维生素B制造技术

本发明专利技术公开了一种维生素B

【技术实现步骤摘要】
维生素B
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的检测方法


[0001]本专利技术涉及食品领域，具体涉及一种食品领域汇总营养物质的分析检测
，更具体而言涉及乳制品中四种维生素B
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的检测方法。

技术介绍

[0002]维生素B
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(Vitamin B
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，简称VB
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)，又称为钴胺素，通常指具有相同生物活性的钴胺素族，也是唯一含金属元素的水溶性维生素。维生素B
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是人体必须的一个重要的营养素，其在单碳(甲基)代谢中作为几种关键酶的辅酶发挥作用；在诸多生化反应中都起到了协同作用，它是DNA合成过程中重要的辅酶，对红细胞的形成和生长有促进作用，参与了神经系统和免疫系统的调节以及人体内细胞的代谢等生理活动，对人类生长发育至关重要。
[0003]维生素B
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仅在微生物中产生(甲钴胺、腺苷钴胺和羟钴)，因此它的食物来源仅限于非植物来源，如肉类或其他动物来源。理论上，维生素B
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缺乏症在正常健康人群中很少见，但纯素食者、孕妇、婴儿和饮食失调患者由于其特殊的饮食习惯要求和生理需求，容易出现维生素B
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缺乏症。在缺乏维生素B
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的情况下，增加叶酸供应可以治愈贫血，但不能治愈神经系统症状。若缺乏维生素B
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，可以导致周围神经炎和儿童贫血，也会影响婴幼儿的发育等，但是维生素B
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的过量补充也会引发过敏反应等不良影响。所以维生素B
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是婴幼儿配方食品营养的重要指标，检测要求也更要准确。
[0004]另外，已知的是，维生素B
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存在形式是羟钴胺素、5
’‑
脱氧腺苷钴胺素、甲钴胺素以及氰钴胺素。氰钴胺素相对容易大量生产，具有较高的稳定性，所以它是在食品加工中使用最多的维生素B
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的形式，然而，氰钴胺素在氰化物基团被酶促去除之前没有生物活性，氰钴胺素只有在体内转化为甲钴胺素和5
’‑
脱氧腺苷钴胺素后，才能发挥作用。
[0005]维生素B
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合成形式的生物利用度与所给量成反比，在接受预防性或治疗性补充剂的人和动物中低于4％。羟钴胺素、5
’‑
脱氧腺苷钴胺素、甲钴胺素是维生素B
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的天然存在形式。5
’‑
脱氧腺苷钴胺素和甲钴胺素在哺乳动物细胞中具有辅酶活性并且具有生物活性，而羟钴胺素是它们光解的产物。Matte等在2012年(J.J.Matte,M.Britten,C.L.Girard,Animal Frontiers,Volume 4,Issue 2,April 2014,Pages 32
–
37)的一项使用猪作为人类的动物模型的实验中指出，与每天摄入维生素补充剂中使用的合成形式(氰钴胺素)相比，每天摄入天然形式的维生素B
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带来的吸收更有效。
[0006]另外，评估不同形式的维生素B
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的肠道吸收的可用性也是评估其来源质量的重要因素，维生素B
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缺乏，实质上是体内甲钴胺和腺苷钴胺缺乏。因此，随着膳食补充剂和婴幼儿配方奶粉市场的发展以及消费者的需求，越来越多的新产品含有甲钴胺等“天然形式的维生素B
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的检测方法至关重要。
[0007]目前，测定VB
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的方法有GB 5413.14
‑
2010食品安全国家标准《婴幼儿食品和乳品中维生素B
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的测定》，所采用的方法为微生物法。美国分析化学家协会(AOAC)官方法2016.017，此方法利用氰化物将所有的VB
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形式改变为氰钴胺素，并在每次分析中使用一次性使用的专用免疫柱，虽然提高了方法的灵敏度，但增加了额外的成本。还有利用钴元素简
介定量的ICP
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MS方法，酶联免疫方法等。这些方法均只能测定VB
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的总量，无法区分不同形式的VB
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。
[0008]可见，已经有很多方法对食品、强化食品和膳食补充剂中维生素B12的含量测定进行了研究。由于维生素B12强化量低，大多数方法只能测量总的VB
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水平。由于氰钴胺素是所有四种VB
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中最稳定的形式。因此，目前检测食品和膳食补充剂中VB
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的许多方法都是利用氰化物将所有VB
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形式改变为氰钴胺，通过氰钴胺素的含量反映出总体的含量水平。
[0009]目前而言，这些方法在测定VB
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的总量是成功的，然而，在实验室中使用氰化物存在安全问题。微生物检测法是常用的维生素B
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检测方法，微生物通常选用利什曼乳杆菌。这个方法拥有高灵敏性，但是由于一些无活性的钴胺素前体(咕啉(Corrin)，C
19
H
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N4)会干扰微生物的生长而使其缺失特异性，导致选择性较差，有时会导致高估。无活性的钴胺素前体会干扰活性VB
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的检测，高估了总的VB
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水平。
[0010]因此，开发出可以区分无活性的钴胺素前体，并且可以区分四种VB
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的方法至关重要。

技术实现思路

[0011]专利技术要解决的问题
[0012]为解决现有维生素B
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检测方法中，无法区分四种维生素B
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的问题，以及存在氰化物使用，以及钴胺素前体的存在干扰检测结果等问题，本专利技术提供了一种乳制品中四种维生素B
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的检测方法，其采用二维高效液相色谱
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质谱联用技术，样品预先用胃蛋白酶消化，使与蛋白质结合维生素B
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被释放，初提取液通过一维色谱使用尺寸排组色谱柱使大分子蛋白先于4种维生素B
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被洗脱，4种维生素B
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由于分子量相对蛋白质小，被后洗脱，根据洗脱时间，切换洗脱液于二维反相分析柱，使4种维生素B
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被分离，质谱检测选择147.1(m/z)作为定量离子，能有效的避免无活性的钴胺素前体的干扰，提高了方法的准确性。
[0013]用于解决问题的方案
[0014]经过专利技术人潜心研究，发现通过以下方案能够解决上述技术问题：
[0015][1].本专利技术提供了一种乳制品中四种维生素B
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的检测方法，其中，所述的检测方法包括：
[0016]样品前处理的步骤：采用蛋白酶对待测乳制品样品进行酶解反应，获得初提取液；
[0017]二维液相色谱分离的步骤：使用二维高效液相色谱进行色谱分离，使所述四种维生素本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳制品中四种维生素B
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的检测方法，其特征在于，所述的检测方法包括：样品前处理的步骤：采用蛋白酶对待测乳制品样品进行酶解反应，获得初提取液；二维液相色谱分离的步骤：使用二维高效液相色谱进行色谱分离，使所述四种维生素B
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从所述初提取液中分离；所述二维高效液相色谱包括一维液相尺寸排阻色谱和二维液相反相色谱；质谱检测的步骤：将二维高效液相色谱分离后的四种维生素B
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进行质谱检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶中的一种或多种。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述四种维生素B
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的定量离子均为147.1m/z；和/或所述四种维生素B
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为羟钴胺素、5
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脱氧腺苷钴胺素、甲钴胺素和氰钴胺素。4.根据权利要求1～3中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述一维液相尺寸排阻色谱的条件为：流动相为体积百分比为5～15％极性溶剂的水溶液。5.根据权利要求1～4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述二维液相反相色谱的条件为：流动相包括A相和B相，并进行梯度洗脱，其中A相为缓冲溶液相，B相为极性溶剂相。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，以体积百分比计的所述梯度洗脱包括：0m...

【专利技术属性】
技术研发人员：王象欣，解庆刚，李剑桥，张维，石红丽，蒋士龙，陈博，梁爱梅，冷友斌，
申请(专利权)人：黑龙江飞鹤乳业有限公司，
类型：发明
国别省市：