谷氨酸脱氢酶变体及其在制备L-氨基酸中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种谷氨酸脱氢酶变体及其在制备L

【技术实现步骤摘要】
谷氨酸脱氢酶变体及其在制备L
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氨基酸中的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种谷氨酸脱氢酶变体及其在制备L
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氨基酸中的应用。

技术介绍

[0002]氨基酸(amino acid)是一类含有氨基和羧基的有机化合物的统称。其中，α
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氨基酸是生物功能大分子蛋白质的基本组成单位，构成了蛋白质分子的基本骨架(一级结构)。目前研究发现有22种氨基酸可以构成蛋白质，包括1986年发现的硒半胱氨酸(selenocysteine，Sec)及2002年报道的吡咯赖氨酸(pyrrolysine，Pyl)，其均为α
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氨基酸，通常被称为蛋白质氨基酸。在这22种蛋白质氨基酸之外的氨基酸则被称为非蛋白质氨基酸(non
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proteinogenic amino acid)。
[0003]蛋白质氨基酸可运用于医药、食品、饲料等与人类生活密切相关的行业，例如作为营养品维持人体的氮平衡，作为食品的风味添加剂，作为饲料添加剂用于养殖行业等。而非蛋白质氨基酸，由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种谷氨酸脱氢酶变体，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第71位，第92位，第143位，第144位，第145位，第146位，第175位，第187位，第352位，第355位进行单点突变或多点组合突变获得。2.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶变体，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶变体由单点突变获得，各突变位点及其突变前后的氨基酸单字母简写分别为：K71A、M92A、V143A、P144A、A145G、P146A、T175A、R187A、V352A、S355A。3.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶变体，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶变体由多点组合突变获得，多点组合突变形式为以下形式中的一种：(1)按照第145位，第355位，第352位，第71位，第187位，第175位，第92位，第146位，第144位，第143位的排列顺序，依次由相邻的两个或两个以上位点进行顺序迭代突变获得；其中，各突变位点及其突变前后的氨基酸单字母简写分别为：A145G、S355A、V352A、K71A、R187A、T175A、M92A、P146A、P144A、V143A；(2)由第71位，第145位，第143位，第144位中的两个或两个以上位点进行组合突变获得；其中，各突变位点及其突变前后的氨基酸单字母简写分别为：K71A、V143A、V143C、V143G、V143I、V143M、V143S、P144M、P144G、P144A。4.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶变体，其特征在于，所述谷氨酸脱氢酶变体为以下多点突变中的一种：(I)A145G/S355A，A145G/S355A/V352A，A145G/S355A/V352A/K71A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A/T175A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A/T175A/M92A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A/T175A/M92A/P146A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A/T175A/M92A/P146A/P144A，A145G/S355A/V352A/K71A/R187A/T175A/M92A/P146A/P144A/V143A；(II)A145G/K71A，A145G/P144A，A145G/V143A，K71A/P144A，K71A/V143A，V143A/P144A，A145G/K71A/P144A，A145G/K71A/V143A，A145G/V143A/P144A，K71A/V143A/P144A，A145G/K71A/V143A/P144A；(III)S355A/V352A/K71A/R187A/T175A，A145G/V352A/K71A/R187A/T175A，A145G/S355A/K71A/R187A/T175A，V352A/K71A/R187A/T175A，S355A/K71A/R187A/T175A，A145G/K71A/R187A/T175A，K71A/R187A/T175A；(IV)A145G/V143A，A145G/V143C，A145G/V143G，A145G/V143I，A145G/V143M，A145G/V143S，A145G/V143A/P144M，A145G/V143A/P144G，A145G/V143A/P144A。5.如权利要求1～4任一项所述的谷氨酸脱氢酶变体的编码基因。6.包含权利要求5所述的编码基因的表达载体或基因工程菌。7.如权利要求1～4任一项所述的谷氨酸脱氢酶变体或如权利要求7所述的基因工程菌在制备L
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正缬氨酸、L
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草铵膦或L
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高苯丙氨酸中的应用。8.一种制备L
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正缬氨酸的方法，其特征在于，包括：以2
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氧代戊酸为底物，在氨基供体及辅酶再生系统的作用下，利用生物催化剂在缓冲溶液中进行催化反应，得到L
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正缬氨酸；所述生物催化剂为谷氨酸脱氢酶变体或其固定化酶，或者包含编码所述谷氨酸脱氢酶变体基因的基因工程菌；所述辅酶再生系统所采用的辅酶为醇脱氢酶、葡萄糖脱氢酶或甲
酸脱氢酶；所述还原型辅酶为NADH；所述谷氨酸脱氢酶变体由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列进行单点突变或多点组合突变获得，具...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨立荣，王子渊，周海胜，张红玉，吴坚平，
申请(专利权)人：浙江大学杭州国际科创中心，
类型：发明
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