一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用，试剂盒由有试纸条、二氧化锰

【技术实现步骤摘要】
一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及果蔬产品中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其应用，属于分析化学


技术介绍

[0002]多菌灵(carbendazim，bcm)作为一种低毒、光谱的抗菌剂，常被用于由真菌引起的毒害的防治中。多菌灵主要通过叶面喷雾、种子处理或土壤处理等方式施用，因而多菌灵能渗入植物内部。多菌灵的残留能引起肝病和染色体畸变，对哺乳动物有毒害。长期食用农药残留超标的蔬菜，可能对人体健康产生不良影响。因此，建立健全多菌灵的快速检测手段对保证食品安全具有非常重要的现实意义。
[0003]虽然检测多菌灵的方法很多，但皆因其设备昂贵、操作繁琐、费时而受到限制。近年来，免疫层析法因操作简单，不需辅助仪器和试剂，3～5分钟出结果，并可肉眼判断等特点。二氧化锰纳米片具有水溶性好、制备简单、吸附能力强的优势，可与抗体偶联制备免疫传感探针。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了用于定性半定量检测果蔬产品中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒及其检测方法，为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0005]一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒，包括盒体，盒体内有试纸条、二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针、提取液和离心管。所述试纸条包括吸水垫，硝酸纤维素膜，PVC背板，结合垫，其特征在于，在PVC背板上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述的硝酸纤维素膜上分别包被有羊抗鼠抗体构成的质控线和多菌灵抗原构成的检测线，两条线间隔距离为4
‑
6mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为0.8
‑
1.3mm，试纸条宽3.0
‑
4.0mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为1mm。将二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针与待测样品混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，待测物抗原与多菌灵竞争结合二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针，二氧化锰纳米片截留在检测线上而产生颜色，通过肉眼观测实现对多菌灵的定性半定量分析。
[0006]优选的，二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针由二氧化锰纳米片和多菌灵单克隆抗体构成。具体制备步骤如下：
[0007](1)取500μL 50μg/mL二氧化锰纳米片溶液,向其中添加2μL 0.2M K2CO3溶液及20μL 0.65mg/mL待测物抗体加入到上述溶液中混合均匀，室温下静置1h。
[0008](2)向其中加入10μL 20％BSA及8μL 10％PEG
20000
，混匀后室温下静置30min。
[0009](3)将安道管配平，4℃条件下，8000rpm离心40min，弃去上清，溶液复溶至200μL0.5％BSA，0.5％PVP，1％Tween 20及0.5％PEG
200
混合液中待用。
[0010]优选的，将用PBS溶液稀释后的羊抗兔或羊抗鼠抗体包被于硝酸纤维素膜上作为质控线，包被量分别为0.7μL/cm，将用PBS溶液稀释后的多菌灵抗原包被于硝酸纤维素膜上作为检测线，包被量分别为0.7μL/cm，37℃烘干，斩切为宽为3.7mm的试纸条，封装备用。
[0011]优选的，本专利技术试纸条的使用方法为：取10μL制备的二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针，添加于100μL样品溶液中，混合后滴在样品垫上，用肉眼在10分钟内获得视觉结果。本专利技术检测限定义为当检测线上颜色消失时多菌灵的浓度。
[0012]进一步，试剂盒对多菌灵的检测限为5ng/mL。
[0013]与现有国内外多菌灵检测技术相比，本专利技术具有以下突出的优点：
[0014]1.本专利技术可用于多菌灵的高灵敏度和定量检测；
[0015]2.本专利技术准确性好、灵敏度高，适用于大量样品的快速筛选，可作为食品中小分子待测物快速检测的有效筛检手段。
附图说明
[0016]构成本专利技术创造的一部分的附图用来提供对本专利技术创造的进一步理解，本专利技术创造的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术创造，并不构成对本专利技术创造的不当限定。在附图中：
[0017]图1而二氧化锰
‑
抗体探针制备示意图。
[0018]图2为本专利技术检测试纸条的组装示意图。
[0019]图3为本专利技术检测多菌灵标准溶液结果图(从左到右多菌灵添加浓度：0、5、10、20、50ng/mL)。
[0020]图4为本专利技术检测白菜中多菌灵结果图(从左到右多菌灵添加浓度：0、25、50、100、250ng/g)。
具体实施方式
[0021]下面将参考附图并结合实施例来详细说明本专利技术创造，但所举实例不作为对本专利技术的限定。
[0022]实施例l(制备实施例)
[0023]二氧化锰
‑
抗体探针的制备
[0024](1)如图1所示，取500μL 50μg/mL二氧化锰纳米片溶液,向其中添加2μL 0.2M K2CO3溶液及20μL 0.65mg/mL待测物抗体加入到上述溶液中混合均匀，室温下静置1h。
[0025](2)向其中加入10μL 20％BSA及8μL 10％PEG
20000
，混匀后室温下静置30min。
[0026](3)将安道管配平，4℃条件下，8000rpm离心40min，弃去上清，溶液复溶至200μL 0.5％BSA，0.5％PVP，1％Tween 20及0.5％PEG
200
混合液中待用。
[0027]实施例2(制备实施例)
[0028]多菌灵二氧化锰免疫快速检测试纸条的制备
[0029]1.硝酸纤维素膜的包被
[0030]用双维平面划膜仪将多菌灵抗原用PBS溶液稀释为0.1mg/mL后，包被于硝酸纤维素膜2上作为检测线7，包被量为0.7μL/cm；将用PBS溶液稀释为0.81mg/mL后的羊抗鼠抗体包被于硝酸纤维素膜2上作为质控线6，包被量为0.7μL/cm，37℃烘干，斩切为宽为3.7mm的
试纸条，封装备用。
[0031]2.试纸条的组装
[0032]如图2所示，将样品垫5、结合垫4、硝酸纤维素膜2、吸水垫1按图1所示的顺序依次粘附在PVC背板3上，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫个交叠区的长度分别为1mm。切成3.7mm宽的小条，真空封装。
[0033]实施例3(应用实施例)
[0034]多菌灵快速检测试剂盒的使用技术
[0035]1.果蔬样品的预处理
[0036]取1.0
‑
5.0g果蔬样品置于5
‑
25mL提取液中震荡提取1
‑
5min，得到的溶液即为样品提取液。
[0037]2.检测步骤
[0038]取1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒，包括盒体，盒体内有试纸条、二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针、提取液和离心管，所述试纸条包括吸水垫，硝酸纤维素膜，PVC背板，结合垫，其特征在于，在PVC背板上按顺序依次粘附有样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫；所述的硝酸纤维素膜上分别包被有羊抗鼠抗体构成的质控线和多菌灵抗原构成的检测线，两条线间隔距离为4
‑
6mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为0.8
‑
1.3mm，试纸条宽3.0
‑
4.0mm；样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫各交叠区的长度分别为1mm；将二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针与待测样品混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，待测物抗原与多菌灵竞争结合二氧化锰
‑
多菌灵抗体探针，二氧化锰纳米片截留在检测线上而产生颜色，通过肉眼观测实现对多菌灵的定性半定量分析。2.权利要求1所述的一种果蔬中农药多菌灵的二氧化锰免疫快速检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：包括以下步骤：(1)利用二氧化锰纳米片的吸附性能将多菌灵抗体吸附于二氧化锰纳米片表面制备“二氧化锰纳米片
‑
多菌灵抗体”探针；(2)按顺序依次将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫粘贴于PVC背板上；所述的硝酸纤维素膜上分别包被有多菌灵抗原构成的检测线和羊抗鼠抗体构成的质控线；(3)将探针与提取液混合后滴加于样品垫，通过毛细管作用向吸水垫层析，多菌灵抗原与多菌灵竞争结合探针，通过肉眼观测实现对多菌灵的定性半定量分析。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，二氧化锰纳米片
‑
多菌灵...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶秀友，
申请(专利权)人：浙江优食环境科技有限公司，
类型：发明
国别省市：