一种固液双层培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及组织培养方法领域，具体公开了一种固液双层培养基及其制备方法和应用，固液双层培养基包括上层的液体培养基和下层的固体培养基。本发明专利技术通过制备固液双层培养基用于长寿花外植体培养，发现其能够提高愈伤组织的诱导率，提高芽分化率。提高芽分化率。提高芽分化率。

【技术实现步骤摘要】
一种固液双层培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及组织培养方法领域，具体涉及一种固液双层培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]植物组织培养是把植物的器官、组织以致单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物组织培养过程中，培养基极为重要，决定了组培的结果。
[0003]长寿花(Kalanchoe blossfeldiana)是景天科伽蓝菜属的观叶和观花植物，为优质地室内观赏花卉。其叶片深厚多汁、色泽鲜艳，在低温和光线较强时，常出现泛红色，因此长寿花既可观花又可观叶，是一种具有较高观赏价值的两用花卉，又因其名字寓意健康长寿，因此具有广阔的市场发展前景。长寿花常采用带腋芽茎段和带叶柄的叶片进行扦插繁殖，但是繁殖方法易受季节影响，繁殖系数低，速度慢，远不能满足生产上的需求。而植物组织培养选取便捷，一年四季都可以进行，没有时间的限定，并且繁殖系数高、繁殖时间短、成本比较低、可常年进行大规模生产等优点，补充了其常规繁殖的不足，为大规模快速生产提供了技术保障。
[0004]琼脂作为固体培养基中最主要固化剂之一，其浓度直接影响着培养基的凝固效果和软硬程度，在长寿花愈伤组织的萌发阶段，培养基状态对愈伤组织形成、芽的分化及生长情况等都有着重要的影响。固体培养基可以固定材料同时满足对氧气的需求；液体培养基：材料更容易吸收营养和水分，但材料在液体培养基中不容易获得充足的氧气；固液双层培养基具有固体培养基和液体培养基两者的优点，更有利于愈伤组织的诱导和芽的分化。长寿花的很多器官、组织都可以作为外植体进行愈伤组织的诱导、不定芽分化和植株再生。然而其具体受到培养基的直接影响。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种固液双层培养基及其制备方法和应用，通过制备固液双层培养基提高了愈伤组织诱导率，提高了芽分化率，进而提高了繁殖效率。
[0006]本专利技术提供了一种固液双层培养基，所述固液双层培养基由上层培养基和下层培养基组成；
[0007]所述上层培养基配方为：MS+6
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BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L，不添加琼脂(向MS中添加6
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BA、NAA和蔗糖)；所述下层培养基配方为：MS+6
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BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L，琼脂6g/L，(向MS中添加6
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BA、NAA、蔗糖和琼脂)。
[0008]本专利技术还提供了上述固液双层培养基的制备方法，包括如下步骤：
[0009]S1，上层培养基的配制：在MS培养基中依次加入6
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BA、NAA和蔗糖，使6
‑
BA终浓度为0.2mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，蔗糖终浓度为30g/L，拌至蔗糖溶解，将pH值调整为6.0；
[0010]S2，下层培养基的配制：在MS培养基中加入6
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BA和NAA，使6
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BA终浓度为0.2mg/L，
NAA终浓度为0.1mg/L，然后加入琼脂，用量为6g/L，加热至微沸，琼脂溶解后，停止加热，加入蔗糖，搅拌至蔗糖溶解，将pH值调整为6.0，分装至培养瓶；
[0011]S3，将上述两种培养基进行高温高压灭菌；
[0012]S4，待分装灭菌后的下层培养基凝固后，注入等量灭菌后的上层培养基，温度降至室温后即可接种。
[0013]进一步地，S1
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S2中，用1mol/L HCl或1mol/L NaOH调节pH值。
[0014]进一步地，S2中，分装后的培养基厚度为0.5
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0.7cm。
[0015]进一步地，S3中，高温高压灭菌条件为121℃，20min。
[0016]本专利技术还提供了上述固液双层培养基在植物组织培养中的应用。
[0017]进一步地，所述固液双层培养基用于培养长寿花。
[0018]进一步地，所述固液双层培养基用于培养长寿花成熟叶片和带茎节的茎段。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0020]1、本专利技术制备的固液双层培养基用于长寿花外植体培养，发现其能够提高愈伤组织的诱导率，提高芽分化率，提高繁殖效率，是长寿花外植体的优质组培培养基。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1表示本专利技术中不同培养基状态下长寿花叶片愈伤组织诱导表观；
[0023]其中，图A为本专利技术对比例1的培养基中的愈伤组织；
[0024]图B为本专利技术实施例1的培养基中的愈伤组织；
[0025]图C为本专利技术对比例2的培养基中的愈伤组织；
[0026]图2表示本专利技术中不同培养基状态下长寿花茎段芽生长情况；
[0027]其中，图A为本专利技术对比例1的培养基中的愈伤组织；
[0028]图B为本专利技术实施例1的培养基中的愈伤组织；
[0029]图C为本专利技术对比例2的培养基中的愈伤组织。
具体实施方式
[0030]下面对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术各实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0031]实施例1
[0032]本实施例提供了一种固液双层培养基，所述固液双层培养基的下层为固体培养基，上层为液体培养基；
[0033]其中，下层培养基配方为：MS+6
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BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L，琼脂6g/L；
上层培养基配方为：MS+6
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BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L，不添加琼脂。
[0034]所述固液双层培养基的制备步骤如下：
[0035]S1，上层培养基的配制：在MS培养基中依次加入6
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BA、NAA和蔗糖，使6
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BA终浓度为0.2mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，蔗糖终浓度为30g/L，拌至蔗糖溶解，用1mol/L HCl或1mol/L NaOH将pH值调整为6.0；
[0036]S2，下层培养基的配制：在MS培养基中加入6
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BA和NAA，使6
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BA终浓度为0.2mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，然后加入琼脂，用量为6g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固液双层培养基，其特征在于，所述固液双层培养基由上层培养基和下层培养基组成；所述上层培养基配方为：MS+6
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BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L，不添加琼脂；所述下层培养基配方为：MS+6
‑
BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L，琼脂6g/L。2.一种权利要求1所述的固液双层培养基的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：S1，上层培养基的配制：在MS培养基中依次加入6
‑
BA、NAA和蔗糖，使6
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BA终浓度为0.2mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，蔗糖终浓度为30g/L，拌至蔗糖溶解，将pH值调整为6.0；S2，下层培养基的配制：在MS培养基中加入6
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BA和NAA，使6
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BA终浓度为0.2mg/L，NAA终浓度为0.1mg/L，然后加入琼脂，用量为6g/L，加热至微沸，琼脂溶解后，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽，郭学良，杨森，胡喜芳，刘瑞芬，张艳，李冬霞，赵会，徐正凯，郭红艳，魏广香，魏广欣，梁明慧，吴振锋，杨子涵，
申请(专利权)人：商丘师范学院，
类型：发明
国别省市：