一种外泌体裂解试剂及外泌体PD-L1蛋白检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体裂解试剂及外泌体PD

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体裂解试剂及外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒


[0001]本专利技术属于外泌体检测
，具体涉及一种外泌体裂解试剂及外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒。

技术介绍

[0002]外泌体(exosome)是一种脂质双层膜结构的细胞外囊泡，由细胞的“内吞
‑
融合
‑
外排”等一系列的调控过程从细胞膜出芽产生，其直径30
‑
200nm。近10年，多国科学家和科研工作者对外泌体进行了如火如荼的研究，并发掘出外泌体的诸多生物学功能，也发现了许多与肿瘤相关的蛋白质，这些蛋白质对科学研究、肿瘤疾病进展和防控都有积极的参考价值。
[0003]研究表明外泌体中含有诸多内容物，如DNA、mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA、多种蛋白质等。研究表明肿瘤患者血浆内的外泌体中含有许多与肿瘤发生发展、肿瘤转移相关的蛋白质。蛋白质中有膜内蛋白质，也有跨膜蛋白质。按其功能看，其中还包括许多与目前已经可以用于临床用药指导的蛋白质，如PD
‑
L1蛋白、ALK蛋白、HER2蛋白等。由于这些蛋白质在临床上主要是通过肿瘤组织的免疫组化检测来鉴定其表达情况，在血浆外泌体中的表达检测研究较少。但由于相比于肿瘤组织检测的创伤性、难重复性，血浆外泌体蛋白检测的无创性和可重复性有着非常大的优点，因此也有很大的开发价值。
[0004]目前市场上用于检测外泌体PD
‑
L1蛋白的检测产品还较少，多是通过磁珠偶联外泌体，然后使用带有化学发光信号的染料偶联PD
‑
L1抗体，进而结合外泌体表面的PD
‑
L1蛋白。检测时，加入发光液诱导发光并进行发光值的测定。
[0005]当前的外泌体PD
‑
L1蛋白检测的方法缺点如下：
[0006]磁珠法外泌体表面PD
‑
L1蛋白检测:该方法只使用一种偶联荧光染料的PD
‑
L1抗体检测血浆外泌体表面的PD
‑
L1蛋白。由于血浆中PD
‑
L1+的外泌体含量并不多，使用该方法只能检测外泌体膜表面存在的PD
‑
L1蛋白，会漏检大量的外泌体内的PD
‑
L1蛋白，检测灵敏性有限，从而会出现检测不到阳性血浆外泌体PD
‑
L1蛋白的情况。所以如何使用较少量的血浆样本获得较准确的检测结果，并提高检测的灵敏性和特异性，这是目前科研领域需要解决的问题。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是，提供一种外泌体裂解试剂及外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒。主要解决现有技术中外泌体PD
‑
L1蛋白检测灵敏性和特异性低的技术问题。
[0008]本专利技术为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
[0009]一种外泌体裂解试剂，包括：3.47
‑
4.35g/L的三羟甲基氨基甲烷，5.8
‑
7.1g/L的氯化钠，体积百分比为1
‑
5％的甘油，体积百分比为0.5
‑
4％的NP
‑
40，0.01
‑
0.5M的柠檬酸盐溶剂为水。
[0010]作为优选实施方案，所述裂解试剂包括4.05g/L的三羟甲基氨基甲烷，6.2g/L的氯
化钠，2.5％的甘油，1％的NP
‑
40，0.03M柠檬酸盐。
[0011]本专利技术还提供一种外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，该试剂盒包括所述的外泌体裂解试剂。
[0012]作为优选实施方案，所述试剂盒还包括：磁珠
‑
CD63偶联试剂、磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂、化学发光标记物
‑
PD
‑
L1抗体2偶联试剂、激发液。
[0013]作为优选实施方案，所述磁珠
‑
CD63偶联试剂包括：8.2
‑
9.15g/L的Tris，6.05
‑
7.88g/L的氯化钠，0.23
‑
0.43mg/mL磁珠
‑
CD63偶联物，其中抗体CD63的浓度为0.08
‑
0.18μg/mL，pH7.5
‑
8.0，溶剂为水。
[0014]具体地，磁珠
‑
CD63偶联试剂的制备方法为：8.7g/L的Tris，7.37g/L的氯化钠；0.08
‑
0.18μg/mL抗体CD63，0.23
‑
0.43mg/mL磁珠，充分震荡混匀，37℃条件下震荡孵育15min制备偶联试剂。
[0015]作为优选实施方案，所述磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂包括：40
‑
60mM的Tris；0.4
‑
0.6M的氯化钠；0.3
‑
0.5M蔗糖；3
‑
5g/L的BSA，0.51
‑
0.63mg/mL磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联物，其中PD
‑
L1抗体1的浓度为0.1
‑
0.22μg/mL，pH7.5
‑
8.0，溶剂为水。
[0016]具体地，磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂的制备方法为：50mM的Tris；0.5M的氯化钠；0.4M蔗糖；4g/L的BSA，pH7.8；抗体PD
‑
L1抗体1浓度为0.1
‑
0.22μg/mL；1～3μm的磁珠微球，浓度为0.45
‑
0.57mg/mL；充分震荡混匀，37℃条件下震荡孵育15min制备偶联试剂。磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1的浓度为0.51
‑
0.63mg/mL，优选为0.57mg/mL的磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂。
[0017]作为优选实施方案，所述化学发光标记物
‑
PD
‑
L1抗体2偶联试剂中的化学发光标记物为AE，AE
‑
PD
‑
L1抗体2偶联试剂包括：4.5
‑
7g/L磷酸二氢钠、3
‑
4g/L磷酸氢二钠、5
‑
7g/L氯化钠、0.1
‑
0.3g/LF
‑
127，0.64
‑
0.82mg/mLAE
‑
PD
‑
L1抗体2偶联物，pH6.0～6.5，溶剂为水。
[0018]具体地，AE...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体裂解试剂，包括：3.47
‑
4.35g/L的三羟甲基氨基甲烷，5.8
‑
7.1g/L的氯化钠，体积百分比为1
‑
5％的甘油，体积百分比为0.5
‑
4％的NP
‑
40，0.01
‑
0.5M的柠檬酸盐，溶剂为水。2.如权利要求1所述的外泌体裂解试剂，其特征在于：所述裂解试剂包括4.05g/L的三羟甲基氨基甲烷，6.2g/L的氯化钠，2.5％的甘油，1％的NP
‑
40，0.03M柠檬酸盐。3.一种外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括权利要求1
‑
2任一项所述的外泌体裂解试剂。4.如权利要求3所述的外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：磁珠
‑
CD63偶联试剂、磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂、化学发光标记物
‑
PD
‑
L1抗体2偶联试剂、激发液。5.如权利要求4所述的外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠
‑
CD63偶联试剂包括：8.2
‑
9.15g/L的Tris，6.05
‑
7.88g/L的氯化钠，0.23
‑
0.43mg/mL磁珠
‑
CD63偶联物，其中抗体CD63的浓度为0.08
‑
0.18μg/mL，pH7.5
‑
8.0，溶剂为水。6.如权利要求4所述的外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联试剂包括：40
‑
60mM的Tris；0.4
‑
0.6M的氯化钠；0.3
‑
0.5M蔗糖；3
‑
5g/L的BSA，0.51
‑
0.63mg/mL磁珠
‑
PD
‑
L1抗体1偶联物，其中PD
‑
L1抗体1的浓度为0.1
‑
0.22μg/mL，pH7.5
‑
8.0，溶剂为水。7.如权利要求4所述的外泌体PD
‑
L1蛋白检测试剂盒，其特征在于：所述化学发光标记物
‑
PD
‑
L1抗体2偶联试剂中的化学发光标记物为AE，AE
‑
PD
‑
L1偶联试剂包括：4.5
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：赵小玉，焦晓栋，蔡瑶，马跃，王晓楠，钱祺，张亚楠，
申请(专利权)人：上海思路迪医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：