一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型的造模方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型的造模方法及应用，包括选择3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠以灌胃方式按照大鼠体重每100克给予100mg/ml的双酚A溶液0.1ml，1周后开始每日上午9点阴道图片观察动情周期，动情周期紊乱后的大鼠给予肾阳虚症状评分，评分≥4分即视为肾阳虚型卵巢储备功能下降大鼠模型造模成功。本方法建造的动物模型即有卵巢储备功能下降的病的特点，又具备肾阳虚的证的特点，可以为挖掘中医药应对环境污染，保护女性生育力和中药新药研发奠定基础，且具有造模时间短等特点。间短等特点。

【技术实现步骤摘要】
一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型的造模方法及应用


[0001]本专利技术中医病证结合动物模型研究领域。
[0002]具体地说，是涉及一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型的造模方法及应用。

技术介绍

[0003]卵巢储备(ovarianreserve，OR)指卵巢内存留卵泡的数量和质量，代表女性的生育潜能。卵巢储备功能下降(Diminishedovarianreservefunction,DOR)是指卵巢内存留的可募集的卵泡数量和/或卵母细胞质量下降，表现为卵巢储备试验及月经周期改变，进一步可发展为卵巢功能衰竭，临床症状主要有月经稀发、月经量少、排卵障碍、功能性子宫出血、不孕等。
[0004]DOR发病率逐年升高，有低龄化发展趋势，是妇科领域研究的热点和难点之一。激素替代治疗、促排卵治疗和人工辅助生殖技术等可以解决女性生育要求，但难以克服适用人群限制和长期激素替代用药安全性问题，在改善主观症状方面尚有不足，导致其使用有一定局限性。中医药是中华传统文化的瑰宝，当代医家发挥中医学整体观念和辨证论治特色，在治未病理论指导下在临床实践中取得了满意的中医药干预DOR疗效，这些宝贵经验的深入研究和推广需要动物实验验证和支持。现有的药物损伤、化疗药物、基因编辑、免疫、应激和复合因素造模法与本病的中医学理法方药契合度尚有待提高。
[0005]中医学具有整体观念和辨证论治特色，在治未病理论指导下在临床实践中取得了满意的中医药干预该病的疗效，这些宝贵经验的深入研究和推广需要动物实验的验证和支持。双酚A(BisphenolA，BPA)是当前环境普遍存在的环境污染物，是影响女性生育力的因素之一。现有的药物损伤、化疗药物、基因编辑、免疫、应激和复合因素等造模法确实可以造成卵巢储备功能下降动物模型，但是这些动物模型的发病过程与人相差甚远，并且没有对其进行中医证候属性的评价方式，难以体现中医特色的辨证论治，因此有必要进一步探索当前生活环境下与女性卵巢储备功能下降发病原因、发病过程、病理表现契合度更高的中医病证结合动物模型，为进一步深入研究发掘中医药在保护卵巢储备功能方面的独特作用提供更加科学合理的动物模型选择。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种为中医药治疗卵巢储备功能下降的新的病症结合的肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型造模方法及应用。
[0007]本专利技术的目的是通过以下技术措施来达到的：
[0008]一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型造模方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0009]步骤一：选鼠，选择3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠；
[0010]步骤二：配药，以纯度大于99％双酚A溶于无水乙醇，配制成双酚A储备液，玉米油定容，配制成浓度100mg/ml的双酚A溶液；
[0011]步骤三：灌药，以灌胃方式按照大鼠体重每100克给予100mg/ml的双酚A溶液
0.1ml；
[0012]步骤四：筛选动情周期紊乱的大鼠，一周后每日阴道图片观察动情周期，动情周期延长至七天及以上或持续处于动情间期，或动情期延长至三天及以上视为动情周期紊乱；
[0013]步骤五：筛选得到肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型，对动情周期紊乱后的大鼠根据以下症状进行评分：被毛松散、喜扎堆、倦怠嗜卧、肛温下降、饮水量减少、大便稀溏，评分规则为初始分零分，其中每出现上述其中一项症状，则累加1分，如果总分≥4分，则视为肾阳虚型卵巢储备功能下降大鼠模型造模成功。
[0014]一种具体优化方案，步骤一中的3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠，体重245g～270g，未交配，保持室温23～25℃，相对湿度50～60％，日光灯光照，明/暗＝12/12小时，自由摄食、饮水。
[0015]一种具体优化方案，步骤四中，一周后开始每日上午9点阴道图片观察动情周期变化。
[0016]一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型的应用，其特征在于：应用于肾阳虚型卵巢储备功能下降的中医证型的研究，所述的研究包括中医药作用机制和/或临床疗效评价和/或新药开发。
[0017]由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术的优点是：
[0018]双酚A是目前环境中广泛存在的具有弱雌激素作用的环境污染物，空气、水、土壤无处不在，几乎所有成人和儿童的尿液、孕妇血清、乳汁、卵泡液和羊水、脐血胎盘以及胎儿肝脏中都可以检测到，现代研究表明其对女性健康有多种影响，深入研究其对女性生育力的影响具有时代意义；中医药是中华文化的宝库，辨证论治是中医药学的指导思想，现有的卵巢储备功能下降动物模型没有区分证型，不能体现中医学辨证论治的指导思想，也不利于进一步深入研究中医药作用机制和临床疗效评价以及新药开发，本方法建造的动物模型即有卵巢储备功能下降的病的特点，又具备肾阳虚的证的特点，可以为挖掘中医药应对环境污染，保护女性生育力和中药新药研发奠定基础。
具体实施方式
[0019]实施:1：一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型造模方法，包括以下步骤：
[0020]步骤一：选鼠，选择3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠；
[0021]步骤二：配药，以纯度大于99％双酚A溶于无水乙醇，配制成双酚A储备液，玉米油定容，配制成浓度100mg/ml的双酚A溶液；
[0022]步骤三：灌药，以灌胃方式按照大鼠体重每100克给予100mg/ml的双酚A溶液0.1ml；
[0023]步骤四：筛选动情周期紊乱的大鼠，一周后每日阴道图片观察动情周期，动情周期延长至七天及以上或持续处于动情间期，或动情期延长至三天及以上视为动情周期紊乱；
[0024]步骤五：筛选得到肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型，对动情周期紊乱后的大鼠根据以下症状进行评分：被毛松散、喜扎堆、倦怠嗜卧、肛温下降、饮水量减少、大便稀溏，评分规则为初始分零分，其中每出现上述其中一项症状，则累加1分，如果总分≥4分，则视为肾阳虚型卵巢储备功能下降大鼠模型造模成功。
[0025]步骤一中的3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠，体重245g～270g，未交配，保持室温23～
25℃，相对湿度50～60％，日光灯光照，明/暗＝12/12小时，自由摄食、饮水。
[0026]步骤四中，一周后开始每日上午9点阴道图片观察动情周期变化。每日观察记录大鼠饮水量，皮毛色泽，自主活动，肛温和大便性状。
[0027]实验一：双酚A导致卵巢储备功能下降大鼠模型的研究
[0028]选择动情周期规律的SPF级3月龄清洁SD大鼠30只，随机分为3月龄对照组、3月龄低、中、高剂量组和3月龄雷公藤组；另选动情周期规律的SPF级6月龄清洁SD大鼠30只，随机分为6月龄对照组、6月龄低、中、高剂量组和6月龄雷公藤组。以灌胃方式每日给予低剂量组双酚A溶液50mg/kg/day、中剂量组双酚A溶液100mg/kg/day、高剂量组双酚A溶液200mg/kg/day，对照组给予等体积玉米油，雷公藤多苷组给予50mg/kg/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型造模方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：选鼠，选择3月龄清洁SPF级雌性SD大鼠；步骤二：配药，以纯度大于99％双酚A溶于无水乙醇，配制成双酚A储备液，玉米油定容，配制成浓度100mg/ml的双酚A溶液；步骤三：灌药，以灌胃方式按照大鼠体重每100克给予100mg/ml的双酚A溶液0.1ml；步骤四：筛选动情周期紊乱的大鼠，一周后每日阴道图片观察动情周期，动情周期延长至七天及以上或持续处于动情间期，或动情期延长至三天及以上视为动情周期紊乱；步骤五：筛选得到肾阳虚型卵巢储备功能下降动物模型，对动情周期紊乱后的大鼠根据以下症状进行评分：被毛松散、喜扎堆、倦怠嗜卧、肛温下降、饮水量减少和大便稀溏，评分规则为初始分零分，其中每出现上述其...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦秀云，刘杰，王蒙，冯晓，张蕾，张建伟，
申请(专利权)人：日照市妇女儿童医院日照市妇幼保健院，日照市妇幼保健计划生育服务中心，
类型：发明
国别省市：