组织透明化维持试剂和用于组织透明化的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种组织透明化维持试剂和用于组织透明化的试剂盒。该组织透明化维持试剂包括第一试剂、第二试剂和封闭剂，第一试剂与第二试剂用于在透明化的组织上形成透明层，封闭剂用于在透明胶层上形成透明保护层，第一试剂包括丙烯酸

【技术实现步骤摘要】
组织透明化维持试剂和用于组织透明化的试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种组织透明化维持试剂和用于组织透明化的试剂盒。

技术介绍

[0002]脑皮层脉管网络的可视化研究是揭示诸多脑疾病发生发展过程的重要途径。近年来，成像技术及多种标记技术的快速发展使得活体水平监测脑脉管网络结构与功能的变化成为可能。通过对脑脉管网络实施长期的在体监测及操控，有望揭示其发育规律以及脑疾病诱发的脑脉管结构及功能变化的时空特征。
[0003]然而，浑浊的颅骨组织严重制约了光学成像技术实施穿颅活体皮层成像的效果。为解决这一问题，目前已发展了多种用于实施高分辨的皮层脉管成像的颅窗技术，包括：开颅玻璃颅窗、磨薄颅窗及相关衍生颅窗等。但这些技术仍存在诸多弊端。例如：手术操作过程复杂，磨薄颅窗仅能满足1次～2次的成像需求，开颅玻璃颅窗会造成大脑微环境的改变及出血，极大地限制了对皮层微脉管网络结构与功能的研究。
[0004]目前，也有一些研究报道了基于活体组织光透明技术的光透明颅窗模型，然而，这些光透明颅窗仅能满足几小时内的成像需求，若需进行重复成像研究，则要求再次的手术及颅骨透明化处理，极大地增加了研究难度。

技术实现思路

[0005]基于此，有必要提供一种可以延长颅窗透明化状态的组织透明化维持试剂。
[0006]此外，还有必要提供一种可以延长颅窗透明化状态的组织透明化的试剂盒。
[0007]一种组织透明化维持试剂，包括第一试剂、第二试剂和封闭剂，所述第一试剂与所述第二试剂用于在透明化的组织上形成透明层，所述封闭剂用于在所述透明胶层上形成透明保护层，所述第一试剂包括丙烯酸
‑
丙烯酸酯共聚物、聚二甲基硅氧烷、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸甲酯，所述第二试剂包括丙烯酸酯预聚物、丙烯酸酯单体和引发剂。
[0008]本申请的专利技术人经研究发现，在利用光透明剂对小鼠颅骨实施透明化处理后，利用第一试剂与第二试剂固化形成的透明层可以使颅骨长期稳定的透明化状态，可满足对大脑皮层脉管网络的在体长期追踪。
[0009]在其中一个实施例中，以质量百分含量计，所述第一试剂包括25％～50％的丙烯酸
‑
丙烯酸酯共聚物、15％～40％的聚二甲基硅氧烷、5％～25％的三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、和10％～20％的聚甲基丙烯酸甲酯；所述第二试剂包括70％～80％的丙烯酸酯预聚物、15％～25％丙烯酸酯单体和3％～6％的引发剂。
[0010]在其中一个实施例中，所述封闭剂包括聚丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、聚氨酯
‑
10和引发剂。
[0011]在其中一个实施例中，以质量百分含量计，所述封闭剂包括20％～40％的聚丙烯
酸酯、25％～50％的三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、20％～35％的聚氨酯
‑
10和3％～5％的引发剂。
[0012]在其中一个实施例中，所述第一试剂与所述第二试剂的质量之比为(1～2)：(1～8)。
[0013]在其中一个实施例中，所述第二试剂的引发剂为光引发剂。
[0014]一种用于组织透明化的试剂盒，包括上述组织透明化维持试剂和用于组织透明化的光透明试剂。
[0015]在其中一个实施例中，所述光透明剂选自甘油、山梨醇、乙醇、丙二醇、尿素、十二烷基苯磺酸钠和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
[0016]在其中一个实施例中，所述光透明剂包括第一透明试剂和第二透明试剂，所述第一透明试剂包括尿素和乙醇，所述第二透明试剂包括十二烷基苯磺酸钠。
[0017]在其中一个实施例中，所述第一透明试剂为75％乙醇的尿素饱和溶液；所述第二透明试剂为质量百分含量为15％～20％的十二烷基苯磺酸钠水溶液。
[0018]在其中一个实施例中，所述第二透明试剂的pH为7～8。
附图说明
[0019]图1～图2为实施例1中对两个月月龄小鼠颅骨光透明前后的大脑皮层血管成像结果；
[0020]图3为实施例2中建立颅窗后的大脑皮层血管成像结果；
[0021]图4是实施例3中建立颅窗后的大脑皮层血管成像结果；
[0022]图5是实施例4中建立颅窗后的大脑皮层血管成像结果；
[0023]图6是实施例5中建立颅窗后的大脑皮层血管成像结果；
[0024]图7是实施例6中利用光学相干断层成像系统拍摄得到的两个月月龄小鼠建立长期稳定光透明颅窗前后的大脑皮层血管成像结果；
[0025]图8是实施例6中建立透明颅窗后的两个月内的多次重复成像结果。
具体实施方式
[0026]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使本专利技术公开内容更加透彻全面。
[0027]需要说明的是，术语“第一”、“第二”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。术语“和/或”或“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0028]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。
[0029]本申请一实施方式提供了一种用于组织透明化的试剂盒，该试剂盒包括组织透明化维持试剂和用于组织透明化的光透明剂，该组织透明化维持试剂包括第一试剂、第二试剂和封闭剂。该组织透明化维持试剂可用于维持活体组织透明化，例如用于维持颅骨透明
化。
[0030]具体地，光透明剂用于将组织透明化。
[0031]在一些实施例中，光透明剂选自甘油、山梨醇、乙醇、丙二醇、尿素、十二烷基苯磺酸钠和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
[0032]在一些实施例中，光透明剂包括第一透明试剂和第二透明试剂，第一透明试剂包括尿素和乙醇，第二透明试剂包括十二烷基苯磺酸钠。第一透明试剂用于解离胶原，以便于第二透明试剂渗透；第二透明试剂用于使得组织的折射率均一化而呈现透明状态。
[0033]在其中一个实施例中，第一透明试剂为75％乙醇的尿素饱和溶液。其中，尿素用于解离胶原；75％乙醇用于加快尿素解离胶原。乙醇的浓度不宜过高，乙醇浓度过高时尿素溶解速度较慢。可以理解的是，在其他实施例中，乙醇的浓度不限于75％，还可以是其他浓度。需要说明的是，此处的“75％乙醇”是指体积百分数为75％的乙醇。
[0034]在其中一个实施例中，第一透明试剂的制备方法包括以下步骤：将尿素加入75％乙醇的溶液中并搅拌，制备尿素饱和溶液，静置后取上清，制得第一透明试剂。
[0035]在其中一个实施例中，第二试剂为质量百分含量为15％～20％的十二烷基苯磺酸钠水溶液。在一个可选地具体示例中，第二试剂为质量百分含量为15％、16％、17％、18％、19％或20％的十二烷基苯磺酸钠水溶液。可以理解的是，在其他实施例中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组织透明化维持试剂，其特征在于，包括第一试剂、第二试剂和封闭剂，所述第一试剂与所述第二试剂用于在透明化的组织上形成透明层，所述封闭剂用于在所述透明胶层上形成透明保护层，所述第一试剂包括丙烯酸
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丙烯酸酯共聚物、聚二甲基硅氧烷、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸甲酯，所述第二试剂包括丙烯酸酯预聚物、丙烯酸酯单体和引发剂。2.根据权利要求1所述的组织透明化维持试剂，其特征在于，以质量百分含量计，所述第一试剂包括25％～50％的丙烯酸
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丙烯酸酯共聚物、15％～40％的聚二甲基硅氧烷、5％～25％的三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、和10％～20％的聚甲基丙烯酸甲酯；所述第二试剂包括70％～80％的丙烯酸酯预聚物、15％～25％丙烯酸酯单体和3％～6％的引发剂。3.根据权利要求1所述的组织透明化维持试剂，其特征在于，所述封闭剂包括聚丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三丙烯酸酯、聚氨酯
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10和引发剂。4.根据权利要求3所述的组织透明化维持试剂，其特征在于，以质量百分含量计，所述封闭...

【专利技术属性】
技术研发人员：张超，冯伟，李雪，
申请(专利权)人：湛江中心人民医院，
类型：发明
国别省市：