本发明专利技术公开了一种用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗体检测抗原的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍增加胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗体的投料量；当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗原检测抗体的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍减少胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗原的投料量。本发明专利技术的方法可以改善检测的临床相关性，提高胶乳增强免疫比浊法试剂的准确性，可以广泛应用于各项胶乳免疫比浊检测项目中。本发明专利技术还公开了一种胶乳增强免疫比浊法试剂。发明专利技术还公开了一种胶乳增强免疫比浊法试剂。
【技术实现步骤摘要】
一种胶乳增强免疫比浊法试剂和用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法
[0001]本专利技术属于体外诊断试剂盒开发
，更具体地说，是关于一种胶乳增强免疫比浊法试剂和用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法。
技术介绍
[0002]在体外诊断领域，胶乳增强免疫比浊法试剂是一种用于定量检测的产品，按照体外诊断试剂分析性能评估指导原则要求，准确度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需重要申报资料之一。我们通常采用方法学比对实验来评价胶乳增强免疫比浊法试剂盒的准确度，具体内容就是与参考方法或临床上公认质量较好的已上市产品(以下简称参比试剂)进行比对。
[0003]胶乳增强免疫比浊法试剂有时也被称为胶乳增强免疫比浊试剂，原理是，选择一种大小合适，均匀一致的胶乳微球吸附或者交联抗体(或抗原)，当遇到相应抗原(或抗体)时，则发生聚集，出现浊度变化，单个胶乳微球在入射光波长之内，光线可透过，当两个或多个胶乳颗粒凝聚时，则使透射光减少，这种减少的程度在一定范围内与胶乳凝集成正比，故而与被测样本中的目标抗原(或抗体)浓度成正比，所以通过测定特定波长的反应体系吸光度，参照校准曲线即可计算出样本中待检测抗原(或抗体)的含量。
[0004]与其他检测方法相比，胶乳免疫比浊法通量大，耗时短，可实现自动化，减少人为因素对检测结果的影响，同时具备良好的灵敏度及准确度。因此，胶乳免疫比浊法具有较好的应用前景。
[0005]胶乳增强免疫比浊法试剂准确度高低，直接表现在，与参比试剂比对结果上，两款产品同时测定临床样本时，利用两份样本测定值进行相关系数计算，如果r≥0.975(或者r2≥0.95)，则认为选择的数据范围合适，数据满足要求。这也就是本申请提及的临床相关性，好与不好的判断标准。
[0006]目前，提高胶乳增强免疫比浊法试剂准确度的方法包括但不限于，改变致敏微球厂家或提高胶乳粒径，或者直接提高试剂盒缓冲体系中促聚剂的品种与量，例如，相应的减少或者增加PEG的量，或者添加表面活性剂，阻断剂等成分，但是这样方法也会带来一些负面影响，比如，PEG浓度过高时，会引起比较强的非特异性反应，会直接影响灵敏度测试。还有一些方法，更换缓冲液种类，改变pH值，调节抗体种类，加入一些裂解液，有的时候也会有效果；有的时候收效甚微，可能就会被困扰住，所以找到一种普适的方法，提高试剂的准确度就显得尤为重要。
技术实现思路
[0007]鉴于上述情况，本专利技术提供了一种普适的用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂准确度的方法，在胶乳增强免疫比浊法试剂开发的过程中，当改变R1的缓冲对种类、PEG浓度、盐浓度、R2的偶联工艺、微球的投料量等均无较明显改善实际临床相关性的效果时，可考虑成
倍数增加或减少核心抗原、抗体的投料量。
[0008]经过实验验证，在胶乳免疫比浊R2试剂的偶联过程中，包被抗原时，在临床相关性不佳的时候，可适当成倍减少抗原的包被量，能非常明显提高试剂检测结果的临床相关性；包被抗体时，在临床相关性不佳的时候，可适当成倍增加抗体的包被量，能非常明显提高试剂检测结果的临床相关性，提高检测的准确度，与抗原抗体反应动力学有一定的关系。因此，本专利技术的目的是提供一种用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂与参比试剂临床相关性的方法。
[0009]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0010]作为本专利技术的第一个方面，一种用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗体检测抗原的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍增加胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗体的投料量；当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗原检测抗体的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍减少胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗原的投料量。
[0011]优选的，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗体检测抗原的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，目的抗体的投料量增加至胶乳增强免疫比浊法试剂中的初始抗体投料量的两倍。
[0012]优选的；当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗原检测抗体的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，目的抗原的投料量减少至胶乳增强免疫比浊法试剂中的初始抗原投料量的1/2倍。
[0013]根据本专利技术，R2试剂的制备方法，包括如下步骤：
[0014](1)微球活化，获得胶乳；
[0015](2)活化后的微球的清洗：将上述活化后的胶乳离心，去上清，加入偶联缓冲液，复溶，获得乳胶液，备用；
[0016](3)蛋白偶联：按照不同粒径微球的单层包被量投入目的蛋白，取目的蛋白加入到PBS偶联缓冲液中，混合均匀后，逐滴加入到胶乳液中，37℃持续搅拌5h；
[0017](4)封闭：在胶乳液中加入封闭液封闭，封闭结束后离心去上清，加入贮存液，在细胞破碎仪上进行超声分散，直到胶管出现透亮，分散均匀；
[0018](5)老化，52℃，放置16h后，获得R2试剂。
[0019]根据本专利技术，所述活化后的微球的清洗的步骤为将活化后的胶乳12000rpm离心30min，去上清，加入1mL偶联缓冲液，复溶，获得乳胶液，备用。
[0020]根据本专利技术，微球的活化步骤为：将0.1mL微球加入0.9mL活化缓冲液，均匀混合，称取5mg NHS(N
‑
羟基琥珀酰亚胺)，3mg EDC(1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐)，取上述1mL的活化缓冲液溶解后，取100μL，加入微球稀释液中，室温下持续搅拌20min。
[0021]根据本专利技术，所述PBS偶联缓冲液为50mM pH 9.0,含0.1％v/v TW
‑
20的PBS缓冲液。
[0022]根据本专利技术，所述封闭的步骤为：在胶乳液中加入500μL封闭液，37℃，持续搅拌3h，封闭结束，将封闭后的胶乳液12000rpm离心20min，去上清，加入5mL贮存液，在细胞破碎仪上进行超声分散，直到胶管出现透亮，分散均匀
[0023]根据本专利技术，所述封闭液为50mM pH 9.0，含5g/L脱脂牛奶，0.1％v/v TW
‑
20，
0.05％v/V P300的PBS缓冲液。
[0024]作为本专利技术的第二个方面，上述所述的方法在制备胶乳增强免疫比浊法试剂中的应用。
[0025]作为本专利技术的第三个方面，一种胶乳增强免疫比浊法试剂，包括R1试剂、R2试剂、目标蛋白校准品。
[0026]根据本专利技术，目标蛋白校准品为50mM pH 7.5TRIS缓冲液，是由0.9％氯化钠，0.1％EDTA
‑
2Na,0.4％BSA，0.1％P300，0.01％Tx
‑
100配置而成。
[0027]根据本专利技术，所述R1试剂为50mM pH 7.5PBS缓冲液，是由0.9％氯化钠，2.5％PEG,0.1％BSA，0.1％P300，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法，其特征在于，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗体检测抗原的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍增加胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗体的投料量；当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗原检测抗体的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，成倍减少胶乳增强免疫比浊法试剂中的目的抗原的投料量。2.如权利要求1所述的用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法，其特征在于，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗体检测抗原的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时，目的抗体的投料量增加至胶乳增强免疫比浊法试剂中的初始抗体投料量的两倍。3.如权利要求1所述的用于提高胶乳增强免疫比浊法试剂检测准确度的方法，其特征在于，当胶乳增强免疫比浊法试剂为包被抗原检测抗体的胶乳增强免疫比浊法试剂，制备R2试剂时目的抗原的投料量减少至胶乳增强免疫比浊法试剂中的初始抗原投料量的1/2倍。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的方法在制备胶乳增强免疫比浊法试剂中的应用。5.一种胶乳增强免疫比浊法试剂，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂、目标蛋白校准品。6.如权利要求5所述的胶乳增强免疫比浊法试剂，其特征在于，目标蛋白校准品为50mM pH 7.5TRIS缓冲液；所述R1试剂为50mM pH 7.5PBS缓冲液。7.如权利要求5所述的胶乳增强免疫比浊法试剂，其特征在于，所述R2试剂包括目的抗原和微球，当微球粒径为100nm时，0.5wt％1ml的微球对应的目的抗原的投料量为0.7mg*1/2n；当微球粒径为200nm时，0.5wt％1ml的微球对应的目的抗原的投料量为0.4mg*1/2n；当微球粒径为300nm时，0.5wt％1ml的微球对应的目的抗原的投料量为0.3mg*1/2n；当微球粒径为400nm时，0.5wt％1ml的微球对应的目的抗原的投料量为0.2mg*1/2n；或者，所述R2试剂包括目的抗体和微球，当微球粒径为100nm时，0.5wt％1ml的微球对应的目的抗体的投料量为0.7mg*2n；...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜玫，葛云，
申请(专利权)人：武汉瀚海新酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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