一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖含量测定方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，涉及一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量测定方法，具体地说是一种容量法测定低分子量岩藻糖化糖胺聚糖含量的方法。将对照品和供试品分别进行阳离子交换处理，加入碱性滴定液滴定，记录硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积，通过比较计算得出低分子量岩藻糖化糖胺聚糖供试品中岩藻糖化糖胺聚糖的含量。本发明专利技术操作简单，经济高效，适宜于工艺规模化生产。适宜于工艺规模化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖含量测定方法


[0001]本专利技术属于医药
，涉及一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量测定方法，具体地说是一种容量法测定低分子量岩藻糖化糖胺聚糖含量测定的方法。

技术介绍

[0002]岩藻糖化糖胺聚糖(Fucosylated Glycosaminoglycan,FG)是迄今仅见于棘皮动物中的一种具有特殊化学结构及药理活性的糖胺聚糖，其具有类似硫酸软骨素主链，并存在岩藻糖基(Fucosyl,Fuc)侧链取代的糖胺聚糖类似物(Yoshida et.al,Tetrahedron Lett,1992,33:4959-62；et.al,J Biol Chem,1996,271:23973-84)。LFG(Low Molecular Weight Fucosylated Glycosaminoglycan，低分子量岩藻糖化糖胺聚糖，以下简称“LFG”)是自海参体壁提取解聚所得糖胺聚糖衍生物，由岩藻糖、N-乙酰氨基半乳糖和葡萄糖醛酸聚合而成。LFG为多糖类药物，由于多糖本身复杂的结构和多分散性，所以质量控制比较困难。糖含量测定是多糖类药物研究的必要步骤，也是质量控制和产品标准拟定的重要内容，由于多糖类药物来源多样，结构类型不同，故而多糖的测定方法有很多种。多糖类药物中常见的糖基有中性的已糖、戊糖和脱氧已糖，负电型的糖醛酸、唾液酸，正电性的氨基糖等，可针对不同多糖化学结构的不同或水解为单糖建立专属性的方法进行测定。
[0003]鉴于LFG为大分子多糖类物质，由一系列不同分子量的寡糖链组成，较为复杂，不适合上述常规单糖的含量测定方法。曾有研究采用高效凝胶色谱法进行了定量研究，但考虑到多糖本身为聚合物，实际分析测定中，凝胶排阻色谱的影响因素较多，比如色谱柱耐用性较差，峰展较宽，基线不易平衡，重现性较差，鉴于此，需建立一种新的含量测定方法。现有报道中未有采用容量法测定岩藻糖化糖胺聚糖的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量测定方法，用于监控一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的质量，保障低分子量岩藻糖化糖胺聚糖产品质量的稳定性和可控性，推动低分子量岩藻糖化糖胺聚糖在医药、食品等领域的应用。
[0005]本专利技术提供一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量测定方法，所述岩藻糖化糖胺聚糖具有如下的结构：
[0006][0007]式中，
[0008]R1、R2、R3、R4、R5任选为相互独立的-H或-SO3H；
[0009]R6任选为-H、取代或未取代的C1-C6烃基或C7-C12芳基；
[0010]R7任选为-H、-SO3H、C2-C5酰基；
[0011]R8任选为式(II)、式(III)或式(IV)所示基团：
[0012][0013][0014]其式(II)、(III)和式(IV)中，
[0015]R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7均同上定义；
[0016]R9和R
10
任选为-H、取代或未取代的C1-C6烃基或C
7-C
12
芳基；
[0017]R
11
任选为-NHR
12
、-OR
13
，其中R
12
和R
13
任选为-H、取代或未取代的C
1-C6烃基或C
7-C
12
芳基；且n是任选为0或1～8的自然数；
[0018]测量方法为将所述低分子量岩藻糖化糖胺聚糖对照品进行去阳离子处理，加入滴定液滴定，滴定过程中记录电导值的变化，并测定对照品消耗滴定液的体积；以电导率为纵坐标，以滴定液的体积为横坐标，绘制滴定曲线；分别对滴定曲线的突然下降，稍微爬升，急剧上升的3个线性部分图形作出第一、第二、第三条最佳直线；在第二条直线和第三条直线的交点对横坐标作垂直线，该垂线与横坐标的交点即为硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积。根据滴定曲线计算对照品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积，进而计算出对照品的质量与对照品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液体积的比值R。同时对待测低分子量岩藻糖化糖胺聚糖供试品进行滴定，并根据R计算出其中低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的
含量，所述滴定液为碱性溶液，优选地为氢氧化钠溶液，更优选地为浓度为0.02～0.1mol/L的氢氧化钠溶液。
[0019]在本专利技术的一种具体实施方式中，采用如下步骤：
[0020](1)取本品适量，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含5mg的溶液，作为供试品溶液；
[0021](2)取2ml供试品溶液加入阳离子交换树脂柱上样，用15ml水缓慢洗入小烧杯中，置电磁搅拌器上，浸入电极，搅拌，待电导读数稳定后，记录初始读数；
[0022](3)用移液枪加入滴定液50μL，当电导读数稳定后，记录并继续滴定，直至电导值变化变缓，加入10μL滴定液，当电导值又剧烈变化时，加入50μL滴定液，直至电导值有规律的升高，至终点(电导值恢复到开始滴定时)，记录下滴定液消耗的体积。
[0023]然后按照如下方法计算供试品中岩藻糖化糖胺聚糖含量：
[0024][0025]其中，V为供试品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积；
[0026]R为岩藻糖化糖胺聚糖对照品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液体积与对照品质量的比值；
[0027]m为岩藻糖化糖胺聚糖供试品称样量，以干燥品计。
[0028]本专利技术提供的快速测量一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的方法，操作简单，准确度好，经济高效。非常适合工业规模化生产中对产品批次检验，质量控制的推广和应用。
附图说明
[0029]图1低分子量岩藻糖化糖胺聚糖滴定曲线。
具体实施方式
[0030]实施例1LFG含量测定方法验证
[0031]1、设备、试剂、对照品和样品
[0032]1.1主要设备信息
[0033]表1主要设备信息表
[0034][0035]1.2主要试剂信息
[0036]表2主要试剂信息表
[0037][0038][0039]1.3对照品信息
[0040]表3对照品信息表
[0041][0042]注：对照品含量以HPLC纯度(示差检测器，面积归一化)表示，以干燥品计，经过标定后得到滴定系数。
[0043]实施例所使用低分子量岩藻糖化糖胺聚糖供试品根据中国专利201410007855公开的方法，从海参中提取得到。
[0044]2.测定方法
[0045]2.1树脂处理
[0046]取一定量732强酸性阳离子交换树脂，用蒸馏水(新沸放冷)漂洗干净，浸泡1h使其充分膨胀，用4倍树脂体积的1mol/L HCl溶液搅拌浸泡1h，蒸馏水洗至中性；用4倍树脂体积的1mol/L NaOH溶液搅拌浸泡1h，蒸馏水洗至中性；最后用4倍量1mol/L HCl溶液搅拌浸泡1h，蒸馏水洗至中性，备用。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量测定方法，所述岩藻糖化糖胺聚糖具有如下的结构：式中，R1、R2、R3、R4、R5任选为相互独立的-H或-SO3H；R6任选为-H、取代或未取代的C1-C6烃基或C7-C12芳基；R7任选为-H、-SO3H、C2-C5酰基；R8任选为式(II)、式(III)或式(IV)所示基团：其式(II)、(III)和式(IV)中，R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7均同上定义；R9和R
10
任选为-H、取代或未取代的C1-C6烃基或C7-C12芳基；
R
11
任选为-NHR
12
、-OR
13
，其中R
12
和R
13
任选为-H、取代或未取代的C1-C6烃基或C7-C12芳基；且n是任选为0或1～8的自然数；其特征在于：将所述低分子量岩藻糖化糖胺聚糖对照品进行阳离子交换处理，以碱性溶液为滴定液进行滴定，滴定过程中记录电导值的变化，并绘出滴定曲线；根据滴定曲线计算对照品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积，进而计算出对照品的质量与对照品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液体积的比值R；用同样的方法，滴定测量并计算出低分子量岩藻糖化糖胺聚糖供试品中硫酸根和羧酸根共同消耗滴定液的体积V，根据对照品的R计算出供试品中低分子量岩藻糖化糖胺聚糖的含量。2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：李振国，周剑波，务勇圣，张勇纯，王怡，王思瑶，韦怀福，郭亚芳，赵孝玉，徐春红，
申请(专利权)人：九芝堂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：