本申请涉及一种甲基转移酶突变体、重组载体、重组工程菌及其应用。该甲基转移酶突变体包括：(a)、由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸组成的多肽；或，(b)、与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽。上述甲基转移酶突变体在45℃下的半衰期在26min以上，高于野生型甲基转移酶的半衰期，适于在较高的温度下催化甲基化反应。高的温度下催化甲基化反应。高的温度下催化甲基化反应。
【技术实现步骤摘要】
甲基转移酶突变体、重组载体、重组工程菌及其应用
[0001]本申请涉及生物
，特别是涉及一种甲基转移酶突变体、重组载体、重组工程菌及其应用。
技术介绍
[0002]甲基转移酶是生物有机体内普遍存在的一种重要酶类，它能催化遗传物质DNA的甲基化，在基因表达及动物生长、发育中起着重要的调控作用；同时，也能催化多种生理过程中间产物的甲基化进而合成或降解生理活性物质。根据研究发现，人类的情绪和许多疾病的发生及植物的抗逆性都与甲基转移酶基因的表达有关。然而，市场上大多数甲基转移酶突变体的热稳定性较差，难以满足实际需求。
技术实现思路
[0003]基于此，有必提供一种热稳定性较好的甲基转移酶突变体、重组载体、重组工程菌及其应用。
[0004]一种甲基转移酶突变体，所述甲基转移酶突变体包括：
[0005](a)、由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸组成的多肽；或，
[0006](b)、与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽。
[0007]研究发现，包括由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸得到的多肽；或，与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽的甲基转移酶突变体具有较好的热稳定性。经试验验证，上述甲基转移酶突变体在45℃下的半衰期在26min以上，高于野生型甲基转移酶的半衰期，热稳定性较好，适于在较高的温度下催化甲基化反应，尤其是含有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变S250A突变得到的多肽的甲基转移酶突变体在45℃下半衰期大约是野生型甲基转移酶的4倍，具有意料不到的效果。
[0008]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列中第185位氨基酸、第218位氨基酸、第250位氨基酸及第317位氨基酸中的至少一个发生突变得到的多肽。
[0009]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中至少一种得到的多肽。
[0010]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意一种得到的多肽。
[0011]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意两种得到的多肽。
[0012]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸
序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意三种得到的多肽。
[0013]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变得到的多肽。
[0014]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体的氨基酸序列为如SEQ ID No.3～SEQ ID No.17所示的序列中的一种。
[0015]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体的编码序列包括：
[0016](a)、与如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成的多核苷酸具有至少90％同源性的多核苷酸；或，
[0017](b)、由如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列缺失、替代或增加一个或多个碱基得到的多核苷酸。
[0018]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体的核苷酸序列为如SEQ ID No.28～SEQ ID No.42所示的序列中的一种。
[0019]其中一个实施例中，所述甲基转移酶突变体为可溶性酶、固定化酶或者基因工程酶。
[0020]一种重组载体，含有上述甲基转移酶突变体的编码序列。
[0021]其中一个实施例中，包括如下步骤：采用第一扩增引物对对第一载体进行PCR扩增，得到重组载体，其中，所述第一载体含有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列对应的编码序列，所述第一扩增引物对含有所述甲基转移酶突变体的突变位点对应的核苷酸序列。
[0022]其中一个实施例中，所述第一扩增引物对选自如下引物对中的至少一对：核苷酸序列如SEQ ID No.20和SEQ ID No.21所示的引物对、核苷酸序列如SEQ ID No.22和SEQ ID No.23所示的引物对、核苷酸序列如SEQ ID No.24和SEQ ID No.25所示的引物对、核苷酸序列如SEQ ID No.26和SEQ ID No.27所示的引物对。
[0023]一种重组工程菌，含上述重组载体。
[0024]上述甲基转移酶突变体、上述重组载体或者上述重组工程菌在催化甲基化反应中的应用。
附图说明
[0025]图1为氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的甲基转移酶的蛋白模拟晶体结构示意图及突变点在晶体结构上的分布示意图。
具体实施方式
[0026]为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例及附图对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施的限制。
[0027]本申请一实施方式提供一种甲基转移酶突变体包括：
[0028](a)、由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸组成的多肽；或，
[0029](b)、与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽。
[0030]研究发现，包括由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸得到的多肽；或，与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽的甲基转移酶突变体具有较好的热稳定性。经试验验证，上述甲基转移酶突变体在45℃下的半衰期在26min以上，高于野生型甲基转移酶的半衰期，热稳定性较好，适于在较高的温度下催化甲基化反应，尤其是含有如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变S250A突变得到的多肽的甲基转移酶突变体在45℃下半衰期大约是野生型甲基转移酶的4倍，具有意料不到的效果。
[0031]如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列为来源于Trypanosoma grayi的野生型甲基转移酶TGMT，命名为TGMT蛋白。编码该蛋白的核苷酸序列为SEQ ID No.1。
[0032]具体地，如SEQ ID No本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种甲基转移酶突变体，其特征在于，所述甲基转移酶突变体包括：(a)、由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列缺失、替代或增加一个或多个氨基酸组成的多肽；或，(b)、与如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的多肽具有至少90％同源性的多肽。2.根据权利要求1所述的甲基转移酶突变体，其特征在于，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列中第185位氨基酸、第218位氨基酸、第250位氨基酸及第317位氨基酸中的至少一个发生突变得到的多肽。3.根据权利要求2所述的甲基转移酶突变体，其特征在于，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中至少一种得到的多肽。4.根据权利要求3所述的甲基转移酶突变体，其特征在于，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意一种得到的多肽；或者，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意两种得到的多肽；或者，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变中的任意三种得到的多肽；或者，所述甲基转移酶突变体包括：由如SEQ ID No.2所示的氨基酸序列同时发生C185I突变、V218I突变、S250A突变及A317S突变得到的多肽。5.根据权利要求4所述的甲基转移酶突变体，其特征在于，所述甲基转移酶突变体的氨基酸序列为如SEQ ID No.3～SEQ ID No.17所示的序列中的一种。6.根据权利要求1所述的甲基转移酶突变体，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：马富强，陆泽林，罗成坤，王志耘，杨广宇，
申请(专利权)人：苏州瀚源新酶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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