荧光纳米颗粒、蛋白复合物和免疫检测试纸条制造技术

本发明专利技术公开了荧光纳米颗粒、蛋白复合物和免疫检测试纸条。本申请的第一方面，提供一种荧光纳米颗粒，该荧光纳米颗粒包括AIE配体和配位金属离子。根据本申请实施例的荧光纳米颗粒，至少具有如下有益效果：对于由AIE配体和配位金属离子形成的荧光纳米颗粒，在标记蛋白时，蛋白能够在静电作用和范德华力的作用下直接与荧光纳米颗粒发生吸附从而结合到其表面，避免了现有技术中繁琐的标记步骤，同时有效提高了检测灵敏度，并且具有良好的稳定性，不易失活。失活。失活。

【技术实现步骤摘要】
荧光纳米颗粒、蛋白复合物和免疫检测试纸条


[0001]本申请涉及免疫检测
，尤其是涉及荧光纳米颗粒、蛋白复合物和免疫检测试纸条。

技术介绍

[0002]现有的荧光免疫检测试纸条多数都基于量子点、荧光染料标记PS微球、胶束或SiO2球等，其面临的关键问题在于整体制备工艺复杂，特别是抗体标记步骤繁琐、效率较低，成本高，这限制了其灵敏度的进一步提升，同时也存在稳定性差(如量子点易失活、荧光染料易漂白，微球、胶束易聚集)等问题。其中，抗体标记往往需要预先对其进行羧基或者胺基功能化修饰，以便后续共价偶联抗体蛋白，其技术路线往往是通过羧基或者胺基功能化的聚合物包覆标记颗粒，然后通过酰胺反应共价偶联抗体蛋白，整体工艺复杂、繁琐，抗体蛋白偶联效率不高或过高导致失活。

技术实现思路

[0003]本申请旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本申请提出一种荧光纳米颗粒，利用这种荧光纳米颗粒可以得到工艺简单、偶联后不易失活的蛋白复合物、蛋白标记以及利用这种蛋白复合物构建的免疫检测试纸条。
[0004]本申请的第一方面，提供一种荧光纳米颗粒，荧光纳米颗粒包括AIE配体和配位金属离子。
[0005]根据本申请实施例的荧光纳米颗粒，至少具有如下有益效果：
[0006]对于由AIE配体和配位金属离子形成的荧光纳米颗粒，在标记蛋白时，蛋白能够在静电作用和范德华力的作用下直接与荧光纳米颗粒发生吸附从而结合到其表面，避免了现有技术中繁琐的标记步骤，同时有效提高了检测灵敏度。
[0007]其中，AIE配体是指具有聚集诱导发光(AIE)性质的分子，其可能的发光机理包括分子内运动受限(RIM)、分子内旋转(RIR)、振动受限(RIV)等。AIE分子目前大致可以分为仅含碳氢的化合物、含有杂原子的物质和金属复合物。在本申请实施例的方案中，AIE分子作为配体与配位金属离子发生螯合形成荧光纳米颗粒从而作为指示物对吸附于其上的蛋白进行标记。
[0008]在本申请的一些实施方式中，AIE配体上具有羧基、吡啶基、咪唑基，AIE配体通过这些基团与配位金属离子形成荧光纳米颗粒。
[0009]在本申请的一些实施方式中，AIE配体为具有以下结构的分子中的至少一种：
[0010][0011]其中，X具有C＝C、C
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N中的至少一种；
[0012]Y为N、P中的任一种；
[0013]R1～R4分别独立选自氢原子、羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种，且至少两个不为氢原子；
[0014]R5～R7分别独立选自羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种。
[0015]在本申请的一些实施方式中，R1～R4分别独立选自氢原子、羧基、4
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羧基苯基、4
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吡啶基、咪唑基中的任一种，且至少两个不为氢原子；R5～R7分别独立选自羧基、4
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羧基苯基、4
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吡啶基、咪唑基中的任一种。
[0016]在本申请的一些实施方式中，R1～R4分别独立选自羧基、4
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羧基苯基、4
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吡啶基、咪唑基中的任一种。
[0017]在本申请的一些实施方式中，AIE配体为具有以下结构的分子中的任一种：
[0018][0019]在本申请的一些实施方式中，AIE配体为具有以下结构的分子中的任一种：
[0020][0021]其中，R1～R4分别独立选自氢原子、羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种，
且至少两个不为氢原子；
[0022]R5～R7分别独立选自羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种。
[0023]在本申请的一些实施方式中，R1～R4同时选自羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种；
[0024]R5～R7同时选自羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种。
[0025]在本申请的一些实施方式中，AIE配体选自以下的至少一种：
[0026][0027][0028]通过对AIE结构的调整可以改变其荧光波长，以上述式(Ⅰ)中的化合物为例，该AIE
配体得到的荧光纳米颗粒具有蓝色荧光，而在其R1～R4中额外引入苯基后形成的式(Ⅱ)的化合物最终得到的荧光纳米颗粒具有黄色荧光。
[0029]在本申请的一些实施方式中，金属离子为第二副族元素以及其他具有稳定d轨道的金属元素的离子。
[0030]在本申请的一些实施方式中，金属离子选自锌离子、锆离子、铪离子、镓离子、铟离子、锡离子和铋离子中的至少一种。
[0031]在本申请的一些实施方式中，荧光纳米颗粒的粒径为50～1000nm。优选的，荧光纳米颗粒的粒径为50～500nm，50～200nm，150nm。通过调节荧光纳米颗粒的粒径，提高荧光纳米颗粒上蛋白的吸附量，从而进一步提高检测灵敏度。
[0032]本申请的第二方面，提供一种蛋白复合物，该蛋白复合物包括前述的荧光纳米颗粒和吸附在荧光纳米颗粒上的蛋白。
[0033]利用上述的荧光纳米颗粒对蛋白进行标记时，可以在静电作用和范德华力的作用下直接将其与荧光纳米颗粒发生吸附从而结合到荧光纳米颗粒表面，避免了现有技术中繁琐的标记步骤，同时有效提高了检测灵敏度。
[0034]另一方面，采用这种方式得到的蛋白复合物可以在室温下放置一年以上而荧光强度不发生明显变化，具有良好的稳定性，不易失活。
[0035]本申请的第三方面，提供一种蛋白标记方法，包括以下步骤：将荧光纳米颗粒与待标记的蛋白混合孵育1～5h，得到蛋白复合物；荧光纳米颗粒包括AIE配体和配位金属离子。
[0036]该标记方法直接将荧光纳米颗粒与待标记的蛋白孵育，即可将蛋白通过静电作用和范德华力吸附到荧光纳米颗粒上完成标记，整个过程步骤简单，标记效率高。
[0037]在本申请的一些实施方式中，荧光纳米颗粒和待标记的蛋白混合孵育后，加入封闭液继续孵育，离心去除上清后，得到蛋白复合物。加入封闭液后继续孵育的时间可选0.1～2h，优选为1h。
[0038]在本申请的一些实施方式中，荧光纳米颗粒的制备方法按如下：将AIE配体、金属离子在70～120℃条件下混合反应，得到荧光纳米颗粒。
[0039]在本申请的一些实施方式中，AIE配体、金属离子的质量比为(1～10)：1。
[0040]在本申请的一些实施方式中，金属离子的原料为金属盐，进一步以溶液形式参与反应，金属盐包括但不限于卤素盐、碳酸盐、硝酸盐、乙酸盐和硫酸盐等。
[0041]本申请的第四方面，提供一种免疫检测试纸条，该免疫检测试纸条包括一抗，一抗包括前述的蛋白复合物，一抗用于特异性结合待测物。
[0042]在本申请的一些实施方式中，还包括二抗和抗抗体，二抗用于特异性结合待测物；抗抗体用于特异性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.荧光纳米颗粒，其特征在于，包括AIE配体和配位金属离子。2.根据权利要求1所述的荧光纳米颗粒，其特征在于，所述AIE配体为具有以下结构的分子中的任一种：其中，R1～R4分别独立选自氢原子、羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种，且至少两个不为氢原子；R5～R7分别独立选自羧基、4
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羧基苯基、吡啶基、咪唑基中的任一种。3.根据权利要求1所述的荧光纳米颗粒，其特征在于，所述金属离子选自锌离子、锆离子、铪离子、镓离子、铟离子、锡离子和铋离子中的至少一种。4.根据权利要求1至3任一项所述的荧光纳米颗粒，其特征在于，所述荧光纳米颗粒的粒径为50～1000nm。5.蛋白复合物，其特征在于，包括权利要求1至4任一项所述的荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，张江江，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
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