永生化猪骨髓巨噬细胞、其构建方法及应用技术

本申请公开了一种永生化猪骨髓巨噬细胞、其构建方法及应用。所述构建方法包括：以包含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第一重组质粒转染猪骨髓巨噬细胞，再培养转染后的细胞，并分离出细胞单克隆。进而，本申请还通过以包含SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的第二重组质粒、第三重组质粒转染永生化猪骨髓巨噬细胞的方式对其进行了改造。本申请提供的永生化猪骨髓巨噬细胞系的构建及改造方法均简单易操作，所获永生化猪骨髓巨噬细胞系具有可以持续传代的显著特点，其经改造后对病毒的敏感性高。高。高。

【技术实现步骤摘要】
永生化猪骨髓巨噬细胞、其构建方法及应用


[0001]本申请具体涉及一种永生化猪骨髓巨噬细胞、其构建方法及应用，属于生物


技术介绍

[0002]巨噬细胞是机体重要的免疫防御细胞之一，广泛分布于全身，存在于淋巴器官、肝脏、肺、胃肠道、中枢神经系统、骨骼和皮肤中，是宿主天然免疫和特异性免疫的重要组成部分，也是免疫反应中的关键调节及效应细胞(Verdeguer F and Aouadi M.Macrophage heterogeneity and energy metabolism[J].ExpCellRes，2017，360(1)：35
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40)。巨噬细胞在非特异性免疫中，可通过吞噬作用杀灭及清除病原体和异物介导炎症反应，参与先天性免疫应答；以及，在特异性免疫中，作为抗原递呈细胞加工和递呈抗原并启动获得性免疫应答，同时可分泌细胞因子发挥免疫调节作用(MurrayP J.Immune regulation by monocytes[J].Semin Immunol，2018，35：12
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>18)。不同分化状本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种永生化猪骨髓巨噬细胞的构建方法，其特征在于，包括：以包含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的第一重组质粒转染猪骨髓巨噬细胞，再培养转染后的细胞，并分离出细胞单克隆。2.根据权利要求1所述的永生化猪骨髓巨噬细胞的构建方法，其特征在于，所述第一重组质粒的构建方法包括：通过PCR将BglII和BCLI位点加入SV40TAg的核苷酸序列中，获得重组SV40TAg基因；使用BglII和BCLI位点将重组SV40TAg基因克隆入pIED
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Neo质粒，从而生成所述第一重组质粒，定义为pIED
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Neo
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SV40TAg质粒。3.根据权利要求1所述的永生化猪骨髓巨噬细胞的构建方法，其特征在于，具体包括：选取15日龄健康仔猪的腿骨，使用完全培养基冲洗骨髓腔，获得骨髓细胞，将所述骨髓细胞以GM
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CSF诱导培养液诱导分化成为猪骨髓巨噬细胞；其中，所述完全培养基含有10V/V％的胎牛血清；所述GM
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CSF诱导培养液包含1wt％primocin抗生素、10wt％FBS和100ng/mLGM
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CSF，余量为1640培养基。4.根据权利要求3所述的永生化猪骨髓巨噬细胞的构建方法，其特征在于，还包括：将所述猪骨髓巨噬细胞以完全培养基重悬，35～38℃培养50～80min，取培养后未贴壁的细胞转入新的完全培养基中培养，从而实现所述猪骨髓巨噬细胞的扩增。5.一种永生化猪骨髓巨噬细胞，其特征在于，它是由权利要求1
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4中任一项所述的方法构建。6.一种永生化猪骨髓巨噬细胞的改造方法，其特征在于，包括：以包含SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的第二重组质粒和/或包含SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的第三重组质粒转染权利要求5所述的永生化猪骨髓巨噬细胞，并筛选出其中的阳性细胞株，获得对病毒敏感的永生化猪骨髓巨噬细胞。7.根据权利要求6所述的永生化猪骨髓巨噬细胞的改造方法，其特征在于，具体包括：(1)以所述第二...

【专利技术属性】
技术研发人员：张大鹤，滕小锘，王俊肖，徐龙飞，
申请(专利权)人：苏州沃美生物有限公司，
类型：发明
国别省市：