本发明专利技术提供一种野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用，属于药物检测技术领域，所述构建方法是先配制供试品溶液、参照药材溶液和对照品溶液，然后再以乙腈（A）和0.1~0.3wt%的磷酸水溶液（B）共同作为流动相，进行高效液相色谱检测，得野马追配方颗粒的指纹图谱；并利用所述构建方法获得野马追配方颗粒的标准指纹图谱，所述标准指纹图谱用于野马追配方颗粒的研究/开发/生产/临床应用全过程中质量评价或控制。本发明专利技术的野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，能够仅通过高效液相色谱法就可检测出野马追配方颗粒中的主要药材成分，全面反映野马追配方颗粒的质量状况。全面反映野马追配方颗粒的质量状况。全面反映野马追配方颗粒的质量状况。
【技术实现步骤摘要】
野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用
[0001]本专利技术涉及药物检测技术，尤其涉及一种野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。
技术介绍
[0002]特征图谱是建立一种用于分析被测物质中某类或某几类成分的色谱图谱或光谱图谱。目前，特征图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效成分，是当前中药界关注的热点问题，近年来，人们已经逐步认识到，只针对某一化学成分而形成的质量控制方法，已经不能恰当的反映产品的内在质量，中药特征图谱作为一种多指标的质量控制模式，能够更好的控制产品内在质量。因此，构建野马追配方颗粒指纹图谱对于野马追配方颗粒的质量控制就显得尤为重要了。
[0003]目前，对野马追的质量控制，中国药典中公开的是以金丝桃苷对照品，通过高效液相色谱法，以乙腈
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1％醋酸溶液(10︰90)为流动相在检测波长为255nm条件下进行检测，该检测方法无法全面的反映产品的质量状况；
[0004]同时在中国药典中对于供试品溶液的制备，是取1g野马追加至20mL的70％甲醇，进行加热回流提取，提取所得上清液浓缩后，稀释至5mL制得。在中国药典中，制备的供试品浓度较大，这是为了更好的分离出金丝桃苷峰，但这样不可避免的会导致其它提取物的含量超出检测范围。
[0005]中国专利技术专利201910798452.1中公开了一种野马追的质量检测方法，并公开了采用100mL乙醇萃取20g野马追，制得供试品溶液，并且还公开了采用超高效液相色谱
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质谱仪，以乙腈
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0.1％醋酸溶液作为流动相进行梯度洗脱及检测。该方法通过获取高浓度的野马追供试品溶液，然后利用高效液相色谱技术将供试品溶液中的不同成分进行分离，再利用质谱仪进行结构分析，从而有效检测野马追的有效成分，但超高效液相色谱
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质谱仪价格昂贵，并不适于普通或小型实验室进行野马追的质量监控。
[0006]肖晶等发表的《HPLC法测定野马追药材及其制剂中金丝桃苷的含量》(《中草药》第36卷第1期2005年1月)中公开了采用50mL的70％甲醇提取0.5g野马追后浓缩，再稀释至5mL制得供试品溶液，并公开了以乙腈
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1％醋酸溶液(16︰84)为流动相在检测波长为360nm条件下进行检测。该方法能够很好的检测出金丝桃苷及其含量，但并无法全面的反映产品的质量状况。并且，为了更好的分离出金丝桃苷峰，该方法制备的供试品浓度也相对较大，这就不可避免的会导致其它提取物的含量超出检测范围。
[0007]罗敏敏等发表的《HPLC法测定野马追中野马追内酯A，B金丝桃苷的含量》(《中国现代应用药学》2012年11月第29卷第11期)中公开了采用400mL的90％甲醇提取20g野马追3次后，合并所得甲醇溶液并浓缩，再稀释至25mL制得供试品溶液，并公开了以乙腈
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水(27︰73)为流动相在检测波长为220nm条件下进行检测。该方法同样存在上述无法全面反映产品的质量状况，供试品浓度较大，其它提取物的含量超出检测范围的问题。
技术实现思路
[0008]针对上述问题，本专利技术提供一种野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法及其标准指纹图谱和应用。
[0009]为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案为：
[0010]一种野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
[0011]1)供试品溶液、参照药材溶液和对照品溶液的配制
[0012]取野马追配方颗粒，制备供试品溶液；
[0013]取野马追药材，制备参照药材溶液；
[0014]取金丝桃苷、槲皮素、山柰素和异鼠李素，制备对照品溶液；
[0015]2)指纹图谱构建
[0016]分别取供试品溶液、参照药材溶液和对照品溶液进行高效液相色谱检测，得所述野马追配方颗粒指纹图谱；
[0017]所述高效液相色谱检测的流动相A为乙腈、流动相B为浓度为0.1～0.3wt％的磷酸水溶液。
[0018]进一步的，所述供试品溶液是取野马追配方颗粒加至50～65wt％甲醇水溶液中，经超声提取、定容、过滤制得。
[0019]进一步的，所述供试品溶液制备的具体步骤如下：
[0020]取1重量份的野马追配方颗粒研细((一般研磨后能够过6号筛))后，加至50体积份的50～65wt％甲醇水溶液中，称定重量，再经超声提取，定容至称定的重量，摇匀，过滤，即得所述供试品溶液；
[0021]其中，重量份与体积份之间的对应关系为g：mL。
[0022]进一步的，所述高效液相色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；
[0023]所述梯度洗脱的洗脱条件为：
[0024]0～15min，15％
→
20％流动相A，85％
→
80％流动相B；
[0025]15～20min，20％
→
25％流动相A，80％
→
75％流动相B；
[0026]20～40min，25％
→
35％流动相A，75％
→
65％流动相B；
[0027]40～55min，35％
→
45％流动相A，65％
→
55％流动相B；
[0028]55～65min，45％
→
50％流动相A，55％
→
50％流动相B。
[0029]进一步的，所述高效液相色谱检测的检测波长为250nm。
[0030]进一步的，所述参照药材溶液制备的具体步骤如下：
[0031]取1重量份的野马追药材研细后，加至25体积份的50～65wt％甲醇水溶液中，称定重量，再经超声提取，定容至称定的重量，摇匀，过滤，即得所述参照药材溶液；
[0032]其中，重量份与体积份之间的对应关系为g：mL。
[0033]进一步的，所述对照品溶液是取金丝桃苷、槲皮素、山柰素和异鼠李素加至甲醇中溶解，定容制得。
[0034]一种上述构建方法获得的野马追配方颗粒的标准指纹图谱，所得标准指纹图谱包括10个共有特征峰，以1号峰金丝桃苷为参照峰，计算其共有特征峰的相对保留时间，其相对保留时间均应在规定值的
±
10％范围之内，其共有特征峰的相对保留时间分别为：
[0035]1号峰：1.000
±
0.1000，2号峰：1.039
±
0.1039，3号峰：1.822
±
0.1822，4号峰：
1.894
±
0.1894，5号峰：1.991
±
0.1991，6号峰：2.084
±
0.2084，7号峰：2.520
±
0.2520，8号峰：2.574
±
0.2574，9号峰：2.687
±
0.2687，10号峰：2.913...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：1)供试品溶液、参照药材溶液和对照品溶液的配制取野马追配方颗粒，制备供试品溶液；取野马追药材，制备参照药材溶液；取金丝桃苷、槲皮素、山柰素和异鼠李素，制备对照品溶液；2)指纹图谱构建分别取供试品溶液、参照药材溶液和对照品溶液进行高效液相色谱检测，得所述野马追配方颗粒指纹图谱；所述高效液相色谱检测的流动相A为乙腈、流动相B为浓度为0.1～0.3wt％的磷酸水溶液。2.根据权利要求1所述的野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液是取野马追配方颗粒加至50～65wt％甲醇水溶液中，经超声提取、定容、过滤制得。3.根据权利要求2所述的野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述供试品溶液制备的具体步骤如下：取1重量份的野马追配方颗粒加至50体积份的50～65wt％甲醇水溶液中，称定重量，再经超声提取，定容至称定的重量，摇匀，过滤，即得所述供试品溶液；其中，重量份与体积份之间的对应关系为g：mL。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的野马追配方颗粒指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测的洗脱方式为梯度洗脱；所述梯度洗脱的洗脱条件为：0～15min，15％
→
20％流动相A，85％
→
80％流动相B；15～20min，20％
→
25％流动相A，80％
→
75％流动相B；20～40min，25％
→
35％流动相A，75％
→
65％流动相B；40～55min，35％
→
45％流动相A，65％
→
55％流动相B；55～65min，45％
→
50％流动相A，55％
→
50％流动相B。5.根据权利要求1
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3中...
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪利，高杰，曾永祯，孙福仁，高晗，廖明丽，李倩，董博宇，李军山，王亚涛，张睿智，牛金伟，张岩岩，路晓，
申请(专利权)人：云南神威施普瑞药业有限公司河北神威药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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