一种信号放大的酶联免疫检测方法技术

本申请涉及试剂盒技术领域，尤其涉及一种信号放大的酶联免疫检测方法，包括以下步骤：得到含捕获抗体的固相载体；将待测样本、FITC

【技术实现步骤摘要】
一种信号放大的酶联免疫检测方法


[0001]本申请涉及试剂盒
，尤其涉及一种信号放大的酶联免疫检测方法。

技术介绍

[0002]酶联免疫检测(ELISA)是为一种常用的检测方法，服务于生物工作，广泛应用于生物科学研究的各大细分领域。为了加速检测进度和效率，已搭建了ELISA检测技术平台。基于成熟的抗原
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抗体制备平台制备的关键原料，采用竞争法和夹心法两大主流方法学支撑的酶联免疫检测技术，已成功开发出涉及肿瘤、激素、自身免疫、心血管、代谢等十多个领域，人类、小鼠、大鼠、牛等二十多个种属的4000余种ELISA试剂盒。
[0003]ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

技术实现思路

[0004]本申请提供了一种信号放大的酶联免疫检测方法，以解决现有酶联免疫检测方法精密度低的技术问题。
[0005]第一方面，本申请提供了一种信号放大的酶联免疫检测方法，所述方法包括以下步骤：/>[0006]得到含捕获抗体的固相载体；
[0007]将待测样本、FITC
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单克隆抗体记物溶液、生物素
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单克隆抗体标记物溶液与所述固相载体接触并进行第一反应，得到FITC
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生物素
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抗原抗体复合物；
[0008]得到过氧化物酶溶液，所述过氧化物酶溶液包含亲和素；
[0009]将所述过氧化物酶溶液与所述FITC
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生物素
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抗原抗体复合物接触并进行第二反应，后加入底物，以使所述第二反应得到的双抗体
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抗原复合物被所述底物催化，得到有色产物；
[0010]将所述有色产物进行含量检测，以实现对所述待测样本的检测。
[0011]可选的，所述FITC
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单克隆抗体标记物溶液的制备方法包括：
[0012]将第一特定单克隆抗体用缓冲液稀释，以使所述第一特定单克隆抗体稳定，并加入含异硫氰酸荧光素的第一溶液，得到第二溶液；
[0013]将第二溶液进行第一搅拌、离心、第一透析和第一纯化，得到FITC
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单克隆抗体标记物溶液。
[0014]可选的，所述生物素
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单克隆抗体标记物溶液的制备方法包括：
[0015]得到用抗体保护液保护并活化的第三溶液，其中，所述第三溶液包含所述第二特定单克隆抗体；
[0016]将含生物素酰
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N
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羟基丁二酰亚胺酯的第四溶液与所述第三溶液混合，并进行第二透析和第二纯化，得到生物素
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单克隆抗体标记物溶液。
[0017]可选的，所述第一特定单克隆抗体和所述第二特定单克隆抗体分别来源于鼠抗人单克隆抗体、兔抗人单克隆抗体和羊多抗人单克隆抗体中任意一种。
[0018]可选的，所述第一特定单克隆抗体包括促甲状腺激素单克隆抗体、三碘甲腺原氨酸单克隆抗体和甲状腺素单克隆抗体中任意一种。
[0019]可选的，所述过氧化物酶溶液的制备方法包括：将过氧化物酶溶液与氧化剂混合，以使所述过氧化物酶溶液中酶的糖基生成醛基，得到第五溶液；
[0020]将所述第五溶液中加入链霉亲和素并反应，得到第六溶液；
[0021]将所述第六溶液进行第三透析和第三纯化，得到过氧化物酶溶液。
[0022]可选的，所述固相载体的制备方法包括：
[0023]将捕获抗体用包被缓冲液稀释至特定浓度，置于第一载体中，得到第二载体；
[0024]将所述第二载体中的液体去除，并封闭，得到第三载体；
[0025]将所述第三载体中的液体去除，并烘干，得到固相载体。
[0026]可选的，所述捕获抗体包括RabbitAnti
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FITC多抗或GoatAnti
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FITC多抗。
[0027]可选的，所述第一反应和所述第二反应的温度分别为30
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40℃。
[0028]第二方面，本申请提供了使用第一方面所述方法的试剂盒，所述试剂盒包括：FITC
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单克隆抗体标记物、生物素
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单克隆抗体标记物、过氧化物酶溶液和固相载体。
[0029]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0030]本申请实施例提供的该方法，采用双信号放大系统技术，间接包被反应体系，在固相上先预包被捕获抗体，添加FITC
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单克隆抗体标记物、生物素
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单克隆抗体标记物，形成的FITC
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抗体复合物，通过FITC
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anti
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FITC系统处理过的固相载体，使固相载体中单克隆抗体的结合位点充分暴露，增加吸附的抗体量，提高包被吸附效率，从而增强反应信号。另外，采用亲和素
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生物素信号放大系统，利用亲和素与生物素之间极强的亲和力，结合也极为稳定，不会在孵育和各种洗涤过程中脱落；同时，利用亲和素与生物素之间多价放大结合特性，每个亲和素分子能结合4个生物素，因此能耦合更多地联结生物素的酶分子，使生物素对抗体的标记率高，可以减少空间位阻，保持了大分子物质的原有生物活性，可以增强终反应信号，从而提高检测的敏感性和精密度。
附图说明
[0031]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0033]图1为本申请实施例提供的一种信号放大的酶联免疫检测方法的流程示意图；
[0034]图2为本申请实施例提供的用于检测促甲状腺激素(TSH)抗原的ELISA试剂盒和常
规ELISA试剂盒OD值与浓度的曲线图；
[0035]图3为本申请实施例提供的用于检测促甲状腺激素(TSH)抗原的ELISA试剂盒、常规ELISA试剂盒和第三方检测试剂盒的线性回归分析图；
[0036]图4为本申请实施例提供的用于检测三碘甲腺原氨酸(T3)抗原的ELISA试剂盒和常规ELISA试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种信号放大的酶联免疫检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：得到含捕获抗体的固相载体；将待测样本、FITC
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单克隆抗体记物溶液、生物素
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单克隆抗体标记物溶液与所述固相载体接触并进行第一反应，得到FITC
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生物素
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抗原抗体复合物；得到过氧化物酶溶液，所述过氧化物酶溶液包含亲和素；将所述过氧化物酶溶液与所述FITC
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生物素
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抗原抗体复合物接触并进行第二反应，后加入底物，以使所述第二反应得到的双抗体
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抗原复合物被所述底物催化，得到有色产物；将所述有色产物进行含量检测，以实现对所述待测样本的检测。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述FITC
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单克隆抗体标记物溶液的制备方法包括：将第一特定单克隆抗体用缓冲液稀释，以使所述第一特定单克隆抗体稳定，并加入含异硫氰酸荧光素的第一溶液，得到第二溶液；将第二溶液进行第一搅拌、离心、第一透析和第一纯化，得到FITC
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单克隆抗体标记物溶液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述生物素
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单克隆抗体标记物溶液的制备方法包括：得到用抗体保护液保护并活化的第三溶液，其中，所述第三溶液包含第二特定单克隆抗体；将含生物素酰
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N
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羟基丁二酰亚胺酯的第四溶液与所述第三溶液混合，并进行第二透析和第二纯化，得到生物素
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单克隆抗体标记物溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴雷，来祥兵，华权高，甘华铭，
申请(专利权)人：武汉生之源生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：