一种注射用重组蛋白冻干粉针剂及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种注射用重组蛋白冻干粉针剂及其制备方法，涉及皮肤填充剂技术领域；本发明专利技术通过交联、冷冻干燥或冷冻干燥后交联再冻干的方式再复配赋形剂、抗氧化组分等功能性成分，制备出重组蛋白冻干粉针剂，终产品为冻干形式，外观平整、复溶时间短，能方便的应用于软、硬组织组织填充或辅助填充；交联处理延长了体内作用时间，且产品具有一定的内聚性和粘弹性，具有良好的填充/治疗效果。具有良好的填充/治疗效果。具有良好的填充/治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
一种注射用重组蛋白冻干粉针剂及其制备方法


[0001]本专利技术涉及皮肤填充剂
，具体涉及一种注射用重组蛋白冻干粉针剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]皮肤含有大量透明质酸，皮肤色泽、水嫩、润滑等随其含量和新陈代谢而变化。因此玻尿酸注射成为整形美容首选产品，但非交联的透明质酸在体内降解较快，需频繁注射，故对HA进行交联以期延长体内存留时间，HA经修饰或交联后获得了一些毒性小、生物相容性好的抗降解产物，陆续被开发为多种医药产品，但是玻尿酸强大的锁吸水功能使其进入血运后膨胀变大，容易形成血栓，造成血运障碍，发生皮肤坏死、失明、偏瘫、甚至死亡。
[0003]人体目前已发现28种不同型别的胶原蛋白，分别分布于皮肤、粘膜、血管、骨骼、肌腱、内脏器官等人体的各个部位，发挥着各自不同的生理功能。人体皮肤及粘膜中，胶原蛋白占干重的70％至80％，在生物医药工程中，胶原蛋白在修复组织创伤、支撑细胞再组、抑制瘢痕形成、改善皮肤状态、提升皮肤弹性与柔嫩度等方面有更广泛应用。
[0004]但目前市面上用于填充或创面愈合的产品多以液态存在，存储条件比较苛刻，运输成本较高且不便捷。

技术实现思路

[0005]为克服现有的技术缺陷，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]第一方面，提供了一种注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)将重组蛋白用缓冲液制成浓度为35
‑
120mg/mL的蛋白溶液，并对蛋白溶液进行灭活处理；
[0008]所述重组蛋白为重组人I型胶原蛋白、重组人II型胶原蛋白、重组人III型胶原蛋白、重组人IV型胶原蛋白、重组人VII型胶原蛋白、重组人XVII型胶原蛋白、重组人XVIII型胶原蛋白、重组人弹性蛋白、重组人纤连蛋白、重组人玻连蛋白、重组人层粘连蛋白中一种或多种；
[0009](2)往灭活后的蛋白溶液中加入交联剂，在4
‑
20℃下进行交联处理3
‑
6h；
[0010](3)交联完成后，用磷酸盐缓冲液和30～60％乙醇交替清洗，清洗完成后置于透析袋中进行透析，得到交联混合物；
[0011](4)将交联混合物在30
‑
45℃下浓缩至原质量的1/5
‑
1/20，加入赋形剂、抗氧化剂、麻醉剂混合均匀，冷冻干燥并灭菌处理后得到重组蛋白冻干粉针剂。
[0012]进一步地，步骤(1)中，所述缓冲液为pH 6.8～7.6的磷酸盐缓冲液；步骤(1)中的灭活处理具体为：将蛋白溶液在60
‑
80℃水浴灭活处理15
‑
30min。
[0013]进一步地，步骤(2)中，所述交联剂为EDC、戊二醛、京尼平和环氧交联剂中的一种。
[0014]优选地，上述交联剂分别为浓度1
‑
5％的EDC、0.25
‑
0.75％的戊二醛、2
‑
10％的京尼平、5
‑
10％的环氧交联剂。
[0015]进一步地，步骤(3)中，所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.8～7.6。
[0016]进一步地，步骤(3)中，采用透析液进行透析处理，透析处理具体为：采用pH值6.8～7.6的磷酸盐缓冲液作为透析液，4
‑
20℃透析12
‑
24h。
[0017]进一步地，步骤(4)中，所述赋形剂为甘露醇、海藻糖中的一种或多种；所述抗氧化剂为熊果苷、烟酰胺、维生素A、维生素C、凝血酸、二甲氨基乙醇中的一种或多种；所述麻醉剂为盐酸利多卡因、丁卡因中的一种或多种。
[0018]进一步地，步骤(4)中，所述冷冻干燥过程为：置于
‑
20℃中预冻2
‑
5h后再升温至
‑
5℃维持1
‑
3h，随后升温至5
‑
15℃抽真空干燥36
‑
48h，形成重组蛋白冻干粉针剂。
[0019]优选地，步骤(4)中，灭菌处理采用辐照灭菌。
[0020]优选地，步骤(4)中，辐照灭菌为7
‑
21gky低剂量辐照灭菌。
[0021]第二方面，提供了另一种注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，包括以下步骤：
[0022](1)将重组蛋白用缓冲液制成浓度为35
‑
120mg/mL的蛋白溶液，并对蛋白溶液进行灭活处理；
[0023]所述重组蛋白为重组人I型胶原蛋白、重组人II型胶原蛋白、重组人III型胶原蛋白、重组人IV型胶原蛋白、重组人VII型胶原蛋白、重组人XVII型胶原蛋白、重组人XVIII型胶原蛋白、重组人弹性蛋白、重组人纤连蛋白、重组人玻连蛋白、重组人层粘连蛋白中一种或多种；
[0024](2)将蛋白溶液于真空冷冻干燥机中冷冻干燥形成冻干海绵；
[0025](3)冻干完成后对冻干海绵进行物理交联；
[0026](4)将步骤(3)交联后的冻干海绵进行超高速低温粉碎成粉末状海绵；
[0027](5)往粉末状海绵中加入纯化水制成混悬液，随后加入赋形剂、抗氧化剂和麻醉剂，混合均匀得到混合物；所述粉末状海绵与水的质量比为1:0.5
‑
1:1.5；
[0028](6)对混合物进行冷冻干燥和灭菌处理后得到重组蛋白冻干粉针剂。
[0029]进一步地，步骤(1)中，所述缓冲液为pH 6.8～7.6的磷酸盐缓冲液；步骤(1)中的灭活处理具体为：将蛋白溶液在60
‑
80℃水浴灭活处理15
‑
30min。
[0030]进一步地，步骤(2)中，所述冷冻干燥过程为：将蛋白溶液置于
‑
20℃中预冻2
‑
5h后再升温至
‑
5℃维持1
‑
3h，随后升温至5
‑
15℃抽真空干燥36
‑
48h形成冻干海绵。
[0031]进一步地，步骤(3)中，所述物理交联为紫外光照射交联、辐照交联、真空干热交联中的一种。
[0032]优选地，上述物理交联的交联条件为：紫外光照射交联：10W，254nm，25℃，交联30
‑
90min；辐照交联：3
‑
8kGy电子束/
60
Coγ
‑
射线辐照交联；真空干热交联：105
‑
121℃、5
‑
30min。
[0033]进一步地，步骤(5)中，所述赋形剂为甘露醇、海藻糖中的一种或多种；所述抗氧化剂为熊果苷、烟酰胺、维生素A、维生素C、凝血酸、二甲氨基乙醇中的一种或多种；所述麻醉剂为盐酸利多卡因、丁卡因中的一种或多种。
[0034]优先地，所述注射用重组蛋白冻干粉针剂中，赋形剂、抗氧化剂和麻醉剂的占比分别为9
‑
15％、5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将重组蛋白用缓冲液制成浓度为35
‑
120mg/mL的蛋白溶液，并对蛋白溶液进行灭活处理；所述重组蛋白为重组人I型胶原蛋白、重组人II型胶原蛋白、重组人III型胶原蛋白、重组人IV型胶原蛋白、重组人VII型胶原蛋白、重组人XVII型胶原蛋白、重组人XVIII型胶原蛋白、重组人弹性蛋白、重组人纤连蛋白、重组人玻连蛋白、重组人层粘连蛋白中一种或多种；(2)往灭活后的蛋白溶液中加入交联剂，在4
‑
20℃下进行交联处理3
‑
6h；(3)交联完成后，用磷酸盐缓冲液和30～60％乙醇交替清洗，清洗完成后置于透析袋中进行透析，得到交联混合物；(4)将交联混合物在30
‑
45℃下浓缩至原质量的1/5
‑
1/20，加入赋形剂、抗氧化剂、麻醉剂混合均匀，冷冻干燥并灭菌处理后得到重组蛋白冻干粉针剂。2.根据权利要求1所述的注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述交联剂为EDC、戊二醛、京尼平和环氧交联剂中的一种。3.根据权利要求1所述的注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述磷酸盐缓冲液的pH值为6.8～7.6。4.根据权利要求1所述的注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述赋形剂为甘露醇、海藻糖中的一种或多种；所述抗氧化剂为熊果苷、烟酰胺、维生素A、维生素C、凝血酸、二甲氨基乙醇中的一种或多种；所述麻醉剂为盐酸利多卡因、丁卡因中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的注射用重组蛋白冻干粉针剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述冷冻干燥过程为：置于
‑
20℃中预冻2
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5h后再升温至
‑
5℃维持1
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3h，随后升温至5
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15℃抽真空干燥36
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48h，形成重组蛋白冻干粉针剂。6.一种注射用重组蛋白冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨莎莎，黄文涛，田智泉，
申请(专利权)人：西安德诺海思医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：