TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用制造技术

本发明专利技术提供了牛TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用，本申请通过将构建成功的过表达载体pCMV

【技术实现步骤摘要】
TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用


[0001]本专利技术涉及动物遗传育种
，具体的涉及牛抗病育种的
，更具体地，涉及TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用。

技术介绍

[0002]犊牛肺炎是新生犊牛喂养过程中的一种传染病，是一种常见病，犊牛出生后年龄小、机体抵抗力差、各器官发育不完善以及对各种应激因素敏感是造成犊牛肺炎的主要原因。通常包括大叶肺炎和小叶肺炎以及支气管肺炎。一般而言，春季和冬季发病率最高，会严重影响犊牛，引起消化道疾病继发感染或呼吸功能障碍。该病发病率高，发病突然，病因复杂。养殖场犊牛出现肺炎，很容易引起其他疾病，尤其是继发性的犊牛疾病，将对脏器造成严重危害，尤其是消化道器官以及呼吸器官，从而严重降低犊牛的存活率。如果不及时有效地处理，往往会影响犊牛的健康以及给农民带来巨大的经济损失。
[0003]现有技术中对于犊牛肺炎的防治多采用，氯化钠注射液、硫酸庆大霉素、10％葡萄糖注射液、VC注射液和复合VB注射液相继注射治疗，以及双黄连注射液与其他抗生素合用或酚磺乙胺注射的方式。也有采用麻杏石甘散、银翘散联合板蓝根、连翘、杏仁、黄芩、无叶根、银花、甘草、石膏、桔梗、麻黄、麦冬、桑皮等中草药进行治疗。虽然能够一定程度上消退和恢复犊牛肺炎发病症状，但在康复后对育肥效果和肉质都有显著影响，影响后期牛肉的售卖及育肥牛的商品价值。

技术实现思路

[0004]现有技术对于犊牛肺炎的防治并不能从根源上解决问题，即便在治愈后仍然对于养牛业造成一些不良影响，针对犊牛肺炎进行的抗病育种未见报道。因此，本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中的缺陷，提供牛TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0006]本申请提供一种牛TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用。
[0007]进一步的，本申请提供一种牛TLR4基因在促进牛肺脏细胞防止细菌侵染能力中的应用。
[0008]进一步的，本申请提供一种上述应用在牛育种中的应用。
[0009]更进一步的，所述的应用为TLR4通过抑制TAB1和IRAK1表达，进一步上调TIRAP、MYD88、NFKBIA、IRAK4、TRAF6、MAP3K7、TAB2表达活性，从而释放大量免疫因子阻止细菌的进一步侵染。
[0010]本申请还提供一种提高牛肺脏细胞防止细菌侵染能力的方法，所述方法为，在原代牛肺脏细胞中过表达TLR4基因。
[0011]更进一步的，所述提高牛肺脏细胞防止细菌侵染能力的方法为，通过构建过表达载体pCMV
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CYC
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TLR4，并转染原代牛肺脏细胞，培养所述细胞。
[0012]本申请还提供牛TLR4基因作为制备犊牛肺炎治疗相关制剂中的靶基因的用途。
[0013]更进一步的，所述的牛TLR4基因作为制备犊牛肺炎治疗相关制剂中的靶基因的用途，包括但不限于在制备相关疫苗、检测制剂、基因药物中的用途。
[0014]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0015]本专利技术提供了牛TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用，本申请通过将构建成功的过表达载体pCMV
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CYC
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TLR4共转染牛肺脏细胞，验证过表达TLR4后对相关蛋白表达的情况，并通过检测过表达TLR4后对相关蛋白表达的调控作用，与对照组相比，当TLR4基因过表达以后，TIRAP、MYD88、NFKBIA、IRAK4、TRAF6、MAP3K7、TAB2基因的表达活性上升；TAB1、IRAK1基因的活性下降。说明TLR4的激活高表达，最终能使免疫因子基因NFKBIA基因高表达，从而产生大量免疫因子，参与机体免疫。为进一步在机体水平研究TLR4对犊牛肺炎抗病育种提供理论基础，为提高犊牛抗病能力的育种工作提供参考。
附图说明
[0016]图1所示为牛肺脏细胞48小时生长情况图。
[0017]图2所示为pCMV
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MYC
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TLR4过表达载体质粒结构图。
[0018]图3所示为牛肺脏细胞过表达相对定量结果图。
[0019]图4所示为牛肺脏细胞过表达蛋白表达情况图。
[0020]图5所示为牛肺脏细胞TLR4过表达增殖生长曲线图。
[0021]图6所示为牛肺脏细胞TLR4过表达各时间点活性情况图。
[0022]图7所示为过表达TLR4对相关基因表达活性的影响结果图。
[0023]图8所示为不同组TLR4表达情况图。
[0024]图9所示为荧光定量与转录组测序结果对比图。
具体实施方式
[0025]下面通过实施例对本专利技术进一步具体描述。本专利技术的设计思想或同类物质的简单替代属于本专利技术的保护范围。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本
现有常规的方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料。
[0026]本申请所使用试剂及耗材为：
[0027]过表达载体pCMV
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MYC质粒，北京捷瑞公司；DMEM高糖培养基、DMEM
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F12培养基、DPBS，Gibco公司；胰酶，Gibco公司；胎牛血清，杭州四季青公司；双抗、氨苄，sigma公司；MTT细胞增殖试剂盒、CCK
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8试剂盒，碧云天；
[0028]本申请中采用的细胞培养液：通过在基础培养基中加入50％胎牛血清和双抗(1/1000)，4℃保存获得。
[0029]本申请中采用的细胞冻存液：通过将基础培养基、DMSO和胎牛血清按7:2:1的比例进行混匀，避光4℃保存获得。
[0030]本申请中所采用的仪器为：CO2培养箱，SANYO公司；超净工作台，苏州进化设备有限公司；细胞计数板，上海医用仪器厂；恒温水浴锅DK98
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1，天津仪器有限公司；eppendorfCentrifuge 5417R离心机，美国Thermo Electron Corporation；Tissuelyser组织匀浆仪，德国QIAGEN公司；SIM
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F124制冰机，日本SANYO公司；HVE
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50自动灭菌锅，日本
HIRAYAMA公司；MILLI
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超纯水纯化系统，美国Millipor公司；AlphalmagerTM2200凝胶成像系统，美国Alpha公司；DYY
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6C型电泳仪，北京市六一仪器厂；DYCP
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31DN型电泳槽，北京市六一仪器厂；GL
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861漩涡混合器，江苏林贝尔仪器制造；电子天平：YP3001N，OMEGA公司；EppendorfPCR仪器，OMEGA公司；细胞冻存管、0.22um过滤器，德国Gibco公司。
[0031]本专利技术中选用的所有试剂、仪器、材料都为本领域熟知选用的，但不限制本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.牛TLR4基因在犊牛肺炎抗病育种中的应用。2.牛TLR4基因在促进牛肺脏细胞防止细菌侵染能力中的应用。3.如权利要求1或2任意一项所述的所述应用在牛育种中的应用。4.如权利要求1或2任意一项所述的应用，其特征在于，TLR4通过抑制TAB1和IRAK1表达，进一步上调TIRAP、MYD88、NFKBIA、IRAK4、TRAF6、MAP3K7、TAB2表达活性，从而释放大量免疫因子阻止细菌的进一步侵染。5.一种提高牛肺脏细胞防止细菌侵染能力的方法，其特征在于，在原代牛肺脏...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玲玲，刘武军，曹行，马海玉，王琼，陈斌，孙国智，苏晓慧，
申请(专利权)人：新疆农业大学，
类型：发明
国别省市：