一种高立体选择性亚胺还原酶及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高立体选择性亚胺还原酶及其制备方法和应用，通过对野生型气单胞菌进行定点突变，获得了高立体选择性的亚胺还原酶菌株。其可以用于麦斯明为底物生物催化制备(S)

【技术实现步骤摘要】
一种高立体选择性亚胺还原酶及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物酶催化领域，具体地说涉及一种高立体选择性亚胺还原酶及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]烟碱俗名尼古丁，是烟草中生物碱的主要成分。其是重要的医药、农药、香料等化工原料，并可用于生产戒烟产品、电子烟以及农药。近年发现通过烟碱受体作用于中枢神经递质系统，促进巴胺释放，对帕金森病的发病有一定预防作用，同时烟碱作为治疗心血管病、皮肤、蛇毒虫咬伤害等疾患药物的原料，需求量日益增大，特别是高纯度的烟碱，在国际市场备受欢迎。
[0003]烟碱含有一个手性中心，存在两个对映体：(S)
‑
烟碱和(R)
‑
烟碱，两者在烟草中含量、代谢机理和生理特性完全不同，天然烟草中的烟碱主要为S
‑
构型，化工合成的尼古丁在制备过程中由于没有进行手性拆分，因而一般为外消旋体。外消旋体与天然烟草提取物相比，50％的非精神活性(R)
‑
烟碱和50％的精神活性(S)
‑
烟碱的存在将烟油的潜在活性分成两部分。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高立体选择性S型亚胺还原酶，其包含如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。2.编码如权利要求1所述的高立体选择性S型亚胺还原酶的基因序列，其包含如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。3.一种重组表达载体，其包含如权利要求2所述的基因序列。4.一种宿主细胞，其包含如权利要求3所述重组表达载体。5.一种S型亚胺还原酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)对Aeromonas sp.FDAARGOS 1419菌株的亚胺还原酶氨基酸序列IRED I进行定点突变，第57位的A突变为R，第122位的D突变为A，第176位的A突变为G，第241位的S突变为G，突变后获得如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，经密码子优化获得如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；(2)构建包含SEQ ID No.2的重组表达载体，加入感受态宿主细胞获得表达IRED蛋白的重组菌株；(3)将重组菌株经培养、超声破碎后获得粗酶液，用于微生物固定和/或分离纯化和/或生物催化反应。6.根据权利要求5所述的一种S型亚胺还原酶的制备方法，其特征在于：所述重组表达载体选自pET、pGEX、pMAL的任意一种。7.根据权利要求6所述的一种S型亚胺还原酶的制备方法，其特征在于：所述宿主...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利坤，华超，汤必成，金力，钱敏帆，杨卫华，俞丽燕，谈聪，严燕兵，倪建洲，胡钦，吴自成，葛文强，王云，李淦如，朱国良，
申请(专利权)人：长兴制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：