本公开涉及一种靶向CPSG4的人源化嵌合抗原受体及其应用，包含人源化的抗CSPG4结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号转导结构域，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分。本公开还涉及表达所述靶向CPSG4的人源化嵌合抗原受体的免疫效应细胞，及其应用。用。用。
【技术实现步骤摘要】
一种靶向CPSG4的人源化嵌合抗原受体及表达该嵌抗原受体的免疫效应细胞及其应用
[0001]本公开涉及生物医药领域，特别涉及一种靶向CPSG4的人源化嵌合抗原受体、表达靶向CPSG4的人源化嵌合抗原受体的免疫效应细胞，及其应用。
技术介绍
[0002]癌症目前是世界上死亡率最高的病种之一，而近年来针对癌症的疗法的研究也已经从传统的手术、放疗、化疗向靶向治疗、免疫治疗等精准治疗方向转变。而精准治疗的关键就是有效而安全的靶点的选择。
[0003]硫酸软骨素蛋白聚糖4(Chondroitin sulfate proteoglycan 4，CSPG4)，又称高分子量黑色素瘤相关抗原(High molecular weight-melanoma-associated antigen,HMW-MAA)或者黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白多糖(Melanoma-associated chondroitin sulfate proteoglycan，MCSP)是硫酸软骨素蛋白聚糖家族中的一员，首先被发现在黑色素瘤中高表达。后期研究中发现CSPG4也在其他的恶性实体瘤诸如脑胶质母细胞瘤、三阴乳腺癌、头颈鳞状细胞癌和间皮瘤中高表达，同时CSPG4在实体瘤内部的毛细血管表面表达同样很高。相比之下，CSPG4在正常组织和关键器官中表达极低。此外，CSPG4可以调节细胞与基质的相互作用，激活下游的ERK、FAK等信号通路，在肿瘤细胞的增殖、迁移、血管形成和转移中起重要作用。
[0004]嵌合抗原受体-T细胞疗法通过基因改造的T细胞靶向肿瘤细胞表面抗原，从而杀伤肿瘤细胞。相比较传统的手术放化疗，嵌合抗原受体-T细胞疗法靶向性更高；相比于抗体疗法，其具有更强的肿瘤杀伤作用，对恶性肿瘤的疗效更好。这一疗法在血液肿瘤中的成功也为其进入实体瘤治疗领域奠定了基础。鉴于CSPG4在恶性实体瘤表面高表达，而在正常组织中表达很低，并且它在肿瘤的发生和转移过程中起重要作用，这使它成为很好的嵌合抗原受体-T细胞疗法的靶点。本公开中制备了靶向CSPG4的人源化嵌合抗原受体，并在结构上进行了优化。
技术实现思路
[0005]本公开的目的在于提供一种靶向CSPG4的人源化嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)，表达该CAR的免疫效应细胞，以及他们在癌症诊断、治疗和预防方面的应用。
[0006]具体来讲，本公开提供了如下技术方案：
[0007]在一方面，本公开提供一种靶向CSPG4的人源化嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：抗CSPG4结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号转导结构域。
[0008]在一方面，本公开的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:5-7或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:10-12或其任何变体的轻链CDR，其特征在于：所
述抗CSPG4结合结构域是人源化的。
[0009]根据前述任一方面的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域是人源化的是指所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的。
[0010]根据前述任一方面的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的是指，所述重链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:16-19或其任何变体的重链FR；和/或，所述轻链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:20-23或其任何变体的轻链FR。
[0011]根据前述任一方面的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的是指，所述重链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:16或其任何变体的重链FR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:17或其任何变体的重链FR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:18或其任何变体的重链FR3，选自氨基酸序列SEQ ID NO:19或其任何变体的重链FR4；和/或，选自氨基酸序列SEQ ID NO:20或其任何变体的轻链FR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:21或其任何变体的轻链FR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:22或其任何变体的轻链FR3，选自氨基酸序列SEQ ID NO:23或其任何变体的轻链FR4。
[0012]根据前述任一方面的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:5或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:6或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:7或其任何变体的重链CDR3；和/或，选自氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:11或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:12或其任何变体的轻链CDR3。
[0013]根据前述任一方面的CAR，其中，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:4或其任何变体的重链可变区序列；和/或，选自氨基酸序列SEQ ID NO:9或其任何变体的轻链可变区序列。
[0014]根据前述任一方面的CAR，其中，其中，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4单链抗体(scFv)，优选地，所述抗CSPG4单链抗体的氨基酸序列选自SEQ ID NO：2、14或其任何变体的氨基酸序列。
[0015]根据前述任一方面的CAR，其中，其中，所述抗CSPG4单链抗体的重链和轻链通过接头可操作性地连接，优选地，所述接头包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:15或其任何变体的氨基酸序列。
[0016]根据前述任一方面的CAR，其中，所述跨膜结构域选自TCR的α、β、ζ链，CD3ε，CD3ζ，CD4，CD5,CD8α，CD9，CD16，CD22，CD27，CD28，CD33，CD37，CD45，CD64，CD80，CD86，CD134，4-1BB，CD152，CD154，PD-1跨膜结构域中的一种或多种；优选地，所述跨膜结构域选自CD8α，CD4，CD45，PD-1，CD154，CD28跨膜结构域中的一种或多种；优选地，所述跨膜结构域选自CD8α，CD28跨膜结构域中的一种或多种；更优选地，所述跨膜结构域的氨基酸序列选自SEQ ID NO：27或其任何变体的氨基酸序列。
[0017]根据前述任一方面的CAR，其中，所述铰链区选自CD8的胞外铰链区、IgG1 Fc CH2CH3铰链区、IgD铰链区、CD28胞外铰链区、IgG4 Fc CH2CH3铰链区和CD4的胞外铰链区中的一种或多种；优选地，所述铰链区为CD8α铰链区；更优选地，所述铰链区的氨基酸序列选自SEQ ID NO：25或其任何变体的氨基酸序列。
[0018]根据前述任一方面的CAR，其中，所述信号转导结构域选自本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.靶向CSPG4的人源化嵌合抗原受体(CAR)，所述CAR包含：抗CSPG4结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号转导结构域，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:5-7或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO:10-12或其任何变体的轻链CDR，其特征在于：所述抗CSPG4结合结构域是人源化的。2.根据权利要求1的人源化嵌合抗原受体(CAR)，其中，所述抗CSPG4结合结构域是人源化的是指所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的。3.根据前述任一项权利要求的人源化嵌合抗原受体(CAR)，其中，所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的是指，所述重链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:16-19或其任何变体的重链FR；和/或，所述轻链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:20-23或其任何变体的轻链FR。4.根据前述任一项权利要求的人源化嵌合抗原受体(CAR)，其中，所述抗CSPG4结合结构域的可变区框架是人源化的是指，所述重链可变区框架包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:16或其任何变体的重链FR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:17或其任何变体的重链FR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:18或其任何变体的重链FR3，选自氨基酸序列SEQ ID NO:19或其任何变体的重链FR4；和/或，选自氨基酸序列SEQ ID NO:20或其任何变体的轻链FR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:21或其任何变体的轻链FR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:22或其任何变体的轻链FR3，选自氨基酸序列SEQ ID NO:23或其任何变体的轻链FR4。5.根据前述任一项权利要求的人源化嵌合抗原受体(CAR)，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:5或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:6或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:7或其任何变体的重链CDR3；和/或，选自氨基酸序列SEQ ID NO:10或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO:11或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO:12或其任何变体的轻链CDR3。6.根据前述权利要求任一项的人源化嵌合抗原受体(CAR)，所述抗CSPG4结合结构域包含抗CSPG4抗体或抗原结合部分，所述抗体或抗原结合部分包含选自氨基酸序列SEQ ID NO:4...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙闯，冯新华，赵斌，
申请(专利权)人：博源润生医药杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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