一种磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及一种磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法，试剂盒包括吖啶酯标记抗体、捕获抗体、磁珠和吖啶酯抗体，本发明专利技术的试剂盒以及检测方法能够降低吖啶酯非特异性吸附，属于医学检测领域。本发明专利技术通过采用吖啶酯抗体，降低了吖啶酯在磁珠或者容器内壁上产生的非特异性吸附，有效降低吖啶酯非特异吸附信号值60％以上，提升了化学发光反应灵敏度并具有实用性。用性。

【技术实现步骤摘要】
一种磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于医学检测领域，主要涉及一种磁微粒化学发光检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]化学发光免疫测定(chemiluminescence immunoassay,CIA)根据发光物质的不同，可以分为直接化学发光免疫分析和化学发光酶免疫分析，以及电化学发光三大类型。其中直接化学发光免疫分析过程中不需要酶的催化作用，直接参与发光反应。
[0003]直接发光免疫分析过程使用的化学发光剂的化学结构上有发光基团，所以该过程不需要酶的催化作用，直接进行发光反应。其中，化学发光剂直接标记检测抗体，与待测样本、磁珠包被的捕获抗体反应，通过磁场把“磁珠包被的捕获抗体
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待测样本
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标记的检测抗体”形成的复合物分离出来，然后向复合物中加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进行定量或定性检测。最常使用的化学发光剂是吖啶酯。
[0004]吖啶酯是吖啶盐的一个总称，指的是一类用作化学发光标记物的化学物质，吖啶酯有不同的系列，通常这类物质本底发光少，在反应中能用于检测低浓度或微量浓度的样品，是一类发光效率很高的发光剂，具有发光迅速、发光值高、检测灵敏等特点，所以受到免疫检测领域的广泛认可，正越来越多的被应用于免疫检测试剂中。
[0005]但是，吖啶酯在化学发光免疫检测中存在一个应用的难点，该难点是吖啶酯存在一定的非特异性吸附，这种非特异性吸附主要来源于吖啶酯标记检测抗体溶液中未与检测抗体结合的游离吖啶酯，游离的吖啶酯会吸附在磁珠或者反应内壁上，会使本底升高，检测准确度降低。
[0006]目前还没有能够降低吖啶酯非特异吸附的方法，本领域迫切需要开发一种降低吖啶酯非特异性吸附的方法。

技术实现思路

[0007]当待测样本与包被捕获抗体的磁珠工作液、标记有吖啶酯的检测抗体工作液一起孵育时，形成了“包被捕获抗体的磁珠
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待测样本
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标记有吖啶酯的检测抗体”这样的复合物，但由于在标记了吖啶酯的检测抗体的工作液中，存在未与检测抗体相结合的游离吖啶酯，将吖啶酯抗体加入上述复合物中后，吖啶酯抗体可以与磁珠或者容器内壁竞争性结合游离吖啶酯，降低了游离吖啶酯与磁珠或者容器内壁的非特异性结合的发生率，从而降低了本底，提升了检测过程中的灵敏度，且吖啶酯抗体的加入并不影响试剂的线性性能。
[0008]本专利技术提供了一种磁微粒化学发光检测试剂盒，包括吖啶酯标记抗体、捕获抗体、磁珠，其特征在于，还包括吖啶酯抗体。
[0009]在一些实施方案中，所述吖啶酯标记抗体是吖啶酯标记的PCT检测抗体，捕获抗体是PCT捕获抗体。
[0010]本专利技术还提供了一种磁微粒化学发光检测方法，包括在样本检测过程中，在反应
杯中加待测样本，并向反应杯中加入捕获抗体、磁珠、吖啶酯抗体、吖啶酯标记抗体。
[0011]在一些实施方案中，所述捕获抗体是包被生物素标记PCT捕获抗体，所述的磁珠是链霉亲和素磁珠工作液，所述的吖啶酯标记抗体是吖啶酯标记PCT检测抗体。
[0012]在一些实施方案中，所述吖啶酯标记抗体中吖啶酯的结构如下：
[0013][0014]在一些实施方案中，所述吖啶酯抗体选自单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。
[0015]在一些实施方案中，所述吖啶酯抗体为单克隆抗体，其VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:1
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3的氨基酸序列，且其VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:4
‑
6的氨基酸序列。
[0016]在一些实施方案中，所述吖啶酯抗体与用于标记的吖啶酯的摩尔比选自0.1～5:1，优选0.5～4:1，更优选1～3:1，更优选1:1、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1，最优选2:1。本专利技术还提供了一种吖啶酯抗体，其特征在于，其VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:1
‑
3的氨基酸序列，且其VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:4
‑
6的氨基酸序列。
[0017]本专利技术还提供了吖啶酯抗体在制备磁微粒化学发光检测试剂盒或在磁微粒化学发光检测方法中的用途。
[0018]在一些实施方案中，所述试剂盒中还包括缓冲液。在一些实施方案中，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液(PBS)、2
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吗啉乙磺酸缓冲液(MES)、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐缓冲液(Tris
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HCl)、羟乙基哌嗪乙硫磺酸溶液缓冲液(HEPES)。在一些实施方案中，所述缓冲液的浓度选自0.01mol/L
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0.1mol/L，优选自0.01mol/L～0.05mol/L，更优选自0.01mol/L、0.02mol/L、0.03mol/L、0.04mol/L、0.05mol/L。在一些实施方案中，所述缓冲液的pH选自6.0
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7.5，更优选自7.0
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7.5，更优选自7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5。在一些实施方案中，所述缓冲液的pH为7.4。
[0019]在一些实施方案中，所述吖啶酯抗体是单克隆抗体，其VL CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:1
‑
3的氨基酸序列，且其VH CDR1、CDR2和CDR3分别具有SEQ ID NO:4
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6的氨基酸序列；所述缓冲液为PBS缓冲液，其浓度为0.01mol/L，pH为7.4。
[0020]定义：
[0021]本专利技术使用的术语“捕获抗体”是指能够从待测物中特异性识别并结合待测抗原的抗体。术语“检测抗体”是指另一种能够特异性识别待测抗原的抗体，其与捕获抗体分别特异性识别同一待测抗原分子上的不同抗原表位，且检测抗体标记了吖啶酯，从而实现待测抗原的定量或定性的检测。
[0022]本专利技术使用的术语“用于标记的吖啶酯”是指用于标记检测抗体的吖啶酯，其包括游离的吖啶酯、与检测抗体结合的吖啶酯。“游离的吖啶酯”是指未与检测抗体结合的吖啶
酯。
[0023]本专利技术使用的术语“容器内壁”是指与化学发光免疫分析仪配套使用的反应杯的内壁。“反应杯”是指与化学发光免疫分析仪配套使用的反应容器。
[0024]本专利技术使用的术语“ProteinA亲和层析柱”是指一种亲和层析柱，ProteinA亲和层析柱已成为应用广泛的纯化抗体的亲和柱，可从腹水、血清和细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白。
[0025]有益效果：
[0026]1：有效降低吖啶酯非特异吸附信号值60％以上；
[0027]2：提升了化学发光反应灵敏度并具有实用性。
具体实施方式
[0028]材料：
[0029]NaCl、Na2HPO4·本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁微粒化学发光检测试剂盒，包括吖啶酯标记抗体、捕获抗体、磁珠，其特征在于，还包括吖啶酯抗体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述吖啶酯标记抗体是吖啶酯标记的PCT检测抗体，捕获抗体是PCT捕获抗体。3.一种磁微粒化学发光检测方法，其特征在于，包括在样本检测过程中，在反应杯中加待测样本，并向反应杯中加入捕获抗体、磁珠、吖啶酯抗体、吖啶酯标记抗体。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述捕获抗体是包被生物素标记PCT捕获抗体，所述的磁珠是链霉亲和素磁珠工作液，所述的吖啶酯标记抗体是吖啶酯标记PCT检测抗体。5.根据权利要求1所述的试剂盒或根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述吖啶酯标记抗体中吖啶酯的结构如下：6.根据权利要求1所述的试剂盒或根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述吖啶酯抗体选自单克隆抗体或多克隆抗体，优选单克隆抗体。7.根据权利要求1所述的试剂盒或根据权利要求3所述的检...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐波，张松峰，时亚斌，冯速，卢佩，王子鸣，
申请(专利权)人：南京诺唯赞医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：