一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法技术

本发明专利技术提供了一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，包括以下步骤：S1、采集可口革囊星虫腔液；S2、从腔液中分离出腔液细胞；S3、将提取液加入腔液细胞，混匀并使细胞完全裂解，裂解液离心，取上清液离心，去除沉淀及杂质，得到抗菌物质抽提液；S4、将抽提上清液用沸水浴处理，离心去除不耐热的蛋白及杂质沉淀，得到抗菌物质纯化液；S5、对抗菌物质纯化液用透析液进行透析，透析后进行离心超滤浓缩，得到可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。本发明专利技术方法得到的抗菌活性物质广谱抗菌，且具有很强的耐热性，具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法


[0001]本专利技术涉及抗菌活性物质提取
，尤其涉及一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法。

技术介绍

[0002]天然产物是人类药物的重要来源，据统计目前超过50％的药物均直接或间接来源于天然产物。海洋生物的生存环境和代谢产物与陆地生物不同，产生并积累了大量具有特殊化学结构和生理活性的物质。因此，海洋生物成为寻找和发掘新的生物活性物质及药物的巨大宝库。截止目前已经发现具有抗肿瘤、抗病毒、抗心血管疾病、增强免疫系统等活性的海洋生物活性物质5000余种。天然抗菌物质在药物残留及细菌耐药性方面比传统抗生物类药物具有显著的优势，使其在药物开发、临床治疗、食品防腐及饲料添加剂等领域应用前景广阔。
[0003]可口革囊星虫(Phasolosma esculenta)俗称海丁、海蚂蝗、泥丁、土笋等，隶属星虫动物门(Sipuncula)、革囊星虫纲(Phascolosomatidea)、革囊星虫目(Phascolosomaliformes)、革囊星虫科(Phascolosomatidae)、革囊星虫属(Phascolosoma)，主要分布于浙江、福建沿海等地，是我国特有物种，常供食用。可口革囊星虫营养丰富，常加工成“沙虫干”和“土笋冻”等海珍品，具有滋阴降火、补肾益智的功效，被誉为“动物洋参”及海中的“冬虫夏草，”深受国内外消费者欢迎。除此之外，可口革囊星虫还含有胶原蛋白、蚯蚓血红蛋白、精氨酸磷酸转移酶、章鱼碱脱氧酶、牛磺酸等多种活性物质。由此可见，可口革囊星虫作为一种重要的海洋生物资源具有极大研究价值及资源开发利用潜力。
[0004]研究发现可口革囊星虫的腔液具有抗菌活性，但目前对于其提取制备方法研究较少，用现有技术提取的腔液不耐热，稳定性差，容易失活，且抗菌谱较窄，导致抽提得到的抗菌活性物质的应用前景大大受到限制。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的问题是如何提高可口革囊星虫腔液抗菌活性物质的抗菌能力和耐高温能力。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，包括以下步骤：
[0007]S1、采集可口革囊星虫腔液；
[0008]S2、从腔液中分离出腔液细胞；
[0009]S3、将提取液加入腔液细胞，混匀并使细胞完全裂解，裂解液离心，取上清液离心，去除沉淀及杂质，得到抗菌物质抽提液；
[0010]S4、将抽提上清液用沸水浴处理，离心去除不耐热的蛋白及杂质沉淀，得到抗菌物质纯化液；
[0011]S5、对抗菌物质纯化液用透析液进行透析，透析后进行离心超滤浓缩，得到可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。
[0012]相对于现有技术，本专利技术对可口革囊星虫的腔液进行有效利用，变废为宝，有利于节约资源和保护环境；本专利技术的步骤简单，易于操作，可重复性强，能高效提取腔液中的抗菌活性物质；抽提得到的抗菌活性物质广谱抗菌，且具有很强的耐热性，具有很好的应用前景。
[0013]进一步地，所述步骤S4具体包括：将步骤S3获得的抽提上清液在100℃沸水浴处理5
‑
10min，常温下离心10
‑
15min，离心机转速为12000
‑
15000rpm/min，除去不耐热的蛋白和其他杂质沉淀，取上清液得到抗菌物质抽提液。该步骤将抽提上清液进行沸水浴处理，能高效除去腔液中不耐热的蛋白，提高抗菌活性物质的耐热性能。
[0014]进一步地，所述步骤S3中的提取液由乙酸和0.01M PBS缓冲液配置而成，提取液中乙酸浓度为10％。该提取液配置方便，分离提取效果好。
[0015]进一步地，所述步骤S3具体包括：
[0016]S31、将提取液加入步骤S2获得的腔液细胞，在涡旋震荡器中充分混匀并使细胞完全裂解；
[0017]S32、将裂解液于常温下离心5
‑
10min，离心机转速为4000
‑
5000rpm/min，取上清液；
[0018]S33、将上清液于常温下离心10
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15min，离心机转速为12000
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15000rp m/min，弃除沉淀及最上层白色脂质等杂质，保留上清液得到抗菌物质抽提液。
[0019]本步骤能高效抽提出腔液中的抗菌物质，抽提效果好，纯净度高，杂质含量少，使抗菌活性物质活性强，抗菌范围广。
[0020]进一步地，所述步骤S33中将步骤S32得到的上清液离心2
‑
5次。多次离心可以有效去除杂质，使抗菌活性物质的抗菌谱增宽。
[0021]进一步地，所述步骤S5中的透析液由乙酸和0.01M PBS缓冲液配置而成，透析液中乙酸浓度为0.1％。该透析液配置方便，分离纯化效果好。
[0022]进一步地，所述步骤S5具体包括：
[0023]S51、将步骤S4获得的抗菌物质纯化液放入孔径为1kD的透析袋中，置于透析液中，在2
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5℃温度下透析12
‑
24h；
[0024]S52、将透析袋置于新的透析液中，在2
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5℃温度下透析12
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24h；
[0025]S53、透析上清用1kD超滤管进行离心超滤浓缩，所得上清液为可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。
[0026]本步骤对抗菌活性物质进行纯化，最终得到的上清液纯度高，抗菌能力强。
[0027]进一步地，所述步骤S2具体包括：将步骤S1得到的腔液在2
‑
5℃环境中静置8
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12h，进行离心，离心机转速为3000
‑
4000rpm/min，除去上清液，得到底部白色的腔液细胞。本步骤对腔液进行分离，获得具有抗菌活性物质的白色腔液细胞，便于后续抗菌活性物质抽提。
[0028]进一步地，所述步骤S1具体包括：将可口革囊星虫清洗干净，在可口革囊星虫的尾端基部开口，将腔液挤入离心管收集。本步骤操作简单，可以快速采集可口革囊星虫废弃腔液，变废为宝。
附图说明
[0029]图1是本专利技术实施例一中可口革囊星虫腔液细胞经过离心后不同细胞层的分布；
[0030]图2是本专利技术实验例一中使用琼脂扩散技术对可口革囊星虫腔液的抗菌活性物质的抗菌活性鉴定结果；
[0031]图3是本专利技术实验例二中电子扫描显微镜观察的可口革囊星虫腔液的抗菌活性物质对细菌影响的结果。
具体实施方式
[0032]为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本专利技术的具体实施例做详细的说明。
[0033]本专利技术的实施例一至三为可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，需要提前配置提取液和透析液，先配制约3L 0.01M PBS缓冲溶液，取90mL PBS缓冲溶液加入10mL冰醋酸配制提取液，提取液中乙酸浓度为10％；再取2L 0.01M PB本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、采集可口革囊星虫腔液；S2、从腔液中分离出腔液细胞；S3、将提取液加入腔液细胞，混匀并使细胞完全裂解，裂解液离心，取上清液离心，去除沉淀及杂质，得到抗菌物质抽提液；S4、将抽提上清液用沸水浴处理，离心去除不耐热的蛋白及杂质沉淀，得到抗菌物质纯化液；S5、对抗菌物质纯化液用透析液进行透析，透析后进行离心超滤浓缩，得到可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质。2.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S4具体包括：将步骤S3获得的抽提上清液在100℃沸水浴处理5
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10min，常温下离心10
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15min，离心机转速为12000
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15000rpm/min，除去不耐热的蛋白和其他杂质沉淀，取上清液得到抗菌物质抽提液。3.根据权利要求1所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S3中的提取液由乙酸和0.01M PBS缓冲液配置而成，提取液中乙酸浓度为10％。4.根据权利要求3所述的可口革囊星虫腔液细胞的抗菌活性物质提取方法，其特征在于，所述步骤S3具体包括：S31、将提取液加入步骤S2获得的腔液细胞，在涡旋震荡器中充分混匀并使细胞完全裂解；S32、将裂解液于常温下离心5
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10min，离心机转速为4000
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5000rpm/min，取上清液；S33、将上清液于常温下离心10
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15min，离心机转速为12000
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【专利技术属性】
技术研发人员：周素明，李腾腾，舒凤玲，周芮瑶，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：