jo
‑
1抗原的巯基转化成氨基得到处理后的Jo
‑
1抗原，然后将所述的处理后的Jo
‑
1抗原与生物素偶联得到生物素标记的Jo
‑
1抗原。2.根据权利要求1所述的Jo
‑
1抗原生物素化的方法，其特征在于，Jo
‑
1抗原与4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐和赖氨酸反应得到所述的处理后的Jo
‑
1抗原。3.根据权利要求2所述的Jo
‑
1抗原生物素化的方法，其特征在于，所述的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐和所述的赖氨酸反应得到氨基标记的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯，然后所述的氨基标记的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯与Jo
‑
1抗原反应得到所述的处理后的Jo
‑
1抗原。4.根据权利要求3所述的Jo
‑
1抗原生物素化的方法，其特征在于，所述的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐以浓度为0.5～2mol/L的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的形式投料，所述的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐溶液的溶剂为二甲基亚砜、N，N
‑
二甲基甲酰胺或pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液中的一种或多种；和/或，所述的赖氨酸以浓度为0.5～2mol/L的赖氨酸溶液的形式进行投料，所述的赖氨酸溶液的溶剂为pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液；和/或，所述的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺甲基)环己烷
‑1‑
羧酸磺酸基琥珀酰亚胺酯钠盐和赖氨酸的投料摩尔比为1:5～15；和/或，所述的Jo
‑
1抗原以Jo
‑
1抗原溶液的形式进行投料，所述的Jo
‑
1抗原溶液的溶剂为pH为7～7.5的磷酸盐缓冲液；和/或，所述的氨基标记的4
‑
(N
‑
马来酰亚胺基甲基)环己烷
‑1‑
羧酸琥珀酰亚胺酯和所述的Jo
‑
1抗原的投料比为1/(30～80)mol/g。5.根据权利要求3所述的Jo
‑
1抗原生物素化的方法，其特征在于，所述的4
‑
(N
‑
马来酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔利歌，徐璐，孔巧芸，李裕明，喻露，岳凡，金阳阳，
申请(专利权)人：江苏浩欧博生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：